[논문]미세조류 동결보존 기술 개발의 최근 연구 동향

임준호; 서용배; 김선민; 전용재

doi:10.5352/jls.2021.31.10.960

미세조류 동결보존 기술 개발의 최근 연구 동향
Recent Research Trends of Cryopreservation Technology Based on Microalgae Chlorophyta 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.31 no.10, 2021년, pp.960 - 968

임준호 (부경대학교 자연과학대학 미생물학과) , 서용배 (부경대학교 기초과학연구원) , 김선민 (부경대학교 자연과학대학 미생물학과) , 전용재 (부경대학교 자연과학대학 미생물학과)

초록
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미세조류 연구는 18세기 후반부터 시작된 이후 생물산업에서 가장 중요한 생물자원으로 인식되어 왔다. 특히 미세조류의 산업 활용에 초점을 맞춘 식품/사료 및 생리 활성 화합물에 대한 초기 주요 연구 분야는 현재 대체 에너지 자원, 탄소 배출 저감 및 폐수 처리를 포함한 환경 연구 분야로 더욱 확대되고 있다. 하지만 그 산업적 활용의 중요성에도 불구하고 미세조류 배양의 장기 보존과 관련된 기초 연구 분야는 많은 주목을 받지 못하고 있다. 그러나 생물학적으로 활성을 띄는 안정적인 미세조류 배양체 보존은 이러한 미세조류의 산업적 활용을 더욱 부각시킬 수 있는 핵심적인 성공요소이다. 따라서 본 총설은 조류(algae)의 분류체계에서 가장 큰 분류군을 차지하는 녹조류(Chlorophyceae)를 포함하여 현재까지 개발된 다양한 최첨단 미세조류 냉동보존기술을 조사하였다. 또한, 국내 생물자원은행 및 국제 미세조류 자원은행에 기탁된 생물학적으로 활성을 띄는 미세조류 배양체를 보존·유지하기 수행하고 있는 보존 기술과 함께 동결보존 시 온도조절 효과, 보존제 효과 등 미세조류의 성공적인 동결보존 기술과 관련된 주요 요인들을 조사하였다. 본 연구를 통해 확인된 결과를 살펴보면, 미세조류의 형태 및 생리학적 다양성으로 인해 현재로서는 범용적으로 사용할 수 있는 표준 미세조류 장기 보존 방법이 없다는 것을 확인하였다. 따라서, 이러한 문제를 극복하기 위해서는 미세조류의 분류학적 체계를 명확하기 위한 종 특이적 바이오마커의 개발과 종 특이적 동결보존 방법에 기반한 체계적인 접근을 위한 기초 연구 분야에 대해 훨씬 더 많은 노력이 필요함을 확인하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

Since microalgae research started on late 18 century, they have been recognized as one of the most important bioresources used in bioindustry. Owing to the large efforts paid to industrial application of this microorganisms, their importance on food/feed and bioactive compounds has been further extending into the environmental research areas including alternative energy resources, mitigation of the carbon emission, and waste-water treatment. However, despite the importance on their industrial application, the fundamental research field related to the long-term preservation of microalgae culture has not received much attention. However, a less labor intensive and cost-efficient preservation technology enabling biologically active and stable microalgae-culture provides a key success factor in the biotechnological application. Therefore, this study investigated various cutting-edge microalgae cryopreservation technologies currently developed so far, mainly targeting Chlorophyta, which occupies the largest taxon in the classification system of microalgae. In addition, for the development of successful cryopreservation technique, the key factors such as temperature control effect and preservative effect during cryopreservation of microalgae culture were investigated. In addition, the problems with current preservation technology that is being used in Korean domestic biological resource banks and the international microalgal resource banks are described. According to our investigation, currently no standard method for long-term preservation of microalgae is available due to their various morphological and physiological characteristics. To overcome such issues, much more efforts on fundamental research area on the identification of specific biomarker used for microalgae taxonomical classification and further systemic approaches based on strain-specific cryopreservation methods needed.

