[논문]더덕 에탄올 추출물의 도시미세먼지 노출로 인한 폐 세포 산화스트레스 발생과 세포밀착연접 손상 억제 효과

소희정; 전수현; 이진원; 이광원

doi:10.9721/kjfst.2021.53.2.165

더덕 에탄올 추출물의 도시미세먼지 노출로 인한 폐 세포 산화스트레스 발생과 세포밀착연접 손상 억제 효과
Inhibitory effect of ethanol extract of Codonopsis lanceolata against oxidative stress and disruption of tight cell junction in NCI-H441 cells after exposure to urban particulate matter 원문보기

한국식품과학회지 = Korean journal of food science and technology, v.53 no.2, 2021년, pp.165 - 173

소희정 (고려대학교 생명환경과학대학원 식품공학과) , 전수현 (고려대학교 식품생의학안전연구소) , 이진원 (수원여자대학교 보건식품학부 약용식물과) , 이광원 (고려대학교 일반대학원 생명공학과)

초록
AI-Helper

본 연구에서는 UPM에 의해 유발되는 NCI-H441 세포 내 ROS 생성과 그에 따른 tight junction 단백질(N-cadherin, fibronectin, occluding, ZO-1, 및 claudin-4 등)의 발현 억제를 확인하였고 ECL의 전처리로 인하여 해당 ROS 생성 및 tight junction 단백질 발현 억제 현상이 완화되는 보호효과를 확인하였다. 그 결과, 폐 세포에서 UPM에 의해 유발된 산화 스트레스 및 tight junction 단백질의 발현 감소가 ECL을 선 처리함으로써 억제되어 결과적으로 산화 스트레스와 같은 미세먼지에 의한 폐 손상으로부터 보호 효과를 나타내고 tight junction 수준의 유지를 확인하였다. 이러한 결과를 통해 ECL 추출물은 폐와 기관지의 보호효과를 나타내며 폐 관련 질병의 예방효과가 있는 기능성 천연 물질로써 활용이 가능할 것으로 기대된다.

Abstract ▼ AI-Helper

One of the major sources of air pollution is urban particulate matter (UPM), which causes lung diseases involving oxidative stress, inflammation, and cancer. Codonopsis lanceolata (CL) has been used in East Asia as a traditional oriental medicinal ingredient for lung diseases (e.g., asthma and bronchitis). However, the connection between the impact of CL and UPM in the lungs has rarely been investigated. This study aimed to confirm the inhibitory activity of the ethanol extract of CL (ECL) against oxidative stress and disruption of tight cell junctions in human pulmonary epithelial cells after exposure to UPM. As the lung cells were pre-treated with ECL, the UPM-induced increase in cellular reactive oxygen species production suppressed tight junction proteins (e.g., N-cadherin, fibronectin, occludin, zonula occludens-1, and claudin-4). These results suggest that ECL prevents the possible effects of UPM toxicity on the lungs.

주제어

표/그림 (7)

표 Table 1. Real-time PCR primer sequences
그림 Fig. 1. Scheme of ethanol extract from Codonopsis lanceolata (ECL).
표 Table 2. Antioxidant activities of the ethanol extract of Codonopsis lanceolata (ECL)
그림 Fig. 2. Effect of exposure to urban particulate matter (UPM) on viability and reactive oxygen species (ROS) production of NCI-H441 cells. NCI-H441 cells (2×10⁵ cells/mL) were incubated with different concentration of UPM (5, 10, and 20 μg/mL) for 24 h. (A) Cell viability was measured by MTT assay. (B) ROS production was measured to be converted from 2′,7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) to 2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA). Cell viability and ROS production were expressed as a percentage of the control (CON). Values are expressed as mean± standard deviation (SD) of triplicate experiments. *p<0.05, **p<0.01, and ***p<0.001 are compared to control according to Student’s t-test. n.s. is not significant compared to control at p<0.05 according to Student’s t-test.
그림 Fig. 3. Effect of ECL on viability of NCI-H441 cells. NCI-H441 cells (2×10⁵ cells/mL) were incubated with different concentration of ECL (25, 50, 100, and 200 μg /mL) for 24 h. Cell viability was measured by MTT assay and was expressed as a percentage of the CON. Values are expressed as mean ± SD of triplicate experiments. n.s. is not significant compared to control at p<0.05 according to Student's t-test.
그림 Fig. 4. Effect of ECL pre-treatment before UPM on viability and ROS production of NCI-H441 cells. NCI-H441 cells (2×10⁵ cells/ mL) were incubated with different concentration of ECL (25, 50, 100, and 200 μg/mL) for 24 h and then were incubated with UPM (10 μg/mL) for 24 h. (A) Cell viability was measured by MTT assay. (B) ROS production was measured to be converted from DCFH-DA to DCF-DA. Cell viability and ROS production were expressed as a percentage of the CON. Values are expressed as mean±SD of triplicate experiments. Different letters are significantly different at p<0.05 and each value is according to Duncan's multiple range test.
그림 Fig. 5. Effect of ECL pre-treatment before UPM on tight junction expression levels of NCI-H441 cells. NCI-H441 cells (2×10⁵ cells/mL) were incubated with different concentration of ECL (50, 100, and 200 μg/mL) for 24 h and then were incubated with UPM (10 μg/mL) for 24 h. (A) Neural (N)-cadherin, (B) fibronectin, (C) occludin, (D) zonula occludens (ZO)-1, and (E) claudin-4 mRNA expression levels were determined using quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Values are expressed as mean±SD of triplicate experiments. Different letters are significantly different at p<0.05 and each value is according to Duncan's multiple range test.

