[논문]육군자탕의 정제 개발과 성분함량 및 약리효과 평가

김명진; 최혜민; 유병우; 홍영주; 라채숙; 김민주; 김정옥

doi:10.6116/kjh.2021.36.1.67.

육군자탕의 정제 개발과 성분함량 및 약리효과 평가
Development of tablets and evaluation of ingredient content and pharmacological effects of Yukgunja-tang 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.36 no.1, 2021년, pp.67 - 76

김명진 (한국한의약진흥원) , 최혜민 (한국한의약진흥원) , 유병우 (한국한의약진흥원) , 홍영주 (한국한의약진흥원) , 라채숙 (한국한의약진흥원) , 김민주 (한국한의약진흥원) , 김정옥 (한국한의약진흥원)

Abstract ▼ AI-Helper

Objective : Yukgunja-tang is one of the herbal prescriptions widely used for functional indigestion. In this study, we evaluated the pharmacological effect through the Yukgunja-tang formulation development. Methods : The RAW 264.7 cells were pretreated with Yukgunja-tang tablet (YGJT-T : 50, 100 and 200 ㎍/㎖) and then stimulated with lipopolysaccharide (LPS : 500 ng/㎖). Cell viability, inflammatory mediators such as nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2) and inflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, and TNF-α) were measured. Also, ICR mice induced acute gastritis by oral administration of 150 mM HCl in 60% ethanol. The YGJT-T (30 mg/kg) was pretreated for 3 days, and 150 mM HCl in 60% ethanol was orally administered 1 hour after the last drug treatment. Mice were sacrificed 1 hour after oral administration of 150 mM HCl in 60% ethanol. The gastric mucosa was observed, and inflammatory cytokines in the gastric tissue were measured. Results : The marker components of YGJT-T were determined by simultaneous analysis using HPLC. In RAW 264.7 cells, pretreatment of YGJT-T was non-toxic and inhibited the production of inflammatory mediators such as NO and PGE2 and suppressed inflammatory cytokines. In addition, pretreatment of YGJT-T improved bleeding and edema due to gastric lesions caused by acute gastritis and suppressed inflammatory cytokines. Conclusion : In summary, our results confirmed that treatment with YGJT-T has anti-inflammatory and anti-gastritis effects in vitro and in vivo. Therefore, in this study, YGJT-T could support a potential strategy for the prevention and treatment of gastritis.

주제어

표/그림 (9)

표 Table 1. Composition of Yukgunja-tang
표 Table 2. Composition contents of Yukgunja-tang tablet
표 Table 3. Solvent gradient conditions for HPLC-PDA analysis
그림 Fig. 1. Simultaneous analysis used HPLC method. (A) Yukgunja-tang standard mixture and (B) Yukgunja-tang tablet (YGJT-T) are HPLC chromatogram. Identification of the ingredients used to compare with the UV spectrum of YGJT-T and standard mixture ; (C) narirutin, (D) hesperidin, (E) glycyrrhizic acid, (F) atractylenolide III.
표 Table 4. Post-compression parameters of Yukgunja-tang tablet
그림 Fig. 2. The effect of Yukgunja-tang tablet (YGJT-T) on cytotoxicity in RAW 264.7 cells. In RAW 264.7 cells, Yukgunja-tang tablet was incubated for 24 hours at the indicated dose. The cell viability was measured by MTT assay. The data obtained similar results in three experiments.
그림 Fig. 3. The effect of Yukgunja-tang tablet (YGJT-T) on NO and PGE2 production in LPS-stimulated RAW 264.7 Cells. Yukgunja-tang tablet (50, 100 and 200 ㎍/㎖) was pretreated for 1 hour and then incubated with LPS (500 ng/㎖) for 24 hours. NO and PGE2 was measured. The data obtained similar results in three experiments. ^##P < 0.01, ^###P < 0.001 vs distilled water treatment alone, *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs LPS treatment alone. "Dex" is "dexamethasone".
그림 Fig. 4. The effect of Yukgunja-tang Formulation on Pro-inflammatory Cytokine Production in RAW 264.7 Cells. Yukgunja-tang tablet (50, 100 and 200 ㎍/㎖) was pretreated for 1 hour and then incubated with LPS (500 ng/㎖) for 24 hours. Pro inflammatory cytokines such as IL-1β, IL-6, and TNF-α were measured by ELISA. The data obtained similar results in three experiments. ^##P < 0.01, ^###P < 0.001 vs distilled water treatment alone, *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs LPS treatment alone. "Dex" is "dexamethasone".
그림 Fig. 5. The effect of tablets on 150 mM HCl in 60% ethanol-induced gastritis. After pre treatment of Yukgunja-tang tablet (30 ㎎/㎏, oral) for 3 days, 0.5 ㎖ of 150 mM HCl in 60% ethanol was injected 1 hour later. It was sacrificed 1 hour after 150 mM HCl in 60% ethanol oral administration. (A) Normal mice, (B) 150 mM HCl in 60% ethanol-induced gastric lesion control mice administered with distilled water orally, (C) 150 mM HCl in 60% ethanol-induced gastritis mice administered orally with Yukgunja-tang tablet (30 ㎎/㎏), (D) Inflammatory cytokines such as IL-1β, IL-6, and TNF-α were measured by ELISA at the protein level of gastric tissue. The data obtained similar results in three experiments. ^##P < 0.01, ^###P < 0.001 vs distilled water treatment alone, *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs 150 mM HCl in 60% ethanol treatment alone.