주제어

표/그림 (7)

그림 Fig. 1. Schematic diagram of the microalgal phylogenetic tree [1].
그림 Fig. 2. Industrial field of microalgae [5, 8, 10, 22, 30].
그림 Fig. 3. Schematic diagram of cryopreservation procedures for microalgae.
표 Table 1. The comparison of cell viability effects using various penetrative cryoprotectants
표 Table 2 The list of freezing techniques and methodologies used in the cryopreservation of microalgae
표 Table 3. The list of microalgae resources currently preserved using a cryopreservation method in UTEX
표 Table 4. The list of current microalgae resources index pre-served in Korean biological resource banks at 2020

AI 본문요약
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문제 정의

생물자원의 장기 보존은 국가적으로 생물주권을 확립하는 것과 산업적 활용을 위해 필수적으로 필요한 매우 중요한 요소이다. 또한, 미세조류는 앞서 언급한 다양한 산업적 활용도를 가지는 생물자원으로써 중요성이 점차 부각되고 있는 이유로 본 총설에서는 차세대 생물자원으로써 중요성이 강조되고 있는 미세조류의 장기 보존을 위한 동결보존법에 대한 연구현황을 정리함으로써, 향후 신종 발굴과 산업적 중요 미세조류의 안정적인 장기 보존을 위한 동결보존법의 문제점을 극복하기 위해 현재 수행되고 있는 연구 경향에 대해 논하고자 한다.

성능/효과

하지만 같은 속에 포함되는 미세조류도 종에 따라서 동결 방법에 차이에 따른 효과가 다른 것으로 파악되었다. CPA의 경우, 현재 미세조류에서 침투형 CPA인 DMSO, methanol 등의 사용을 선호하고 있다. Chlamydomo- nas, Kirchneriella, Monoraphidium 등의 경우 5% DMSO 사용시재배양율이 높고, Pyramimonas 등은 10% DMSO, 10% Metha- nol에서 재배양율이 높은 것으로 보고하고 있다.
, Oocystis sp. 등이 효율이 높았으며, 제에 동결 (Slow cooling, Two Step)의 경우는 Monoraphidium sp., Kirchneriella sp., Chlorobion sp., Chlorella sp. 등이 효율이 높은 것으로 분석되었다.
, Chlorella sp. 등이 효율이 높은 것으로 분석되었다. 하지만 같은 속에 포함되는 미세조류도 종에 따라서 동결 방법에 차이에 따른 효과가 다른 것으로 파악되었다.
미세조류의 현재까지 연구 경향을 살펴보면 순수 분리 및 배양법은 많은 발전을 이루었다. 하지만 미세조류의 장기보존법은 1949년 Pringsheim가 확립한 계대배양법이 현재까지도 다수의 자원 소재 은행 및 연구자들이 진행하고 있는 방법이다.
미세조류의 장기 보존을 위한 표준 동결보존법을 제안하기 위해서는 많은 문제점을 극복해야한다. 앞서 소개된 연구 결과에서 미세조류의 경우 같은 속에 있는 종들도 동결 보존을 위한 최적화 방법이 다르며, 같은 종일지라도 서식 환경에 따라 동결 보존법이 다르게 적용되는 경우가 많았다. 이러한 이유로 미세조류의 표준 동결보존법을 위해 미세조류의 분류체계에 대한 연구가 더욱 심도 깊게 이루어져야 할 것이다.
하지만 미세조류의 장기보존법은 1949년 Pringsheim가 확립한 계대배양법이 현재까지도 다수의 자원 소재 은행 및 연구자들이 진행하고 있는 방법이다. 이 방법은 잦은 계대배양에 따른 시간, 인력 소모가 많은 노동집약적 방법이며, 유전적, 생리적 특성을 소실하는 단점이 있어 이를 보완하기 위한 방법으로 -60℃ 이하나 -130℃ 이하의 액체 질소 내에서 보존하는 방법인 동결보존법이 대안으로 제시되고 있다. 하지만 동결보존법은 동결 및 해동 과정에서 세포가 받는 삼투압 스트레스, cold shock, 세포 내외 얼음 결정 형성에 의한 잠재적 손상을 감소시켜야 하며, 보존제의 세포 독성 문제를 극복해야 한다.
이와 같은 문제를 해결하기 위해서 다수의 연구자들이 동결보존 시 온도 제어와 보존제 영향에 대한 연구를 진행하였으며, Table 1, 2에서 보는 바와 같이 미세조류 종 별 재배양율이차이를 보이는 것으로 분석되었다. 급속 동결(Rapid cooling; One step)에 의해 장기 보존될 수 있는 미세조류는 Nanochloris sp.
한편, 국내외 미세조류 자원의 체계적 관리를 위한 자원 은행 현황은 국외의 경우 주요 선진국(미국, 캐나다 등)에서는 1980년대에 이미 미세조류의 산업적 응용 가능성을 인식하고 체계적 관리를 위한 시스템을 구축하여 전 세계 연구자들에게 미세조류 배양체 분양 및 관련 정보를 제공하고 있다. 장기보존을 위한 방법은 이들 국가도 현재는 계대배양이 주된 장기 보존법으로 활용되고 있으나, 점차적으로 동결보존법이 계대배양 법을 대체할 것으로 예상된다. 국내의 경우도 국립생물자원관, 낙동강생물자원관, 해양생물자원관 등의 생물자원 소재 은행에서 활발히 국내 서식 및 선행 연구된 미세조류 주를 수집, 장기 보존을 하고 있다.
등이 효율이 높은 것으로 분석되었다. 하지만 같은 속에 포함되는 미세조류도 종에 따라서 동결 방법에 차이에 따른 효과가 다른 것으로 파악되었다. CPA의 경우, 현재 미세조류에서 침투형 CPA인 DMSO, methanol 등의 사용을 선호하고 있다.
이 방법은 잦은 계대배양에 따른 시간, 인력 소모가 많은 노동집약적 방법이며, 유전적, 생리적 특성을 소실하는 단점이 있어 이를 보완하기 위한 방법으로 -60℃ 이하나 -130℃ 이하의 액체 질소 내에서 보존하는 방법인 동결보존법이 대안으로 제시되고 있다. 하지만 동결보존법은 동결 및 해동 과정에서 세포가 받는 삼투압 스트레스, cold shock, 세포 내외 얼음 결정 형성에 의한 잠재적 손상을 감소시켜야 하며, 보존제의 세포 독성 문제를 극복해야 한다.
Chlamydomo- nas, Kirchneriella, Monoraphidium 등의 경우 5% DMSO 사용시재배양율이 높고, Pyramimonas 등은 10% DMSO, 10% Metha- nol에서 재배양율이 높은 것으로 보고하고 있다. 하지만 많은 종의 미세조류가 이에 해당하는 것은 아니었으며, 특히 20% 이상의 DMSO를 사용 시 세포 독성 문제를 일으킨다는 연구 결과도 제시되고 있다. 이러한 이유로 세포 독성을 일으키지 않으며 효율이 좋은 소재를 찾는 연구가 진행되고 있다.