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

그러나 가자는 국내 수입 및 섭취가 허용되지 않은 작물로 국내에서는 폐 질환 치료를 위한 약용식물로 더덕을 사용해왔으나 이를 활용한 추출물이 UPM에 의한 폐 세포의 산화스트레스로부터 발생하는 손상을 보호하는 효과에 대해서는 연구가 부족한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 UPM에 의해 발생한 산화스트레스로 폐 세포가 손상되고 전통적인 약용식물인 더덕의 추출물이 이를 예방 및 보호하는 효과를 확인하고자 하였다.
본 연구에서는 UPM으로 인한 ROS 생성량 증가와 ECL에 의한 ROS 생성 예방효과를 확인하고자 하였다. Fig.
Zhao 등(2018)에 따르면 미세먼지에 의해 발생한 ROS는 세포 투과성을 높이고 transepithelial electric resistance (TER) 의기능을 저하시키는 등 tight junction 단백질의 기능에 영향을 주어 코 상피 장벽의 붕괴를 초래한다고 하였으며, Lee 등(2020)은 UPM으로 인하여 발생한 ROS는 염증 사이토카인의 발현양을 증가시키고 zonula occludens (ZO)-1, occludin 및 claudin-1과 같은 tight junction 단백질의 발현양을 감소시킨다고 하였다. 이와 같이 UPM에 의해 생성된 ROS는 tight junction의 기능 장애를 유발하는 요인 중 하나로 tight junction을 구성하는 마커들의 발현 정도를 비교함으로써 UPM에 의한 손상과 ECL 시료의 전처리에 의한 보호 효과를 확인하고자 하였다.

제안 방법

ECL에 함유된 총 폴리페놀 함량은 Hagerman 등(2000)의 Folin- Ciocalteu 방법을 변형하여 실험에 사용하였다. 1mg/mL의 ECL 시료는 Folin-Ciocalteu 시약 및 20% sodium carbonate 용액과 2:1:5 (v/v/v)의 비율로 섞은 뒤 암실에서 40분간 정치하였으며, multiple reader (EL-808, BioTek, Winooski, VT, USA)를 사용하여 750nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.
NCI- H₄₄1 세포에 ECL 시료(25, 50, 100, 200μg/mL)와 UPM (5, 10, 20μg/mL)을 24시간 처리 후 상층액을 제거하고 MTT 시약을 첨가하여 2시간 반응시켰다. MTT 용액을 제거한 후 DMSO로 불용성 포마잔 결정을 용해시켜 540nm의 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 결과는 시료가 첨가되지 않은 대조군 흡광도 값을 기반으로 하여 실험군 흡광도 값의 백분율(%)을 산출하였다.
4)로 치환하였다. Multi-detection microplate reader (HIDEX, Turku, Finland)를 사용하여 excitation (485nm)과 emission (535nm)을 측정함으로서 전환된 2′, 7′-dichlorofluorescein diacetate (DCF)의 값을 얻었으며 결과는 대조군 값을 기반으로 하여 실험군의 백분율(%)로 나타내었다.
NCI- H₄₄1 세포에 ECL 시료(25, 50, 100, 200μg/mL)와 UPM (5, 10, 20μg/mL)을 24시간 처리 후 상층액을 제거하고 MTT 시약을 첨가하여 2시간 반응시켰다. MTT 용액을 제거한 후 DMSO로 불용성 포마잔 결정을 용해시켜 540nm의 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 결과는 시료가 첨가되지 않은 대조군 흡광도 값을 기반으로 하여 실험군 흡광도 값의 백분율(%)을 산출하였다.
NCI-H₄₄1 세포에 ECL 및 UPM을 각각 24시간 처리 후 사멸하지 않고 효과를 나타낼 수 있는 적절한 농도를 선정하기 위해 세포 생존율을 확인하였다(Fig. 2, 3). 산화스트레스 유발 물질로 사용할 UPM의 처리 농도는 Fig.
Lee 등(2017)의 방법을 참고하였다. NCI-H₄₄1 세포에 ECL 시료를 각각 25, 50, 100 및 200μg/mL의 농도로 24시간 동안 처리하였으며, ECL 시료를 제거한 후 100μM DCFH-DA를 분주하여 37 C에서 30분 간 방치한 후 시약을 제거하였다. 이 후, UPM 10μg/mL을 처리하여 24시간 동안 배양한 후 phosphate buffered saline (PBS; pH 7.
NCI-H₄₄1 세포에 ECL 시료를 각각 50, 100, 200μg/mL의 농도로 24시간 동안 처리하였으며, ECL 시료를 제거하고 10μg/mL 농도의 UPM을 6시간 동안 처리하였다. PBS로 2회 세척 후 RNAiso PLUS를 첨가하여 RNA를 추출하였고 LeGene Premium Express first-strand cDNA Synthesis System을 이용하여 cDNA를 합성하였다.
UPM을 6시간 동안 처리하였다. PBS로 2회 세척 후 RNAiso PLUS를 첨가하여 RNA를 추출하였고 LeGene Premium Express first-strand cDNA Synthesis System을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 폐 상피 세포의 tight junction을 확인하기 위해 합성된 cDNA와 tight junction primer 및 TOPreal qPCR 2xPreMIX SYBR green을 9:1:10 (v/v/v)으로 혼합 후 Bio-Rad IQ5 thermal cycler (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)을 사용하여 측정하였다.
폐 상피 세포의 tight junction을 확인하기 위해 합성된 cDNA와 tight junction primer 및 TOPreal qPCR 2xPreMIX SYBR green을 9:1:10 (v/v/v)으로 혼합 후 Bio-Rad IQ5 thermal cycler (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)을 사용하여 측정하였다. PCR의 단계로 95 C 5분의 pre-denaturation 과정을 시행 후, denaturation 과정은 95 C 10초, annealing 과정은 60 C 30초, extension 과정은 72 C 20초로 총 40 cycle을 시행하였다. 실험에 사용한 primer의 염기서열은 Table 1에 제시하였으며, PCR 수행 후 각 유전자의 발현 결과는 각 유전자의 Ct값을 이용하여 β-actin 으로 보정하고 delta-delta-Ct (ΔΔCt)법으로 계산하여 나타내었다.
