[논문]제조방법에 따른 당귀수산(當歸鬚散)의 성분분석 및 항염증 효과

전영희; 남원희; 임현희; 김세진; 유병우; 손수미; 김명진; 최혜민; 권현숙; 김정옥

doi:10.22889/kjp.2021.52.3.192

제조방법에 따른 당귀수산(當歸鬚散)의 성분분석 및 항염증 효과
Anti-inflammatory Effect and Analysis of Functional Constituents of Dangguisu-san by Processing Methods 원문보기

생약학회지, v.52 no.3, 2021년, pp.192 - 201

전영희 (한국한의약진흥원) , 남원희 (한국한의약진흥원) , 임현희 (한국한의약진흥원) , 김세진 (한국한의약진흥원) , 유병우 (한국한의약진흥원) , 손수미 (한국한의약진흥원) , 김명진 (한국한의약진흥원) , 최혜민 (한국한의약진흥원) , 권현숙 (한국한의약진흥원) , 김정옥 (한국한의약진흥원)

Abstract ▼ AI-Helper

Dangguisu-san (DGSS) is widely known traditional herbal medicinal formula in Korea for treatment of traumatic injury by traffic accident, ecchymosis, abdominal distension and anti-thrombosis of blood. This study was conducted to develop the simultaneous analyze method using high performance liquid chromatography (HPLC) and examine the effect of anti-inflammatory activity of DGSS-dry extract (DGSS-DE) and DGSS-mix extract powder (DGSS-MEP). Physicochemical characteristics of DGSS-DE and DGSS-MEP showed that there is no significant difference in pH, titratable acidity, total soluble solid content and browning degree except for color value (L, a, b). 15 functional constituents of DGSS were identified and the correlation coefficient values of DGSS-DE and DGSS-MEP were conformed 0.950. Also, DGSS-DE and DGSS-MEP significantly decreased the secretion of nitric oxide (NO), prostaglandin E2 (PGE2), interleukin-1β (IL-1β), interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) through inhibited expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), IL-1β, IL-6, and TNF-α. From these result, DGSS-MEP showed similar chemical composition and anti-inflammatory effect to DGSS-DE. Therefore, DGSS-DE and DGSS-MEP may be useful as potential source of drug to prevent inflammation.

주제어

표/그림 (9)

표 Table I. Composition and yields of Dangguisusan-dry extracts (DGSS-DE) and Dangguisusan-mix extract powder (DGSS-MEP)
표 Table II. Physicochemical characteristics of DGSS-DE and DGSS-MEP
표 Table III. HPLC condition for qualitative analysis of functional constituents in DGSS-DE and DGSS-MEP
그림 Fig. 1. HPLC chromatograms of standard mixtures (A), dry extract (B) and mix extract powder (C) of DGSS. 1, Amygdalin; 2, Safflomin A; 3, Brazilin; 4, Norisoboldine; 5, Protosappanin B; 6, Albiflorin; 7, Paeoniflorin; 8, Liquiritin; 9, Coumarin; 10, Nodakenin; 11, Decursinol; 12, Cinnamic acid; 13, Glycyrrhizic acid; 14, Decursin; 15, Decursinol angelate
그림 Fig. 2. Cell viability of DGSS-DE and DGSS-MEP on LPSstimulated RAW 264.7 cells. The macrophages were treated with various concentration (0, 15.625, 31.25, 62.5, 125, 250 μg/mL) of DGSS-DE and DGSS-MEP for 24 hrs. The results were expressed as the mean±S.D. from the two independent experiments. *p < 0.05 and **p < 0.01 indicates significant difference from the DGSS-DE and DGSS-MEP. n.s. show not significant from the DGSS-DE and DGSS-MEP.
표 Table IV. Comparison of equivalence of 15 compounds of DGSS by extraction method
그림 Fig. 3. Inhibitory effect of DGSS-DE and DGSS-MEP on NO production (A), iNOS protein and mRNA expression (B) in LPS-stimulated RAW264.7 cells. (A) Cells were treated with various concentrations (50, 100, 200 μg/mL) of DGSS-DE and DGSS-MEP for 1hr and then incubated with LPS (1 μg/mL) for 24 hr. The results were expressed as the mean±S.D. from the three independent experiments. ***p < 0.001 indicates significant difference from LPS. ###p < 0.001 indicates significant difference from DGSS-DE and DGSS-MEP. n.s. show not significant from the DGSS-DE and DGSS-MEP. (B) For immunoblot and RT-PCR, cells were pretreated with various concentrations of DGSS-DE and DGSS-MEP for 1hr, and then incubated with LPS (1 μg/mL) for 24 hr and 6 hr, respectively.
그림 Fig. 4. Inhibitory effect of DGSS-DE and DGSS-MEP on PGE₂ production (A), COX-2 protein and mRNA expression (B) in LPS-stimulated RAW264.7 cells. (A) Cells were treated with various concentrations (50, 100, 200 μg/mL) of DGSS-DE and DGSS-MEP for 1hr, and then incubated with LPS (1 μg/mL) for 24 hrs. The results were expressed as the mean±S.D. from the three independent experiments. *p < 0.05 indicates significant difference from LPS. n.s. show not significant from the DGSS-DE and DGSS-MEP. (B) For immunoblot and RTPCR, cells were treated with various concentrations of DGSSDE and DGSS-MEP for 1hr, and then incubated with LPS (1 μg/mL) for 24 hr and 6 hr, respectively.
그림 Fig. 5. Inhibitory effect of DGSS-DE and DGSS-MEP on the secretion of pro-inflammatory cytokines (A-C) and the expression of mRNAs (D). (A-C) Cells were pretreated with various concentrations (50, 100, 200 μg/mL) of DGSS-DE and DGSS-MEP for 1hr before being induced inflammation with LPS for 24 hr. The results were expressed as the mean±S.D. from the three independent experiments. *p < 0.05 and **p < 0.01 indicates significant difference from LPS. #p < 0.05, ##p < 0.01 indicates significant difference from DGSS-DE and DGSS-MEP. n.s. show not significant from the DGSS-DE and DGSS-MEP. (D) For RT-PCR, cells were treated with various concentrations of DGSS-DE and DGSS-MEP for 1hr, and then incubated with LPS (1 μg/mL) for 6 hr.