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

있다. 따라서 본 연구는 한약탕제와 개발 제형의 화학적 동등성 평가 및 효능 분석으로 개발 제형의 안정성 및 유효성에 대한 과학적 근거 마련하고자 하였다. 또한, 국내 한약제제에 대한 소비자 만족도 조사를 한 결과 한약 및 한약제제 시장은 소비자 시장성과지수에서 가장 낮은 평가를 받았다.
염증반응이 일어나면 많은 양의 NO 및 PGE₂와 같은 염증 매개 인자들이 생성하게 된다. 본 실험에서는 육군자탕 정제가 RAW 264.7 세포에서 LPS로 유도된 iNOS 및 COX-2 발현에 의한 NO 및 PGE₂의 생성과 다양한 염증매개물질의 발현에 대하여 연구하였다. NO의 합성효소에 의해 L-아르기닌으로부터 생성되는 NO는 LPS의 자극에 의해 iNOS의 발현으로 NO를 생성하면서 면역반응에 관여하는 것으로 보고되어 있다^{27, 28)}.
본 연구에서 육군자탕 (YGJT)을 현대적인 제형인 정제로 개발하였으며, 육군자탕 정제의 성분분석 및 약리효과에 대한 평가를 하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
. 본 연구에서는 육군자탕 정제의 제형개발 및 육군자탕의 구성된 한약재의 주요성분을 분석하고 항염증 및 항위염에 대한 약리효능 평가를 진행하여 육군자탕 정제의 표준화를 위한 기초자료를 확보하고자 하였다. 육군자탕의 주요성분인 narirutin, hesperidin, glycyrrhizic acid 및 atractylenolide Ⅲ 4종의 분석을 위해 HPLC-PDA를 이용하여 각각의 성분들에 영향을 주지 않으면서 동시에 효과적으로 확인할 수 있는 동시 분석법을 확립하였다.
이에 본 연구에서는 염증 및 위 병변에 효과가 있는 육군자탕을 정제로 제형변화를 통하여 현대적인 제형에 대한 연구를 진행하였으며, 동시분석법 확립을 통하여 품질관리 방법, 항염증 및 항위염 실험을 통하여 유의성 있는 결과를 확인하였기에 보고하는 바이다.