우선, 더덕에 묻은 흙과 이물을 제거하기 위해 흐르는 물에 세척 후 10×10mm로 잘라 동결건조 하였다. 건조된 더덕 절편을 55% (v/v) 주정에탄올과 1:10의 무게 비율 (w/w)로 배합한 후, 약재 추출용 전기약탕기(HD-A80, Habdong Machinery Co., Kyeongki, Korea)를 이용하여 60 C에서 4.5시간 동안 추출하였다. 추출물은 여과지(Whatman No.
6%의 수분을 함유하고 있는 것을 확인할 수 있다. 다음 단계로 건조 더덕으로부터 추출, 여과, 진공농축 및 동결건조를 통해 ECL 시료를 획득하였다. 이 과정에서 건조더덕을 기반으로 하였을 때 약 26.
6), 10mM TPTZ/40mM HCl 혼합물, 20mM iron(Ⅲ) chloride hexahydrate (FeCl3·6H₂O)를 10:1:1 (v/v/v)의 비율로 혼합하여 제조하였다. 단계적으로 희석한 ECL 시료와 FRAP 시약을 각각 1:30 (v/v)의 비율로 섞어 37 C에서 5 분간 반응시킨 후 593nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준 곡선은 iron(II) sulfate heptahydrate (FeSO₄·7H₂O)를 사용하여 작성하였으며 표준곡선 수식에 시료의 결과값을 대입하여 ECL의 DM g 당 μmol FeSO₄·7H₂O로 산출하였다.
본 연구에서는 UPM에 의해 유발되는 NCI-H441 세포 내 ROS 생성과 그에 따른 tight junction 단백질(N-cadherin, fibronectin, occluding, ZO-1, 및 claudin-4 등)의 발현 억제를 확인하였고 ECL 의 전처리로 인하여 해당 ROS 생성 및 tight junction 단백질 발 현 억제 현상이 완화되는 보호효과를 확인하였다. 그 결과, 폐 세 포에서 UPM에 의해 유발된 산화 스트레스 및 tight junction 단 백질의 발현 감소가 ECL을 선 처리함으로써 억제되어 결과적으 로 산화 스트레스와 같은 미세먼지에 의한 폐 손상으로부터 보 호 효과를 나타내고 tight junction 수준의 유지를 확인하였다.
2, 3). 산화스트레스 유발 물질로 사용할 UPM의 처리 농도는 Fig. 2의 결과를 기반으로 세포 독성이 적으면서 ROS가 많이 생성되는 농도를 기준으로 선정하였다. 농도별 UPM을 24시간 NCI-H₄₄1 세포에 처리 시 20μg/mL 의 농도에서 세포 생존율이 67.
같이 제조하였다. 우선, 더덕에 묻은 흙과 이물을 제거하기 위해 흐르는 물에 세척 후 10×10mm로 잘라 동결건조 하였다. 건조된 더덕 절편을 55% (v/v) 주정에탄올과 1:10의 무게 비율 (w/w)로 배합한 후, 약재 추출용 전기약탕기(HD-A80, Habdong Machinery Co.
각 농도의 시료 및 비교군과 700μM의 DPPH 시약을 섞은 다음 빛이 차단된 37 C 의 항온항습기에서 30분간 반응시켰다. 이후 515nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며 결과는 시료가 첨가되지 않은 대조군 흡광도에서 실험군의 흡광도를 빼준 뒤 이를 대조군의 흡광도로 나누어 산출하였다. 최종적으로 DPPH 자유 라디칼을 50% 소거하는 시료의 양(50% scavenging capacity, SC₅₀)을 구하였다.
이후 515nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며 결과는 시료가 첨가되지 않은 대조군 흡광도에서 실험군의 흡광도를 빼준 뒤 이를 대조군의 흡광도로 나누어 산출하였다. 최종적으로 DPPH 자유 라디칼을 50% 소거하는 시료의 양(50% scavenging capacity, SC₅₀)을 구하였다.
1과 같다. 추출 수율을 높이고 보관의 용이성을 위해 생더덕을 동결 건조하여 더덕 내 함유된 수분을 제거하였다. 이 과정에서 약 22.
PBS로 2회 세척 후 RNAiso PLUS를 첨가하여 RNA를 추출하였고 LeGene Premium Express first-strand cDNA Synthesis System을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 폐 상피 세포의 tight junction을 확인하기 위해 합성된 cDNA와 tight junction primer 및 TOPreal qPCR 2xPreMIX SYBR green을 9:1:10 (v/v/v)으로 혼합 후 Bio-Rad IQ5 thermal cycler (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)을 사용하여 측정하였다. PCR의 단계로 95 C 5분의 pre-denaturation 과정을 시행 후, denaturation 과정은 95 C 10초, annealing 과정은 60 C 30초, extension 과정은 72 C 20초로 총 40 cycle을 시행하였다.
단계적으로 희석한 ECL 시료와 FRAP 시약을 각각 1:30 (v/v)의 비율로 섞어 37 C에서 5 분간 반응시킨 후 593nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준 곡선은 iron(II) sulfate heptahydrate (FeSO₄·7H₂O)를 사용하여 작성하였으며 표준곡선 수식에 시료의 결과값을 대입하여 ECL의 DM g 당 μmol FeSO₄·7H₂O로 산출하였다.
1mg/mL의 ECL 시료는 Folin-Ciocalteu 시약 및 20% sodium carbonate 용액과 2:1:5 (v/v/v)의 비율로 섞은 뒤 암실에서 40분간 정치하였으며, multiple reader (EL-808, BioTek, Winooski, VT, USA)를 사용하여 750nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 표준곡선은 gallic acid 를 사용하여 작성하였으며, 결과는 표준곡선의 수식에 시료의 결과값을 대입하여 ECL 건조물(dry matter, DM) g 당 gallic acid 환산 농도(gallic acid equivalent, GAE)로 표현하였다.