AI 본문요약
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제안 방법

동시분석−HPLC-PDA를 이용하여 용매의 구성 및 검출 파장에 대한 분석 조건을 검토하여 당귀수산을 구성하는 9 종의 한약재 중 감초의 glycyrrhizic acid 및 liquiritin, 육계의 coumarin 및 cinnamic acid, 도인의 amygdalin, 소목의 brazilin 및 protosappanin B, 오약의 norisoboldine, 작약의 paeoniflorin 및 albiflorin, 홍화의 safflomin A, 당귀의 nodakenin, decursinol, decursin 및 decursinol angelate 등 15종 표준물질에 대한 동시 분석 조건을 확립하였다(Table III). 0.05% phosphoric acid가 함유된 water와 acetonitrile을 이용하여 시간에 따라 용매 조성을 변화시키는 기울기 용리법으로 피크 분리능을향상시켰으며, 각 표준물질의 농도와 UV spectrum 확인을 통해 전반적으로 가장 적절한 230 nm로 검출 파장을 설정하였다. 확립된 분석조건으로 DGSS-DE와 DGSS-MEP를동시분석한 결과, amygdalin, safflomin A, brazilin, norisoboldine, protosappanin B, albiflorin, paeoniflorin, liquiritin, coumarin, nodakenin, decursinol, cinnamic acid, glycyrrhizic acid, decursin 및 decursinol angelate 순으로 검출되었으며, 시료 내 다른 성분들에 의해 간섭 받지 않으면서 효과적으로 분리됨을 확인하였다(Fig.

대상 데이터

실험재료−본 연구에 사용된 당귀수산의 구성 한약재인 당귀, 소목, 오약, 적작약, 향부자, 홍화, 도인, 계피 및 감초는 동일약업사(Daegu, Korea) 및 ㈜휴먼허브(Gyeongsan, Korea)에서 구입하여 전문가(신전휘, 백초당한약방)의 감별 후 사용하였다

데이터처리

통계처리−모든 실험결과는 3회이상 반복 실험한 결과의 평균±표준편차로 나타내었으며, 통계적 유의성 검사는 one way ANOVA test를 실시한 후 T-test로 사후 검증하였다

이론/모형

혼합제제인 당귀수산 혼합단미엑스산(DGSS-MEP)은 구성약재 별로 각각 칭량한 후 각 중량의 10배에 해당하는 정제수를 넣고 100℃에서 3시간 동안 개별 추출한 후 적정 농도로 농축한 뒤 진공건조하여 단미건조엑스산을 얻었다(Table I). 건조된 각각의 단미건조엑스산을 대한민국약전외 한약(생약) 규격집(KHP, The Korean Herbal Pharmacopoeia) 기준에 따라 혼합하여 사용하였다.