제안 방법

1. 육군자탕의 제형 개발을 위하여 겉보기 밀도, 탭 밀도 등으로 측정으로 흐름성을 평가하였으며, 경도, 마손도 및붕해도 등의 확인을 통해 물성평가를 통해 높은 경도와 빠른 붕해도를 나타낸 정제를 제조하였다.
150 mM HCl in 60% ethanol로 유도한 급성위염에서 육군자탕의 정제에 대한 위 점막의 손상 및 염증성 사이토카인의발현 억제를 확인하였다. 먼저 위 점막의 손상 정도를 육안으로관찰한 결과, 정상군 마우스 (Fig.
2. 육군자탕 정제 (YGJT-T)의 품질검사를 위해 HPLC- PDA를 통하여 육군자탕의 4가지 지표성분인 narirutin, hesperidin, glycyrrhizic acid 및 atractylenolide Ⅲ의 동시 분석법을 확립하였다.
혼합물의 흐름성을 겉보기 밀도, 탭 밀도를 측정하여 Hausner ratio를 산출하여 평가하였다. Hausner ratio는 Excellent (1.00-1.11), Good (1.12-1.18), Fair (1.19-1.25), Passable (1.26-1.34), very poor (1.46-1.59), Very poor (>1.60)등 총 7개의 등급으로 흐름성을 평가하였다. 또한, 육군자탕 정제의 첨가제 혼합비에 따른 경도, 마손도 및 붕해도를측정하여 Table 4에 나타냈다.
ICR 마우스를 군당 6마리씩 3그룹으로 구분하여 실험을 실시하였다. 위점막 손상 유발 실험 24시간 동안 절식을 시킨 후, 실험 전에 정상군과 위점막 손상 대조군은 증류수를 경구투여하였고, 육군자탕 정제 (30 ㎎/㎏ : 1회 복용량) 투여군은 위점막 손상 유발 전 3일간 마우스용 존대를 이용하여 1회에 0.
LPS (500 ng/㎖)로 24시간 동안 자극하여 배양한 뒤, 세포의 상층 액을 획득하여 Prostaglandin E₂의 측정은 제조사의 방법에 따라 그 양을 측정하였다.
RAW 264.7 세포에서 육군자탕 정제를 전치리 후 LPS를 처리하였을 때, NO 및 PGE₂ 생성의 억제 효과를 확인하였다. 그 결과 육군자탕 정제는 100, 200 ㎍/㎖에서 NO (Fig.
7 Cells. Yukgunja-tang tablet (50, 100 and 200 ㎍/㎖) was pretreated for 1 hour and then incubated with LPS (500 ng/㎖) for 24 hours. NO and PGE₂ was measured.
흐름성을 평가하였다. 건조엑스와 첨가제 혼합물은 메스실린더에 넣어 탭 밀도를 이용하여 부피를 측정하여 나타낸 겉보기 밀도와 혼합물이 들어있는 메스실린더에 200회 tapping 한 후 측정과 Hausner ratio 값을 산출하여 흐름성을 평가하였다.
시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 사육조건은 conventional system으로 온도 23 ± 2℃, 습도 50 ± 5%, 명암주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절하였다. 고형사료와 물을 충분히 공급하였다.
5℃의 정제수를 이용하여 시험하였고, 붕해시간은 유리관 안에서 검체의 잔여물이 존재하지 않거나 남아 있어도 원형의 형태를 나타내지 않는 연질의 물질이 존재하는 시간으로 나타내었다. 마손도 평가는 10개의 정제를 friability tester (TAR 120, Ereweka, Germany)에서 4분 동안 25 rpm으로 회전시킨 후, 손실된 무게를 측정하여 수식을 이용하여 계산하였다.
. 본 연구에서는 150 mM HCl in 60% ethanol 모델을 이용하여 급성위염을 유발하였다. Ethanol 은 위의 점막을 자극하여 출혈과 손상을 유발하고 HCle 위 운동의 촉진으로 상태를 악화시키는 것으로 알려져 있다³⁰⁾.
반복 측정하였다. 붕해도 평가는 disintegration tester (Disintegration 3100, DISTEK, USA)를 사용하여 37 ± 0.5℃의 정제수를 이용하여 시험하였고, 붕해시간은 유리관 안에서 검체의 잔여물이 존재하지 않거나 남아 있어도 원형의 형태를 나타내지 않는 연질의 물질이 존재하는 시간으로 나타내었다. 마손도 평가는 10개의 정제를 friability tester (TAR 120, Ereweka, Germany)에서 4분 동안 25 rpm으로 회전시킨 후, 손실된 무게를 측정하여 수식을 이용하여 계산하였다.
7 세포의 생존율은 MTT 환원으로 미토콘드리아 탈수소 효소에 의해 자주빛의 formazan 생성물을 측정하는 분석법이다. 세포들은 DMEM/high glucose배지에서 2 × 10⁵ 의 밀도로 현탁하여 여러가지 농도로 YGJT-T을 24시간 동안 처리하였다. MTT용액 5 ㎎/㎖의 농도를 첨가하여 30분 동안 배양하였다.
세포들은 DMEM/high glucose배지에서 2 × 10⁵의 밀도로 현탁하여 여러가지 농도의 YGJT-T을 처리하였다. LPS (500 ng/㎖)로 24시간 동안 자극하여 배양한 뒤, 세포의 상층 액을 획득하여 96 well plate에 50 ㎕ 후 griess reagent (A : 0.
세포들은 DMEM/high glucose배지에서 2 × 10⁵의 밀도로 현탁하여 여러가지 농도의 YGJT-T을 처리하였다. LPS (500 ng/㎖)로 24시간 동안 자극하여 배양한 뒤, 세포의 상층 액을 획득하여 96 well plate에 50 ㎕ 후 griess reagent (A : 0.