대상 데이터

Ascorbic acid, dextrose, 2', 7'-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH- DA), dimethyl sulfoxide (DMSO), 3-(4, 5-dimethylthiazol-2yl)-2, 5- diphenyl tetrazolium bromide (MTT), 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), Folin-Ciocalteu 시약, gallic acid, hydroxyethyl piperazine ethane sulfonicacid (HEPES), sodium bicarbonate, sodium pyruvate, 2, 4, 6-tripyridyl-S-triazine (TPTZ) 등은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Fetal bovine serum (FBS)와 penicillin, streptomycin 등은 Hyclone (Logan, UT, USA)에서 구입하였으며, 그 외 Iron(Ⅲ) chloride hexahydrate (FeCl3·6H₂O, Shinyo Pure Chemicals, Osaka, Japan), iron(II) sulfate heptahydrate (FeSO⁴·7H²O, Showa Chemical, Tokyo, Japan), LeGene Premium Express first-strand cDNA Synthesis System (Legene Biosciences, San Diego, CA, USA), RNAiso PLUS (Takara Korea Biomedical, Seoul, Korea), RPMI-1640 (Gibco Laboratories, Grand Island, NY, USA), sodium carbonate (Samchun Chemicals, Seoul, TM Korea), TOPreal qPCR 2xPreMIX SYBR green (Enzynomics, Daejeon, Korea) 등을 구입하여 실험에 사용하였다.
Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Fetal bovine serum (FBS)와 penicillin, streptomycin 등은 Hyclone (Logan, UT, USA)에서 구입하였으며, 그 외 Iron(Ⅲ) chloride hexahydrate (FeCl3·6H₂O, Shinyo Pure Chemicals, Osaka, Japan), iron(II) sulfate heptahydrate (FeSO⁴·7H²O, Showa Chemical, Tokyo, Japan), LeGene Premium Express first-strand cDNA Synthesis System (Legene Biosciences, San Diego, CA, USA), RNAiso PLUS (Takara Korea Biomedical, Seoul, Korea), RPMI-1640 (Gibco Laboratories, Grand Island, NY, USA), sodium carbonate (Samchun Chemicals, Seoul, TM Korea), TOPreal qPCR 2xPreMIX SYBR green (Enzynomics, Daejeon, Korea) 등을 구입하여 실험에 사용하였다.
UPM (SRM 1648a)은 12개월 이상 Missouri 주의 St. Louis에서 수집된 미립자 물질을 여과한 것으로 National Institutes of Standards and Technology (Gaithersburg, MD, USA)에서 판매하는 제품을 사용하였다. 실험 전 10mg의 UPM을 1mL의 DMSO 에 충분히 용해 후 여과하여 실험의 표준 시료로 사용하였다.
방법을 참고하였다. 다섯 포인트의 농도 구간으로 ECL 시료 (1.5-25μg/mL)와 비교군으로 사용된 ascorbic acid (6.2-100μg/mL) 를 단계적으로 희석하여 실험에 사용하였다. 각 농도의 시료 및 비교군과 700μM의 DPPH 시약을 섞은 다음 빛이 차단된 37 C 의 항온항습기에서 30분간 반응시켰다.
본 실험에 사용한 더덕은 3년산 고랭지 밭더덕으로 강원도 횡성의 직판장에서 2019년 5월에 구입하여 사용하였다. Ascorbic acid, dextrose, 2', 7'-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH- DA), dimethyl sulfoxide (DMSO), 3-(4, 5-dimethylthiazol-2yl)-2, 5- diphenyl tetrazolium bromide (MTT), 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), Folin-Ciocalteu 시약, gallic acid, hydroxyethyl piperazine ethane sulfonicacid (HEPES), sodium bicarbonate, sodium pyruvate, 2, 4, 6-tripyridyl-S-triazine (TPTZ) 등은 Sigma-Aldrich (St.
Louis에서 수집된 미립자 물질을 여과한 것으로 National Institutes of Standards and Technology (Gaithersburg, MD, USA)에서 판매하는 제품을 사용하였다. 실험 전 10mg의 UPM을 1mL의 DMSO 에 충분히 용해 후 여과하여 실험의 표준 시료로 사용하였다.
인간 폐 상피 세포인 NCI-H₄₄1 (ATCC, Manassas, VA, USA) 세포는 2.0×10 cell/mL의 밀도로10% FBS (v/v)를 함유한 RPMI- 1640 배지를 이용하여 5%의 CO₂ 농도가 유지되는 인큐베이터(37 C)에서 배양하였다. RPMI-1640 배지는 2.

데이터처리

Values are expressed as mean± standard deviation (SD) of triplicate experiments. *p<0.05, **p<0.01, and ***p<0.001 are compared to control according to Student’s t-test. n.
Values are expressed as mean±SD of triplicate experiments. Different letters are significantly different at p<0.05 and each value is according to Duncan’s multiple range test.
001 are compared to control according to Student’s t-test. n.s. is not significant compared to control at p<0.05 according to Student’s t-test.
모든 실험 결과는 3반복을 시행하였고 평균과 표준편차를 이용하여 나타내었다. 실험결과에 대한 통계는 SAS version 9.
나타내었다. 실험결과에 대한 통계는 SAS version 9.4 (SAS institute, Cary, NC, USA) 프로그램을 이용하였으며 Student’s t-test (*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001) 및 Duncan’s multiple range test (p<0.05)를 실시하여 통계 처리하였다.
PCR의 단계로 95 C 5분의 pre-denaturation 과정을 시행 후, denaturation 과정은 95 C 10초, annealing 과정은 60 C 30초, extension 과정은 72 C 20초로 총 40 cycle을 시행하였다. 실험에 사용한 primer의 염기서열은 Table 1에 제시하였으며, PCR 수행 후 각 유전자의 발현 결과는 각 유전자의 Ct값을 이용하여 β-actin 으로 보정하고 delta-delta-Ct (ΔΔCt)법으로 계산하여 나타내었다.

이론/모형

DPPH 자유 라디칼 소거능은 Kitagaki와 Tsugawa (1999)의 실험 방법을 참고하였다. 다섯 포인트의 농도 구간으로 ECL 시료 (1.
ECL 시료가 폐 상피 세포 사멸에 영향을 미치지 않는 농도를 설정하기 위해 MTT 검정 방법을 이용하였다(Lee 등, 2017). NCI- H₄₄1 세포에 ECL 시료(25, 50, 100, 200μg/mL)와 UPM (5, 10, 20μg/mL)을 24시간 처리 후 상층액을 제거하고 MTT 시약을 첨가하여 2시간 반응시켰다.
ECLe Lee 등(2019b)의 주정에탄올 추출 방법을 참고하여 다음과 같이 제조하였다. 우선, 더덕에 묻은 흙과 이물을 제거하기 위해 흐르는 물에 세척 후 10×10mm로 잘라 동결건조 하였다.
FRAPe Lee 등(2005b)의 방법에 따라 실험하였으며 ECLe 100mg/mL로 제조하여 실험에 사용하였다. FRAP 시약은 300 mM acetate buffer (pH 3.
폐 상피 세포에서 UPM에 의해 생성되는 ROS를 측정하기 위하여 Lee 등(2017)의 방법을 참고하였다. NCI-H₄₄1 세포에 ECL 시료를 각각 25, 50, 100 및 200μg/mL의 농도로 24시간 동안 처리하였으며, ECL 시료를 제거한 후 100μM DCFH-DA를 분주하여 37 C에서 30분 간 방치한 후 시약을 제거하였다.