성능/효과

DGSS- DE와 DGSS-MEP의 pH는 각각 5.22±0.01, 5.29±0.06, 산도는 각각 0.70±0.01, 0.69±0.01%, 당도는 각각 19.86±0.18, 19.54±0.31°Brix 그리고 갈색도는 각각 0.60±0.01, 0.58±0.01 로 나타났으며, 제조방법에 따른 DGSS-DE와 DGSS-MEP 간의 pH, 산도, 당도 및 갈색도는 유의적인 차이가 없음을 확인하였다
세포독성 평가−RAW 264.7 대식세포에 대한 DGSS-DE와 DGSS-MEP의 세포독성을 확인하기 위해 농도별로 처리한 결과, 두 시료 모두 250 μg/mL 농도까지 독성이 없는 것으로 나타났다
05% phosphoric acid가 함유된 water와 acetonitrile을 이용하여 시간에 따라 용매 조성을 변화시키는 기울기 용리법으로 피크 분리능을향상시켰으며, 각 표준물질의 농도와 UV spectrum 확인을 통해 전반적으로 가장 적절한 230 nm로 검출 파장을 설정하였다. 확립된 분석조건으로 DGSS-DE와 DGSS-MEP를동시분석한 결과, amygdalin, safflomin A, brazilin, norisoboldine, protosappanin B, albiflorin, paeoniflorin, liquiritin, coumarin, nodakenin, decursinol, cinnamic acid, glycyrrhizic acid, decursin 및 decursinol angelate 순으로 검출되었으며, 시료 내 다른 성분들에 의해 간섭 받지 않으면서 효과적으로 분리됨을 확인하였다(Fig. 1).

후속연구

32로 유의적인 차이를 보였다. 이러한 결과를 통해 제조방법에 따른 DGSS-DE와 DGSS-MEP의이화학적 품질 특성을 확인함으로써 당귀수산의 제형 개발 및 품질 검사 기초자료로 활용 될 수 있을 것으로 기대된다.
이상의 결과를 종합하여 볼 때, 제조방법에 따른 DGSS- DE와 DGSS-MEP의 구성성분과 효능의 비교·분석 결과는 당귀 수산의 품질향상을 위한 품질관리법 개발 및 제형 개발연구 등에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

참고문헌 (30)

The Korean Food and Drug Administration Notification 2007-89. The Korean Pharmacopoeia Ninth Edition.
Korea Ministry of Government Legislation. Available from: URL: http://www.law.go.kr/main.html
Choi, H. M., Kim, S. J., Kim, I. S., Lee, J. B., Kim, J. B., Moon, S. O. and Lee, H. D. (2016) Evaluation on anti-oxidant activity and anti-inflammatory effect for the new formulation of Gamisoyosan. Korea J. Herbol. 31: 1-9.
Lee, J. B., Choi, H. M., Kim, J. B., Kim, J. O., Moon, S. O. and Lee, H. D. (2018) Evaluation on pharmacological effects and compound contents of Hwangryunhaedok-tang formulation for tablet. Korea J. Herbol. 33: 9-18.
Kim, J. O., Baek, K. Y. and Lee, H. D. (2018) Comparison of marker components and biological activities of Gamiguibi-tang (Jiaweiguipi-tang) decoction and commercial extract granules. J. Physiol. & Pthol. Korean Med. 32: 333-340.

원문보기 상세보기
Qiu, J. (2007) Back to the future for Chinese herbal medicines. Nat. Rev. Drug Discov. 6: 506.

상세보기
Wang, L., Zhou, G. B., Liu, P., Song, J. H., Liang, Y., Yan, X. J., Xu, F., Wang, B. S., Mao, J. H., Shen, Z. X., Chen, S. J. and Chen, Z. (2008) Dissection of mechanisms of Chinese medicinal formula Realgar-Indigo naturalis as an effective treatment for promyelocytic leukemia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105: 4826.

상세보기
Shin, H. G. (2018) Standard herbal medicine formulary, Deajeon:KIOM; p. 163-71.
Heo, J. (1983) Donguibogam, 109,578, 581. Namsandang, Seoul.
Kim, K. H. (1985) Effects of Dangkwisoosan on subcutaneous hematoma. K. H. Univ. O. Med. J. 8: 23-31
Kim, T. S. and Ahn, K. S. (1988) Effect of Dangkwisoosan and Dodamtang on the intravascular coagulation induced by endotoxin in rat. J. Korean Oriental Med. Pathol. 3: 91-98.
Kim, J. H., Park, S. H., Kim, Y. W., Ha, J. M., Bae, S. S., Lee, G. S., Cho, S. I., Choi, B. T. and Shin, H. K. (2011) The traditional herbal medicine, Dangkwisoo-san, prevents cerebral ischemic injury through nitric oxide-dependent mechanisms. J. Evid. Based Complement Altern. Med. 718302.
Kim, J. H. and Yoon, H. J. (2005) Study of two cases for allergic purpura. J. Physiol. & Pthol. Korean Med. 19: 821-825
Ko, H., Shin, S. M. and Park, S. Y. (2019) Endothelium-dependent vasorelaxation effects of Dangguisu-san, Samhwangsasimtang extract on rabbit carotid artery. J. Physiol. & Pthol. Korean Med. 33: 198-206.