위점막 손상 유발 실험 24시간 동안 절식을 시킨 후, 실험 전에 정상군과 위점막 손상 대조군은 증류수를 경구투여하였고, 육군자탕 정제 (30 ㎎/㎏ : 1회 복용량) 투여군은 위점막 손상 유발 전 3일간 마우스용 존대를 이용하여 1회에 0.5 ㎖를 경구투여하였다. 육군자탕 정제 마지막 투여 1시간 후에 150 mM HCl in 60% ethanol을 각 0.
육군자탕 구성 건조엑스와 첨가제 혼합물의 물성평가를 위해 겉보기 밀도 (bulk density)와 탭 밀도 (tap density)를 측정하여 흐름성을 평가하였다. 건조엑스와 첨가제 혼합물은 메스실린더에 넣어 탭 밀도를 이용하여 부피를 측정하여 나타낸 겉보기 밀도와 혼합물이 들어있는 메스실린더에 200회 tapping 한 후 측정과 Hausner ratio 값을 산출하여 흐름성을 평가하였다.
육군자탕 단미엑스산을 제조하기 위해 Table 1에 구성된 개별 약재를 약탕기 (대웅약탕기, 서울, 한국)로 중량의 10배에 해당하는 정제수를 넣고 100℃에서 3시간 개별 추출하였다. 추출액은 Whatman filter paper No.
5 ㎖를 경구투여하였다. 육군자탕 정제 마지막 투여 1시간 후에 150 mM HCl in 60% ethanol을 각 0.5 ㎖ 씩 경구투여하여 위점막 손상을 유발하였으며 1시간 후 개복하여 위 조직을 적출하였다. 적출된 위 조직은 1×PBS에 조직을 담가 조직을 분쇄한 후 3, 000 rpm, 4℃로 20분간 원심분리 한 후 상층 액을 이용하여 전염증성 사이토카인은 ELISA법으로 정량하였다.
육군자탕 정제가 RAW 264.7 세포에서 전염증성 매개 물질에 미치는 영향을 조사하기 위해 단백질 수준에서 염증성 사이토카인을 측정하였다. 육군자탕 정제를 1시간 전처리 한 후 LPS를 24시간 동안 자극한 후 전염증성 사이토카인의 발현을 측정하였다.
7 세포에서 세포 독성에 영향을 주는 농도 구간을 조사하였다. 육군자탕 정제를 10~200 ㎍/㎖ 24시간 처리하여 MTT 방법을 이용하여 세포의 생존율을 측정하였다. 그 결과 육군자탕 정제 200 ㎍/㎖까지 세포 독성을 보이지 않았다.
7 세포에서 전염증성 매개 물질에 미치는 영향을 조사하기 위해 단백질 수준에서 염증성 사이토카인을 측정하였다. 육군자탕 정제를 1시간 전처리 한 후 LPS를 24시간 동안 자극한 후 전염증성 사이토카인의 발현을 측정하였다. 그 후 단백질 수준에서 전염증성 사이토카인을측정한 결과, 육군자탕 정제는 IL-1β, IL-6 및 TNF-α는 100, 200 ㎍/㎖에서 전염증성 사이토카인을 억제하는 것으로 확인하였다 (Fig.
육군자탕 정제의 RAW 264.7 세포에서 세포 독성에 영향을 주는 농도 구간을 조사하였다. 육군자탕 정제를 10~200 ㎍/㎖ 24시간 처리하여 MTT 방법을 이용하여 세포의 생존율을 측정하였다.
육군자탕 정제의 물성평가는 무게, 지름, 두께, 경도는 Hardness Tester (TBH 325, Ereweka, Germany)를 위하여 3회를 반복 측정하였다. 붕해도 평가는 disintegration tester (Disintegration 3100, DISTEK, USA)를 사용하여 37 ± 0.
육군자탕의 구성 한약재 중 진피의 narirutin 및 hesperidin, 감초의 glycyrrhizic acid, 백출의 atractylenolide Ⅲ 등 총 4종의 지표물질에 대한 동시분석법을 확립하였다 (Fig. 1). 각 지표물질의 최대흡수파장을 검토한 결과 narirutin 및 hesperidin, glycyrrhizic acid, atractylenolide Ⅲ 는 230 ㎚를 최적분석파장으로 하여 육군자탕 정제와 표준액 4종의 피크의 UV spectrum 탐색 결과, 모두 동일한 스펙트럼으로 각기 다른 성분들의 피크에 간섭없이 나타남을 확인하였다.
본 연구에서는 육군자탕 정제의 제형개발 및 육군자탕의 구성된 한약재의 주요성분을 분석하고 항염증 및 항위염에 대한 약리효능 평가를 진행하여 육군자탕 정제의 표준화를 위한 기초자료를 확보하고자 하였다. 육군자탕의 주요성분인 narirutin, hesperidin, glycyrrhizic acid 및 atractylenolide Ⅲ 4종의 분석을 위해 HPLC-PDA를 이용하여 각각의 성분들에 영향을 주지 않으면서 동시에 효과적으로 확인할 수 있는 동시 분석법을 확립하였다. 동시분석법은 기존 지표성분들을 개별적으로 분석하는 것보다 효율적인 분석이 가능하여 품질관리를 위한 기초자료로 사용할 수 있을 것으로 판단된다.
이를 통해 육군자탕을 보관 및 복용의 편의성이 높은 현대적인 제형인 정제로 개발하여 육군자탕의 정제의 주요성분과 효능을 확인하였다. 본 실험의 결과로 얻어진 육군자탕의 주요성분에 대한 동시분석법과 효능평가 결과는 한약제제의 제형 개발과 표준화 연구를 위한 기초자료로 활용될 수 있는 것으로 생각된다.
붕해도를 측정한 결과 20분 이내에 모두 붕해되는 것으로 나타났다. 이상의 측정 결과 우수한 제제학적 특성을 나타낸 Type Ⅰ을 육군자탕 정제 제조를 위한 최적 배합비로 설정하였다.
그 결과 육군자탕 정제 200 ㎍/㎖까지 세포 독성을 보이지 않았다. 이에 육군자탕 정제 200 ㎍/㎖를 최고농도로 하여 연구를 진행하였다 (Fig. 2).
추출하였다. 추출액은 Whatman filter paper No. 4 (25 ㎛)로 여과 후, 농축한 연조엑스를 얻은 것으로 분부건조기 (Seogang Eng., 충남, 천안)로 건조하여 각각의 건조엑스를 얻었다. 건조된 각각의 약재의 건조엑스를 대한민국약전외한약(생약)규격집 (KHP, The Korean Herbal Pharmacopoeia) 기준에 따라 혼합하여 사용하였다.
혼합물의 흐름성을 겉보기 밀도, 탭 밀도를 측정하여 Hausner ratio를 산출하여 평가하였다. Hausner ratio는 Excellent (1.