성능/효과

반면, ECL을 처리 후 UPM을 처리한 모든 실험군에서 UPM에 의한 ROS 생성량이 UPM 단독 처리군에 비해 감소하였으며, 특히 25-100μg/mL의 ECL 농도 구간에서는 처리농도가 증가함에 따라 ROS의 생성량이 농도 의존적으로 감소하였다. 100μg/mL의 ECL 처리군에서 ROS 생성량(153.1±8.9%)은 UPM 단독 처리군과 비교하여 약 40% 감소하였으며 감소 폭은 최대로 나타났다. 또한 200μg/mL의 ECL 처리 군(146.
04)에 비해 유의적으로 약 58%의 감소를 보였다. 50μg/mL의 ECL을 전처리한 실험군 (0.48±0.01)에서는 UPM 단독 처리군과 비교하여 유의적인 차이가 관찰되지 않았으나, 100μg/mL (0.78±0.10) 및 200μg/mL의 ECL을 전처리한 실험군(0.97±0.13)에서 UPM 처리로 인한 N- cadherin의 발현 감소를 농도 의존적인 효과를 보이며 막아주는 것으로 나타났다(Fig. 5A).
12)의 발현양을 기준으로 약 70%의 감소를 나타내었다. 50μg/mL의 ECL을 전처리한 실험군(0.29±0.02)에서는 UPM 단독 처리군과 비교하여유의적인 차이가 관찰되지 않았으나, 100μg/mL (0.46±0.07) 및 200μg/mL의 ECL을 전처리한 실험군(0.86±0.07)에서 UPM 처리로 인한 fibronectin 발현양 감소를 농도 의존적인 효과를 보이며 회복시켜주는 양상을 보였다.
05)의 발현양을 기준으로 약 30%의 감소를 보였다. 50μg/mL의 ECL을 전처리한 실험군(0.67±0.04)에서는 UPM 단독 처리군과 비교하여 유의적인 차이가 관찰되지 않았으나, 100 및 200μg/mL의 ECL을 전처리한 실험군에서는 ZO-1의 발현양이각각 0.76±0.02 및 0.89±0.07으로 나타났으며 이는 ECL의 전처리로 인해 농도 의존적으로 UPM에 의한 ZO-1의 발현양 감소를 방지하였음을 나타내었다.
ECLe 25, 50, 100, 200μg/mL의 모든 농도에서 세포 생존율이 95.3-97.9%로 나타나 모든 더덕 농도 구간에서 폐 상피 세포에 독성을 보이지 않았다(p<0.05, Fig. 3). 또한 ECL (25, 50, 100, 200μg/mL)을 24시간 전처리 후 10μg/mL의 UPM을 24시간 처리한 결과, 모든 실험군의 세포 생존율은 81.
junction이다(Vermette 등, 2018). Fig. 5D의 결과에서, ZO-1 은 UPM 단독으로 처리한 군(0.70±0.03)은 아무것도 처리되지 않은 대조군(1.00±0.05)의 발현양을 기준으로 약 30%의 감소를 보였다. 50μg/mL의 ECL을 전처리한 실험군(0.
장벽 기능을 한다고 보고된 바 있다(Wray 등, 2009). Fig. 5E 에서 나타난 바와 같이, UPM 단독으로 처리한 군(0.64±0.11)은 아무것도 처리되지 않은 대조군(1.00±0.13)의 발현양을 기준으로 약 36%가 감소하였으며, ECL을 전처리한 실험군에서 claudin-4 의 발현양은 각각 0.82±0.02 (50μg/mL 처리군), 1.04±0.10 (100 μg/mL 처리군) 및 1.52±0.02 (200μg/mL처리군)로 농도 의존적인 효과를 보이며 UPM에 의한 claudin-4의 발현양 감소를 유의적으로 억제하였다.
본 연구에서는 UPM에 의해 유발되는 NCI-H441 세포 내 ROS 생성과 그에 따른 tight junction 단백질(N-cadherin, fibronectin, occluding, ZO-1, 및 claudin-4 등)의 발현 억제를 확인하였고 ECL 의 전처리로 인하여 해당 ROS 생성 및 tight junction 단백질 발 현 억제 현상이 완화되는 보호효과를 확인하였다. 그 결과, 폐 세 포에서 UPM에 의해 유발된 산화 스트레스 및 tight junction 단 백질의 발현 감소가 ECL을 선 처리함으로써 억제되어 결과적으 로 산화 스트레스와 같은 미세먼지에 의한 폐 손상으로부터 보 호 효과를 나타내고 tight junction 수준의 유지를 확인하였다. 이 러한 결과를 통해 ECL 추출물은 폐와 기관지의 보호효과를 나 타내며 폐 관련 질병의 예방효과가 있는 기능성 천연 물질로써 활용이 가능할 것으로 기대된다.
001). 그러나 10μg/ mL의 UPM 처리 농도에서는 세포 생존율이 88.3±0.5%로 나타났으며(p<0.001), 5μg/mL의 농도에서는 p<0.05 이하에서 UPM이 처리되지 않은 대조군(CON)과 유사한 수준 (95.9±1.7%)의 생존율을 보여 NCI-H₄₄1 세포에 독성이 없음을 확인하였다(Fig. 2A).
3). 또한 ECL (25, 50, 100, 200μg/mL)을 24시간 전처리 후 10μg/mL의 UPM을 24시간 처리한 결과, 모든 실험군의 세포 생존율은 81.2-86.8%로 나타났으며, UPM 단독 처리군(91.3±5.3)과 비교하여 조금 낮아지는 경향은 보였으나 p<0.05에서 유의적인 차이가 나타나지 않았다(Fig. 4A).
또한, UPM 처리 농도 별 ROS 생성량을 확인한 결과(Fig. 2B), 세포 생존율이 대조군(CON)과 유사한 수준으로 나타났던 5μg/ mL의 UPM 처리군에서는 p<0.05 이하에서 ROS 생성량이 대조군(CON)과 비교하여 유의적인 차이가 나타나지 않아 선정에서 제외되었으며, 10μg/mL의 농도에서 대조군(CON)보다 40% 이상 높은 ROS가 생성되어(p<0.001), 10μg/mL의 UPMe UPM 처리에 따른 효과를 비교할 수 있는 가장 적합한 농도라고 판단하여 최종적으로 실험에 사용하였다.
07)의 발현양을 기준으로 약 41% 감소하였다. 모든 ECL 처리 농도에서 UPM 단독 처리군과 비교하여 유의적인 차이를 보이며 대조군과 유사한 수준으로 occludin 발현이 나타남을 확인하였으며, 특히 200μg/ mL의 ECL을 전처리한 실험군에서 occludin의 발현양(1.15±0.08) 이 아무것도 처리되지 않은 대조군 수준 이상으로 유의미한 증가를 보였다(Fig. 5C).
5 배 증가하였다. 반면, ECL을 처리 후 UPM을 처리한 모든 실험군에서 UPM에 의한 ROS 생성량이 UPM 단독 처리군에 비해 감소하였으며, 특히 25-100μg/mL의 ECL 농도 구간에서는 처리농도가 증가함에 따라 ROS의 생성량이 농도 의존적으로 감소하였다. 100μg/mL의 ECL 처리군에서 ROS 생성량(153.
3%로 보고되었다. 본 연구에서 시료로 사용한 더덕의 원산지(강원도 횡성), 수확 시기(3년근), 및 재배방법(밭더덕) 등을 선행 연구(Lee 등, 2019d) 와 동일하게 준비하였음에도 불구하고, 농작물인 관계로 재배 환경인 토양 및 기후와 재배 시기 등에 영향을 받아 다양한 변형이 있을 수 있으며 강원도 횡성 더덕 중 구체적인 생산지를 확인할 수 없었던 점에서 농작물인 더덕 생물의 차이로부터 수율의 차이가 발생한 것으로 판단된다. 또한 Lee 등(2019d)은 동결건조 더덕을 곱게 갈은 후 환류추출기를 사용하였으나 본 실험에서는 10×10mm의 절편으로 잘라 동결건조한 더덕을 전기 약탕기에서 침출시키는 과정에서 더덕 시료의 처리방법과 추출 방법이 달라 추출 수율의 차이가 발생한 것으로 보여진다.
자유 라디칼은 체내에서 여러 과정을 통해 세포 및 기관에 손상을 입히고 스트레스를 유발하기에 항산화 활성은 건강 증진과 밀접한 연관이 있다(Song 등, 2012). 본 연구에서 얻은 ECL 추출물은 추출 조건이나 원물의 처리 방법 등에 따라 차이는 있으나 Jeon 등(2013) 및 Song 등(2012)의 연구 결과와 마찬가지로 항산화 활성을 나타내는 것을 확인하였다.
다음 단계로 건조 더덕으로부터 추출, 여과, 진공농축 및 동결건조를 통해 ECL 시료를 획득하였다. 이 과정에서 건조더덕을 기반으로 하였을 때 약 26.7%의 추출 수율을 얻었으며, 이는 생더덕을 기반으로 하였을 때 약 6.0%의 추출 수율로 환산되었다. 이는 ECL 시료를 제조하는 추출 방법을 참고한 Lee 등(2019d)의 연구 결과와 비교하여 1.
추출 수율을 높이고 보관의 용이성을 위해 생더덕을 동결 건조하여 더덕 내 함유된 수분을 제거하였다. 이 과정에서 약 22.4% 의 동결건조 수율을 얻었으며, 이를 통해 생더덕은 약 77.6%의 수분을 함유하고 있는 것을 확인할 수 있다. 다음 단계로 건조 더덕으로부터 추출, 여과, 진공농축 및 동결건조를 통해 ECL 시료를 획득하였다.
또한 Lee 등(2019a)의 연구에서는 α-lipoic acid 100μM와 UPM 200μg/mL를 동시 처리 시 UPM 단독처리 구보다 ROS 생성량을 약 50% 정도 감소시키는 것으로 나타났다. 이와 같이 본 연구의 ECL (100 μg/mL)도 UPM으로 인해 유발되는 ROS 발생량을 다른 연구에서와 유사한 수준까지 효과적으로 낮추는 것으로 확인되었다.