원문보기 상세보기
Yun, Y. J., Kim, K. L., Jin, M. H., Kang, Y. G., Nam, W. J. and Park, D. I. (2013) A case report of tension type headache patient with Dangkisoo-san and acupuncture. Herb. Formula Sci. 21: 206-212.

원문보기 상세보기
Kim, B. J. (2018) Effects of Dangkwisoo-San, ginger and curcumin on transient receptor potential melastatin 7 channels. J. Korean Med. Obes. Res. 18: 10-18.

원문보기 상세보기
Bak, J. W., Sim, B. Y. and Kim, D. H. (2014) The effects of Danggwisusan on restoration ability in wound induced animal models. Korea J. Herbol. 29: 55-63.
Lyu, J. H., Kim, K. H., Kim, H. W., Cho, S. I., Ha, K. T., Choi, J. Y., Han, C. W., Jeong, H. S., Lee, H. K., Ahn, K. S., Oh, S.R., Sadikot, R. T., Christman, J. W. and Joo, M. (2012) Dangkwisoosan, an herbal medicinal formula, ameliorates acute lung inflammation via activation of Nrf2 and suppression of NF-κB. J. Ethnopharmacol. 140: 107-116.

상세보기
Seo, C. S. and Shin, H. K. (2014) Quantitative analysis of the seventeen marker components in dangguisu-san using ultra-performance liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry. Yakhak Hoeji 58: 158-164.
Lee, D. Y., Lee, H. S., Jo, J. H., Yi, Y. W., Kim, S. J., Kang, K. and Lee, I. H. (2020) Comparison of ingredients and activities of Danggwisoo-san and Jakyakgamcho-tang by extraction method. J. Korean Med. Rehabil. 30: 31-39.
Do, H. J., Shin, Y. S., Lee, J. H., Ahn, Y. J., Ha, I. H., Lee, Y. J., Kim, M. R., Ko, W. I., Song, S. H., Chung, H. J., Lee, I. H., Lee, J. W., Kim, E. J. and Kim, M. J. (2016) Stability of Danggwisu-san(Dangguixu-san) water extract, a herbal medicine, under various storage conditions. J. Korean Med. Rehabil. 26: 1-8.
Liu, Y. C., Zou, X. B., Chai, Y. F. and Yao, Y. M. (2014) Macrophage polarization in inflammatory diseases. Int. J. Biol. Sci. 10: 520-529.

상세보기
Jeong, H. R., Sung, M. S., Kim, Y. H., Ham, H. M., Choi, Y. M. and Lee, J. S. (2012) Anti-inflammatory activity of salvia plebeia R. Br. leaf through heme oxygenase-1 induction in LPS-stimulated RAW264.7 macrophages. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 47: 888-894.
Kim, D. W., Yun, H. J., Heo, J. Y., Kim, T. H., Cho, H. J. and Park, S. D. (2010) Anti-oxidative and anti-inflammatory effect of Do-Ki-Tang methanol extract in mouse macrophage cells. Korea J. Herbol. 25: 103-112.
Gulati, K., Guhathakurta, S., Joshi, J., Rai, N. and Ray, A. (2016) Cytokines and their role in health and disease: A brief overview. MOJ Immunol. 4: 00121.
Schweizer, A., Feige, U., Fontana, A., Muller, K. and Dinarello, C. A. (1988) Interleukin-1 enhances pain reflexes. Mediation through increased prostaglandin E2 levels. Agents Actions 25: 246-251.

상세보기
Klein, M. A., Moller, J. C., Jones, L. L., Bluethmann, H., Kreutzberg, G. W. and Raivich, G. (1997) Impaired neuroglial activation in interleukin-6 deficient mice. Gila 19: 227-233.
Boka, G., Anglade, P., Wallach, D., Javoy-Agid, F., Agid, Y. and Hirsch, E. C. (1994) Immunocytochemical analysis of tumor necrosis factor and its receptors in Parkinson's disease. Neurosci. Lett. 172: 151-154.

상세보기
Wojdasiewicz, P., Poniatowski, L. A. and Szukiewicz, D. (2014) The role of inflammatory and anti-inflammatory cytokines in the pathogenesis of osteoarthritis. Mediators inflamm. 2014: 561459.
Kim, S. J., Lee, J. B., Choi, H. M., Lee, H. Y., Kim, M. J., Lee, M. H., Kim, J. O. and Lee, H. D. (2018) Evaluation on pharmacological effects and component analysis of Hwanggeumjakyak-tang formulation for tablet. Kor. J. Pharmacogn. 49: 362-371.

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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