대상 데이터

ICR 마우스 6주령 수컷 30마리를 중앙실험동물에서 구입하여 한국한의약진흥원 동물실험실에서 1주일 동안 환경에 적응 시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 사육조건은 conventional system으로 온도 23 ± 2℃, 습도 50 ± 5%, 명암주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절하였다.
RAW 264.7는 마우스 대식세포주로 한국세포주은행 (KCLB : Seoul, Korea)으로부터 분양받아 10% fetal bovine serum (FBS)와 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM/high glucose 배지를 사용하여 배양하였다. 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.
, 충남, 천안)로 건조하여 각각의 건조엑스를 얻었다. 건조된 각각의 약재의 건조엑스를 대한민국약전외한약(생약)규격집 (KHP, The Korean Herbal Pharmacopoeia) 기준에 따라 혼합하여 사용하였다.
동물실험을 위한 hydrochloric acide Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka. Japan)에서 구입하였다.
Baker, USA)으로 사용하였으며, phosphoric acid는 (Junsei, Japan)을 사용하였다. 동시분석을 위한 표준물질로 사용된 narirutin, hesperidin, glycyrrhizic acid 및 atractylenolide Ⅲ은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, YMC C₁₈ (5 ㎛, 4.6×250 mm, phenomenex, Torrance, CA, USA) column으로 분리하였다.
같다. 사용된 한약재들은 동일약업사 (Daegu, Korea) 에서구입하여, 육군자탕의 구성 한약재들의 표본은 한국한의약진흥원 한의기술R&D2팀의 한약재보관실에 보관하였다.
세포배양은 DMEM/high glucose (DMEM), fetal bovine serum (FBS), penicillin-streptomycine Hyclone (Logan. UT, USA)에서 구입하였으며, lipopolysaccharide (LPS), ehtanol, chloroform, griess reagent는 Sigma-Aldrich에 서구입하였다. 사이토카인의 검출을 위한 enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit는 R&D system (Minneapolis, MN, USA)에서 구입하여 사용하였다.
시료의 전처리 및 HPLC 분석을 위한 아세토니트릴과 메탄올은 액체 크로마토그래피용 (J.T. Baker, USA)으로 사용하였으며, phosphoric acid는 (Junsei, Japan)을 사용하였다. 동시분석을 위한 표준물질로 사용된 narirutin, hesperidin, glycyrrhizic acid 및 atractylenolide Ⅲ은 Sigma Chemical Co.
육군자탕 정제 제조를 위한 lactose, starch, croscamellose sodium, ludipress, SiO₂, 및 magnesium는 ㈜화원약품 (Seoul, Korea)에서 구입하여 사용하였다.

데이터처리

모든 실험 결과는 3회 이상 실시하여 그 평균값을 기초로 Mean ± S.D.로 나타내었다. 유의성 검사는 one way ANOVA test를 실시한 후 Turkey test로 사후 검증하였다.
로 나타내었다. 유의성 검사는 one way ANOVA test를 실시한 후 Turkey test로 사후 검증하였다. P-value가 0.

이론/모형

LPS (500 ng/㎖)로 24시간 동안 자극하여 배양한 뒤, 세포 상층액에서 전염증성 사이토카인은 ELISA법으로 정량하였다.
1. Simultaneous analysis used HPLC method.
7 cells, Yukgunja-tang tablet was incubated for 24 hours at the indicated dose. The cell viability was measured by MTT assay. The data obtained similar results in three experiments.
5 ㎖ 씩 경구투여하여 위점막 손상을 유발하였으며 1시간 후 개복하여 위 조직을 적출하였다. 적출된 위 조직은 1×PBS에 조직을 담가 조직을 분쇄한 후 3, 000 rpm, 4℃로 20분간 원심분리 한 후 상층 액을 이용하여 전염증성 사이토카인은 ELISA법으로 정량하였다.