후속연구

그 결과, 폐 세 포에서 UPM에 의해 유발된 산화 스트레스 및 tight junction 단 백질의 발현 감소가 ECL을 선 처리함으로써 억제되어 결과적으 로 산화 스트레스와 같은 미세먼지에 의한 폐 손상으로부터 보 호 효과를 나타내고 tight junction 수준의 유지를 확인하였다. 이 러한 결과를 통해 ECL 추출물은 폐와 기관지의 보호효과를 나 타내며 폐 관련 질병의 예방효과가 있는 기능성 천연 물질로써 활용이 가능할 것으로 기대된다.

참고문헌 (56)

Ahn JY, Kim JS, Lee MD, Lee SU, Jeon HE, Oh J, Park SM, Jo JG, Seo WH, Lee SJ, Do WS, Lee BW, Lee SW, Ha HS, Yu HJ, Seo KY, Kim SH, Kwon SM, Lee KW. Study on the Composition of PM 2.5 in the Yellow Sand and Fine Particle. National Institute of Environmental Research. pp. 1-118 (2008)
Anderson JO, Thundiyil JG, Stolbach A. Clearing the air: a review of the effects of particulate matter air pollution on human health. J. Med. Toxicol. 8: 166-175 (2012)

상세보기
Barnes PJ. Chronic obstructive pulmonary disease. N. Engl. J. Med. 343: 269-280 (2000)

상세보기
Beeman NE, Baumgartner HK, Webb PG, Schaack JB, Neville MC. Disruption of occludin function in polarized epithelial cells activates the extrinsic pathway of apoptosis leading to cell extrusion without loss of transepithelial resistance. BMC Cell Biol. 10: 85 (2009)

상세보기
Choe SY, Yang KH. Toxicological studies of antioxidants butylated hydroxytoluene (BHT) and butylated hydroxy anisol (BHA). Korean J. Food Sci. Technol. 14:283-288 (1982)
Chosa N, Ishisaki A. Two novel mechanisms for maintenance of stemness in mesenchymal stem cells: SCRG1/BST1 axis and cell-cell adhesion through N-cadherin. Jpn. Dent. Sci. Rev. 54: 37-44 (2018)

상세보기
Cunningham KE, Turner JR. Myosin light chain kinase: pulling the strings of epithelial tight junction function. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1258: 34-42 (2012)

상세보기
Donaldson K, Stone V. Current hypotheses on the mechanisms of toxicity of ultrafine particles. Ann. Ist. Super. Sanita. 39: 405-410 (2003)

상세보기
Ghim YS, Choi Y, Kim S, Bae CH, Park J, Shin HJ. Evaluation of Model Performance for Forecasting Fine Particle Concentrations in Korea. Aerosol Air Qual. Res. 17: 1856-1864 (2017)

상세보기
Guan L, Rui W, Bai R, Zhang W, Zhang F, Ding W. Effects of Size-Fractionated Particulate Matter on Cellular Oxidant Radical Generation in Human Bronchial Epithelial BEAS-2B Cells. Int. J. Environ. Res. Public Health. 13: 483 (2016)

상세보기
Gumbiner B. Structure, biochemistry, and assembly of epithelial tight junctions. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 253: 749-758 (1987)

상세보기
Ha SJ, Jung SK. Functional Food for Particulate Matter, Food Ind. Nutr. 22: 33-37 (2017)
Hagerman A, Harvey MI., Makkar HPS. Quantification of tannins in tree foliage: a laboratory manual for the FAO/IAEA co-ordinated research project on 'The use of nuclear and related techniques to develop simple tannin assays for predicting and improving the safety and efficiency of feeding ruminants on tanninferous tree foliage.' FAO/IAEA Working Document IAEA, Vienna. pp. 4-7 (2000)
Hur GY, Choi GS, Park HJ, Ye YM, Park HS. Anaphylactic shock induced by Codonopsis lanceolata, traditional Chinese medicine in a patient with allergic rhinitis. Allergy 63: 1406-1407 (2008)

상세보기
International Agency for Research on Cancer (IARC). IARC Monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans, No. 109-Outdoor air pollution. Lyon, France. pp. 135-188 (2015)
Jeon SM, Kim SY, Kim IH, Go JS, Kim HR, Jeong JY, Lee HY, Park DS. Antioxidant Activities of Processed Deoduck (Codonopsis lanceolata) Extract. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 42: 924-932 (2013)

원문보기 상세보기
Kim TW, Joh EH, Kim B, Kim DH. Ginsenoside Rg5 ameliorates lung inflammation in mice by inhibiting the binding of LPS to toll-like receptor-4 on macrophages. Int. Immunopharmacol. 12: 110-116 (2012)

상세보기
Kitagaki H, Tsugawa M. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical (DPPH) scavenging ability of sake during storage. J Biosci. Bioeng. 87: 328-332 (1999)

상세보기
Knekt P, Kumpulainen J, Jarvinen R, Rissanen H, Heliovaara M, Reunanen A, Hakulinen T, Aromaa A. Flavonoid intake and risk of chronic diseases. Am. J. Clin. Nutr. 76: 560-568 (2002)

상세보기
Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Korea Oriental Medicine Data Base Mediclassics- Donguibogam (principles and practice of eastern medicine), No. 4.24-Codonopsis lanceolate. Available from: https://mediclassics.kr/books/8/volume/21#content_999 (2014)
Lee DC, Choi H, Oh JM, Lee DH, Kim SW, Kim SW, Kim BG, Cho JH, Lee J. Protective effects of α-lipoic acid on cultured human nasal fibroblasts exposed to urban particulate matter. Int. Forum Allergy Rhinol. 9: 638-647 (2019a)

상세보기
Lee DC, Choi H, Oh JM, Lee J, Lee J, Lee HY, Kang JY. Urban particulate matter regulates tight junction proteins by inducing oxidative stress via the Akt signal pathway in human nasal epithelial cells. Toxicol. Lett. 333: 33-41 (2020)

상세보기
Lee KW, Jung HJ, Park HJ, Kim DG, Lee JY, Lee KT. Beta-D-xylopyranosyl-(1→3)-beta-D-glucuronopyranosyl echinocystic acid isolated from the roots of Codonopsis lanceolata induces caspase-dependent apoptosis in human acute promyelocytic leukemia HL-60 cells. Biol. Pharm. Bull. 28: 854-859 (2005a)

상세보기
Lee HS, Jung SH, Yun BS, Lee KW. Isolation of chebulic acid from Terminalia chebula Retz. and its antioxidant effect in isolated rat hepatocytes. Arch. Toxicol. 81: 211-218 (2007a)

상세보기
Lee YG, Kim JY, Lee JY, Byeon SE, Hong EK, Lee J. Regulatory effects of Codonopsis lanceolata on macrophage-mediated immune responses. J. Ethnopharmacol. 112: 180-188 (2007b)

상세보기
Lee YS, Kim HE, Kim J, Seol GH, Lee KW. Lancemaside A, a major triterpene saponin of Codonopsis lanceolata enhances regulation of nitric oxide synthesis via eNOS activation. BMC Complement Altern. Med. 19: 110 (2019b)

상세보기
Lee JH, Lee JY, Kim MJ, Kim HJ, Lee SH, Jeon BG. Cytotoxicity of Particulate Matter in Various Human Cells Lines. J. Life Sci. 29: 724-734 (2019c)

원문보기 상세보기
Lee KW, Nam MH, Lee HR, Hong CO, Lee KW. Protective effects of chebulic acid on alveolar epithelial damage induced by urban particulate matter. BMC Complement Altern. Med. 17: 373 (2017)

상세보기
Lee HR, Pyo MC, Chae SA, Hong CO, Lee KW. Inhibitory Effect of Chebulic Acid on Alveolar Epithelial to Mesenchymal Transition in Response to Urban Particulate Matter Using Co-treatment and Post-treatment Exposure. Biol. Pharm. Bull. 42: 1322-1331 (2019d)

상세보기
Lee HS, Won NH, Kim KH, Lee H, Jun W, Lee KW. Antioxidant effects of aqueous extract of Terminalia chebula in vivo and in vitro. Biol. Pharm. Bull. 28: 1639-1644 (2005b)

상세보기
Li HB, Wong CC, Cheng KW, Chen F. Antioxidant properties in vitro and total phenolic contents in methanol extracts from medicinal plants. LWT-Food Sci. Technol. 41: 385-390 (2008)

상세보기
Ljubimova JY, Braubach O, Patil R, Chiechi A, Tang J, Galstyan A, Shatalova ES, Kleinman MT, Black KL, Holler E. Coarse particulate matter (PM 2.5-10 ) in Los Angeles Basin air induces expression of inflammation and cancer biomarkers in rat brains. Sci. Rep. 8: 5708 (2018)

상세보기
Mann EH, Ho TR, Pfeffer PE, Matthews NC, Chevretton E, Mudway I, Kelly FJ, Hawrylowicz CM. Vitamin D Counteracts an IL-23-Dependent IL-17A + IFN-γ + Response Driven by Urban Particulate Matter. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 57: 1-12 (2017)