성능/효과

It was sacrificed 1 hour after 150 mM HCl in 60% ethanol oral administration. (A) Normal mice, (B) 150 mM HCl in 60% ethanol-induced gastric lesion control mice administered with distilled water orally, (C) 150 mM HCl in 60% ethanol-induced gastritis mice administered orally with Yukgunja-tang tablet (30 ㎎/㎏), (D) Inflammatory cytokines such as IL-1β, IL-6, and TNF-α were measured by ELISA at the protein level of gastric tissue. The data obtained similar results in three experiments.
09. 1.12 및 1.09로 모두 우수하였으며, 제조된 정제의 경도는 각각 13.90, 12.15, 14.21 및 12.78 모두 10 KP 이상의 경도를 보여주었다. 붕해도를 측정한 결과 20분 이내에 모두 붕해되는 것으로 나타났다.
3. 육군자탕 정제 (YGJT-T)는 NO 및 PGE2의 생성을 억제하였다.
4. 육군자탕 정제 (YGJT-T)는 IL-1β, IL-6 및 TNF-α 와 같은 전염증성 사이토카인의 생성을 단백질 수준에서 억제하였다.
5. 육군자탕 정제 (YGJT-T)는 150 mM HCl in 60% ethanol으로 유도한 급성위염에서 위점막의 손상으로 인한 출혈 및 부종을 개선 및 IL-1β, IL-6 및 TNF-α 와 같은 전염증성 사이토카인의 생성을 단백질 수준에서 억제하였다.
또한, PGE₂는 COX-2에 의해 생성되며 염증반응에서 중요한 역할로써 혈관생성을 유도하여 종양을 생성하는 역할을 한다²⁸⁾. LPS에 자극에 의한 염증 매개인자들은 염증질환들에 관여하게 되는데 이상의 결과는 육군자탕 정제가 iNOS의 발현을 억제함으로써 NO의 생성을 억제한다는 것을 보여준다. 또한 COX-2 의 발현을 억제함으로써 PGE₂의 생성을 억제한다.
1). 각 지표물질의 최대흡수파장을 검토한 결과 narirutin 및 hesperidin, glycyrrhizic acid, atractylenolide Ⅲ 는 230 ㎚를 최적분석파장으로 하여 육군자탕 정제와 표준액 4종의 피크의 UV spectrum 탐색 결과, 모두 동일한 스펙트럼으로 각기 다른 성분들의 피크에 간섭없이 나타남을 확인하였다.
육군자탕 정제를 10~200 ㎍/㎖ 24시간 처리하여 MTT 방법을 이용하여 세포의 생존율을 측정하였다. 그 결과 육군자탕 정제 200 ㎍/㎖까지 세포 독성을 보이지 않았다. 이에 육군자탕 정제 200 ㎍/㎖를 최고농도로 하여 연구를 진행하였다 (Fig.
7 세포에서 육군자탕 정제를 전치리 후 LPS를 처리하였을 때, NO 및 PGE₂ 생성의 억제 효과를 확인하였다. 그 결과 육군자탕 정제는 100, 200 ㎍/㎖에서 NO (Fig. 3A) 및 PGE₂(Fig. 3B)를 억제하였으며, 200 ㎍/㎖에서는 Dexamethasone보다 더 높은 억제율을 보이는 것을 확인하였다 (Fig. 3).
육군자탕 정제를 1시간 전처리 한 후 LPS를 24시간 동안 자극한 후 전염증성 사이토카인의 발현을 측정하였다. 그 후 단백질 수준에서 전염증성 사이토카인을측정한 결과, 육군자탕 정제는 IL-1β, IL-6 및 TNF-α는 100, 200 ㎍/㎖에서 전염증성 사이토카인을 억제하는 것으로 확인하였다 (Fig. 4).
5C)는 위점막의 손상으로 출혈 및 부종이 억제됨을 확인할 수 있었다. 또한 위 조직에서 단백질 수준에서 염증성 사이토카인의 발현을 확인한 결과 급성위염에 증가한 염증성 사이토카인 (IL-1β, IL-6 및 TNF-α)은 육군자탕 정제를 처리하였을 때 억제되는 것을 확인할 수 있었다 (Fig. 5D).
따라서 본 연구는 한약탕제와 개발 제형의 화학적 동등성 평가 및 효능 분석으로 개발 제형의 안정성 및 유효성에 대한 과학적 근거 마련하고자 하였다. 또한, 국내 한약제제에 대한 소비자 만족도 조사를 한 결과 한약 및 한약제제 시장은 소비자 시장성과지수에서 가장 낮은 평가를 받았다. 이는 한약제제가 전통적인 탕제, 환제로 국한되어 있어 복용 및 휴대의 불편함으로 인한 것으로 조사되어 졌다.
Ethanol 은 위의 점막을 자극하여 출혈과 손상을 유발하고 HCle 위 운동의 촉진으로 상태를 악화시키는 것으로 알려져 있다³⁰⁾. 육군자탕 정제를 3일간 전처리한 후 150 mM HCl in 60% ethanol 을 처리하고 부검으로 위 조직을 육안으로 관찰한 결과 위 점막의 출혈 및 부종 그리고 위 조직의 IL-1β, IL-6 및 TNF-α 와 같은 전염증성 사이토카인을 유의성 있게 억제하였다.
-1β, IL-6 및 TNF-α와 같은 전염증성 사이토카인은 염증을 나타내는 지표로서 다양한 염증매개체들을 유도하거나 면역반응을 조절하는데 있어 중요한 역할을 한다. 육군자탕 정제를 전처리한 후 LPS를 처리하였을 때, IL-1β, IL-6 및 TNF-α 와 같은 전염증성 사이토카인은 염증의 생성을 단백질 수준에서 유의성 있게 억제되는 것으로 나타났다.
5B)에서는 150 mM HCl in 60% ethanol에 의해 위점막에 손상으로 출혈 및 부종이 관찰됨을 확인할 수 있었다. 육군자탕 정제를 처리한 마우스 (Fig. 5C)는 위점막의 손상으로 출혈 및 부종이 억제됨을 확인할 수 있었다. 또한 위 조직에서 단백질 수준에서 염증성 사이토카인의 발현을 확인한 결과 급성위염에 증가한 염증성 사이토카인 (IL-1β, IL-6 및 TNF-α)은 육군자탕 정제를 처리하였을 때 억제되는 것을 확인할 수 있었다 (Fig.

후속연구

육군자탕의 주요성분인 narirutin, hesperidin, glycyrrhizic acid 및 atractylenolide Ⅲ 4종의 분석을 위해 HPLC-PDA를 이용하여 각각의 성분들에 영향을 주지 않으면서 동시에 효과적으로 확인할 수 있는 동시 분석법을 확립하였다. 동시분석법은 기존 지표성분들을 개별적으로 분석하는 것보다 효율적인 분석이 가능하여 품질관리를 위한 기초자료로 사용할 수 있을 것으로 판단된다.
확인하였다. 본 실험의 결과로 얻어진 육군자탕의 주요성분에 대한 동시분석법과 효능평가 결과는 한약제제의 제형 개발과 표준화 연구를 위한 기초자료로 활용될 수 있는 것으로 생각된다.
이상의 결과로 육군자탕을 휴대성 및 복용에 대한 편의성을 지닌 정제로 개발하였으며, 항염증 및 항위염 효과를 통하여 염증성 질환에 도움이 될 수 있을 것으로 사료된다.

참고문헌 (30)

Choi SI, Ahn EJ, Lee MY. Research Trend for the Formulation of Traditional Chinese Medicine. Korean Herb. Med. Inf. 2016 ; 4 : 11-19.
Yu Q, Zeng KW, Ma XL, Song FJ, Jiang Y, Tu PF, Wang XM. Resokaempferol-mediated anti-inflammatory effects on activated macrophages via the inhibition of JAK2/STAT3, NF-κB and JNK/p38 MAPK signaling pathways. International Immunopharmacology. 2016 ; 38 : 104-14.

상세보기
Liu J, Tang J, Zuo Y, Yu Y, Luo P, Yao X, Dong Y, Wang P, Liu L, Zhou H. Stauntoside B inhibits macrophage activation by inhibiting NF-κB and ERK MAPK signalling. Pharmacological Research. 2016 ; 111 : 303-315.

상세보기
Yim MJ, Lee JM, Choi G, Lee DS, Park WS, Jung WK, Park SW, Seo SK, Park JG, Choi IW, Ma SY. Anti-Inflammatory Potential of Carpomitra costata Ethanolic Extracts via Inhibition of NF-κB and AP-1 Activation in LPS-Stimulated RAW264.7 Macrophages. Evid. Based Complementary Altern. Med. 2018 ; 2018 : 6914514.
Lee JY, Lee MS, Choi JW, Shin TS, Woo HC, Kim HR. Dichloromethane fraction of Laminaria japonica ethanolic extract inhibits lipopolysaccharide-induced nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 expression in RAW 264.7 cells via NF-κB pathway. Inflammation. 2012 ; 35 : 1650-1658.

상세보기
Alexander C, Rietschel ET. Bacterial lipopolysaccharides and innate immunity. J Endotoxin Res. 2001 ; 7 : 167-202.

상세보기
Hwang DH, Kang MJ, Jo MJ, Seo YB, Park NG, Kim GD. Anti-Inflammatory Activity of β-thymosin Peptide Derived from Pacific Oyster (Crassostrea gigas) on NO and PGE 2 Production by Down-Regulating NF-κB in LPS-Induced RAW264.7 Macrophage Cells. Mar Drugs. 2019 ; 17 : 129.

상세보기
Kim HJ, Han JS, Kim SH, Park HJ, Park HS, Ko MK, Le CY, Kim OJ. Study on the efects of natural herb extract against acute gastritis induced by HCl-ethanol in SD rats. Journal of Animal Asisted Psychotherapy. 2017 ; 6 : 57-6.
Lee JA, Kim SH, Kim MJ, Ahn JH, Park HJ, Lee WR, Roh SS. Protective Efects of Chrysanthemi Indici Flos Extract and Flaxsed Oil Mixture on HCl/ethanoli-nduced Acute Gastric Lesion Mice. Kor. J. Herbol. 2018 ； 3 : 19-28.
Kim MY, Kwon OJ, Noh JS, Roh SS. Inhibitory Activities of Water Extracts of Black Ginseng on HCl/Ethanol Induced Acute Gastritis through AntiOxidant Effect. J Korean Soc Food Sci Nutr. 2016 ; 45 : 1249-1256.

원문보기 상세보기
Jeong CS, Hyun JE, Kim YS. Anti - oxidative Effect of Ginsenoside Rb1 on the HCl, Ethanol - Induced Gastric Tissue in Rats. Kor. J. Pharmacogn. 2002 ; 33 : 252-256.
del Valle JC, Salvatella M, Rossi I, Andrade R, Gutierrez Y, Pereda C, Samper B, Feliu JE. Impairment of H+-K+-ATPase-dependent proton transport and inhibition of gastric acid secretion by ethanol. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2001 ; 280 : G1331-40.

상세보기
Ko SJ, Park JW, Lee JH, Cho SH, LeeJH, Nam SU, Kim JS. Herbal medicine Yukgunja-tang for functional dyspepsia protocol for a systematic review of randomized controlled trials. Medicine. 2018 ; 97 : e12555.

상세보기
Tominaga K, Iwakiri R, Fujimoto K, Fujiwara Y, Tanaka M, Shimoyama Y, Umegaki E, Higuchi K, Kusano M, Arakawa T. Rikkunshito improves symptoms in PPI-refractory GERD patients: a prospective, randomized, multicenter trial in Japan. J Gastroenterol. 2012 ; 47 : 284-92.