상세보기
Ministry of Environment (ME). Enforcement Decree of the Clean Air Conservation Act. Ministry of Environment, Sejong, Republic of Korea (2019)
Ministry of Environment (ME). Enforcement Decree of the Framework Act on Environmental Policy Attached Sheet 1-Environmental standards. Ministry of Environment, Sejong, Republic of Korea (2020)
Pankov R, Yamada KM. Fibronectin at a glance. J. Cell Sci. 115: 3861-3863 (2002)

상세보기
Park KH, Kim JH, Yoon HS, Kim IH, Choi IM, Lee JY, Ju MK. Correlation between Coarse Airborne Particulate Matter and Mortality Rates of Malignant Neoplasm. Korean J. Health Promot. 16: 215-222 (2016)

상세보기
Park SK, Kang JY, Kim JM, Yoo SK, Han HJ, Shin EJ, Heo HJ. Cellular protective effect of Ecklonia cava extract on ultra-fine dust (PM 2.5 )-induced cytoxicity. Korean J. Food Sci. Technol. 51: 503-508 (2019)

원문보기 상세보기
Park KS, Kim YJ, Yoon JY, Kyung SY, An CH, Lee SP, Park JW, Jeong SH. Particulate Matter 10 from Asian Dust Storms Induces the Expression of Reactive Oxygen Species, NF-κB, TGF-β and Fibronectin in WI-26 VA4 Epithelial Cells. Tuberc. Respir. Dis. 65: 504-511 (2008)

원문보기 상세보기
Park SJ, Song SW, Seong DH, Park DS, Kim SS, Gou J, Ahn JH, Yoon WB, Lee HY. Biological Activities in the Extract of Fermented Codonopsis lanceolata. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 38: 983-988 (2009)

원문보기 상세보기
Patel, VJ, Roy SB, Mehta HJ, Joo M, Sadikot RT. Alternative and natural therapies for acute lung injury and acute respiratory distress syndrome. BioMed Res. Int. 2018: 1-10 (2018)
Quay JL, Reed W, Samet J, Devlin RB. Air Pollution Particles Induce IL-6 Gene Expression in Human Airway Epithelial Cells via NF-kappa B Activation. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 19: 98-106 (1998)

상세보기
Santana FPR, Pinheiro NM, Mernak MIB, Righetti RF, Martins MA, Lago JHG, dos Santos Lopes FDTQ, Tiberio IFLC, Prado CM. Evidences of Herbal Medicine-Derived Natural Products Effects in Inflammatory Lung Diseases. Mediators Inflamm. 2016: 1-14 (2016)
Seo YS, Kim HS, Lee AY, Chun JM, Kim SB, Moon BC, Kwon BI. Codonopsis lanceolata attenuates allergic lung inflammation by inhibiting Th2 cell activation and augmenting mitochondrial ROS dismutase (SOD2) expression. Sci. Rep. 9: 2312 (2019)

상세보기
Shin YK, Han AY, Hsieh YS, Kwon SH, Kim JH, Lee KW, Seol GH. Lancemaside A from Codonopsis lanceolata prevents hypertension by inhibiting NADPH oxidase 2-mediated MAPK signalling and improving NO bioavailability in rats. J. Pharm. Pharmacol. 71: 1458-1468 (2019)

상세보기
Song CH, Seo YC, Choi WY, Lee CG, Kim DU, Chung JY, Chung HC, Park DS, Ma CJ, Lee HY. Enhancement of Antioxidative Activity of Codonopsis lanceolata by Stepwise Steaming Process. Korean J. Med. Crop Sci. 20: 238-244 (2012)

원문보기 상세보기
Valavanidis A, Vlachogianni T, Fiotakis K, Loridas S. Pulmonary oxidative stress, inflammation and cancer: respirable particulate matter, fibrous dusts and ozone as major causes of lung carcinogenesis through reactive oxygen species mechanisms. Int. J. Environ. Res. Public Health 10: 3886-3907 (2013)

상세보기
Vermette D, Hu P, Canarie MF, Funaro M, Glover J, Pierce RW. Tight junction structure, function, and assessment in the critically ill: a systematic review. Intensive Care Med. Exp. 6: 37 (2018)

상세보기
Wang J, Huang J, Wang L, Chen C, Yang D, Jin M, Bai C, Song Y. Urban particulate matter triggers lung inflammation via the ROS-MAPK-NF-κB signaling pathway. J. Thorac. Dis. 9: 4398-4412 (2017)

상세보기
Wang M, Yang L, Ji M, Zhao P, Sun P, Bai R, Tian Y, Su L, Li C. Aqueous extract of Terminalia chebula induces apoptosis in lung cancer cells via a mechanism involving mitochondria-mediated pathways. Braz. Arch. Biol. Technol. 58: 208-215 (2015)

상세보기
World Health Organization (WHO). 3rd Meeting of the Global Platform on Air Quality and Health, Madrid, 7-9 March 2017 - Meeting Report (2017). Available from: https://www.who.int/airpollution/global-platform/Global_Platform_Consultation_Report_3rd_Meeting_DRAFT_30_May_2017.pdf?ua1. Accessed May (2017)
World Health Organization (WHO). Exposure to ambient air pollution from particulate matter for 2016. Version 2. Available from: https://www.who.int/airpollution/ambient/AAP_exposure_Apr2018_final.pd f?ua1. Accessed Apr. (2018)
Wray C, Mao Y, Pan J, Chandrasena A, Piasta F, Frank JA. Claudin-4 augments alveolar epithelial barrier function and is induced in acute lung injury. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 297: L219-L227 (2009)

상세보기
Xu LP, Wang H, Yuan Z. Triterpenoid saponins with anti-inflammatory activity from Codonopsis lanceolata. Planta Med. 74: 1412-1415 (2008)

상세보기
Yuan Z, Syed MA, Panchal D, Rogers D, Joo M, Sadikot RT. Cur-cumin mediated epigenetic modulation inhibits TREM-1 expression in response to lipopolysaccharide. Int. J. Biochem. Cell Biol. 44: 2032-2043 (2012)

상세보기
Zhao R, Guo Z, Zhang R, Deng C, Xu J, Dong W, Hong Z, Yu H, Situ H, Liu C, Zhuang G. Nasal epithelial barrier disruption by particulate matter ≤2.5 ㎛ via tight junction protein degradation. J. Appl. Toxicol. 38: 678-687 (2018)

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format