상세보기
Tatsuta M, Iishi H. Effect of treatment with Liu-Jun-Zi-Tang (TJ-43) on gastric emptying and gastrointestinal symptoms in dyspeptic patients. Aliment Pharmacol Ther. 1993 ; 7 : 459-62.

상세보기
Kang HJ, Jeong MK, Park SJ, Jun HJ, Yoo HS. Efficacy and safety of Yukgunja-Tang for treating anorexia in patients with cancer The protocol for a pilot, randomized, controlled trial. Medicine (Baltimore). 2019 ; 98 : e16950.

상세보기
Ko SJ, Park JW, Lee JH, Lee JE, Ha NY, Nam SU, Lee JH, Jeon SH, Kim JW, Kang CW, Yeo IK, Kim JS. An Herbal Medicine, Yukgunja-Tang is more Effective in a Type of Functional Dyspepsia Categorized by Facial Shape Diagnosis: A Placebo-Controlled, Double-Blind, Randomized Trial. Evid Based Complement Alternat Med. 2018 ; 2018 : 8546357.

상세보기
Mogami S, Hattori T. Beneficial effects of rikkunshito, a Japanese kampo medicine, on gastrointestinal dysfunction and anorexia in combination with Western drug: a systematic review. Evid Based Complement Alternat Med. 2014 ; 2014 : 519035.

상세보기
Suzuki H, Inadomi JM, Hibi T. Japanese herbal medicine in functional gastrointestinal disorders. Neurogastroenterol Motil. 2009 ; 21 : 688-96.

상세보기
Takeda H, Sadakane C, Hattori T, Katsurada T, Ohkawara T, Nagai K, Asaka M Rikkunshito, an herbal medicine, suppresses cisplatin-induced anorexia in rats via 5-HT2 receptor antagonism. Gastroenterology. 2008 ; 134 : 2004-13.

상세보기
Ohno T, Yanai M, Ando H, Toyomasu Y, Ogawa A, Morita H, Ogata K, Mochiki E, Asao T, Kuwano H. Rikkunshito, a traditional Japanese medicine, suppresses cisplatin-induced anorexia in humans. Clin Exp Gastroenterol. 2011 ; 4 : 291-6.

상세보기
Endo M, Hori M, Ozaki H, Oikawa T, Hanawa T. Rikkunshito, a Kampo Medicine, Ameliorates Post-operative Ileus by Anti-inflammatory Action. J Pharmacol Sci. 2014 ; 124 : 374-85.

상세보기
Azushima K, Uneda K, Wakui H, Ohki K, Haruhara K, Kobayashi R, Haku S, Kinguchi S, Yamaji T, Minegishi S, Ishigami T, Yamashita A, Tamura K. Effects of rikkunshito on renal fibrosis and inflammation in angiotensin II-infused mice. Sci Rep. 2019 ; 9 : 6201.

상세보기
Goso Y, Ogata Y, Ishihara K, Hotta K. Effects of Traditional Herbal Medicine on Gastric Mucin against Ethanol-Induced Gastric Injury in Rats. Comp Biochem Physiol C Pharmacol Toxicol Endocrinol. 1996 ; 113 : 17-21.

상세보기
Jang WS, Shin YJ, Ko SJ, Ha YJ, Kwon YM, Shin SH. Effect of Yukgunja-tang on Glutamate-induced Apoptosis in C6 Glial Cel. Korean J. Orient.Int. Med. 2010 ; 31 : 586-599.
Cho W, Nam JW, Kang HJ, Windono T, Seo EK, Lee KT. Zedoarondiol isolated from the rhizoma of Curcuma heyneana is involved in the inhibition of iNOS, COX-2 and pro-inflammatory cytokines via the downregulation of NF-κB pathway in LPS-stimulated murine macrophages. Int Immunopharmacol. 2009 ; 9 : 1049-57.

상세보기
Ajizian SJ, English BK, Meals EA. Specific inhibitors of p38 and extracellular signal regulated kinase mitogen-activated protein kinase pathways block inducible nitric oxide synthase and tumor necrosis factor accumulation in murine macrophages stimulated with lipopolysaccharide and interferon-gamma. J Infect Dis. 1999 ; 179 : 939-44.

상세보기
Choi SB, Bae GS, Jo IJ, Park KC, Seo SH, Kim DG, Shin JY, Gwak TS, Lee JH, Lee GS, Park SJ, Song HJ. The anti-inflammatory effect of Lithospermum Erythrorhizon on lipopolysaccharide - induced inflammatory response in RAW 264.7 cells. Kor. J. Herbology. 2013 ； 28 : 67-73.

원문보기 상세보기
IJ Park, SH Yun, GH Choi, HJ Kim, YH Seo, JH Cho. Protective Effect of Litsea japonica Fruit Flesh Extract on Stress-induced Gastritis in Rats. Journal of Food Hygiene and Safety. J Physiol & Pathol Korean Med. 2017 ; 31 : 255-263.

원문보기 상세보기
Hong SH, Le HA, Le YS, Kim DW, Oh GW, Woo JW, Cho YD, Jeong JH, Kim OJ. Protective effect of halophyte Salsola komarovi ljin against gastric ulcer Induce by alcohol treatment in rats. J Biomed Res. 2014 ; 15 : 170-175.

상세보기

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증