후속연구

특히 빙하 세균인 Pseudomonas sp. BGI-2가 생합성하는 EPS가 5% DMSO 사용보다 우수한 재배양율을 보인다는 보고는 향후 새로운 동결 보존제 개발에 있어 극지방의 생물 및 미생물 유래 소재를 활용한 동결보존방법 개발도 큰 도움을 줄 수 있을 것으로 생각된다.
최근에 국립생물자원관과 낙동강생물자원관에서 동결보존을 위한 새로운 방법을 개발하여 학계에 발표하는 등의 실적을 내고 있으나, 미국 등의 국가와 비교 시 국내의 미세조류 동결 보존에 관한 연구는 미미한 실정이다. 이러한 문제를 극복하기 위해서는 국가 차원에서 차세대 생물자원인 미세조류의 장기 보존을 위한 연구에 대해 지원을 확대할 필요가 있다.
앞서 소개된 연구 결과에서 미세조류의 경우 같은 속에 있는 종들도 동결 보존을 위한 최적화 방법이 다르며, 같은 종일지라도 서식 환경에 따라 동결 보존법이 다르게 적용되는 경우가 많았다. 이러한 이유로 미세조류의 표준 동결보존법을 위해 미세조류의 분류체계에 대한 연구가 더욱 심도 깊게 이루어져야 할 것이다. 이를 토대로 개별 미세조류의 동결 보존을 위해 동결 및 해동 시세포 손상을 최소화 수 있는 적정 온도 제어법, 최초 생존 세포 수의 적정량, 보존제 농도 및 노출 시간에 대한 연구가 필수적으로 분석되어야 할 것이다.
이러한 이유로 미세조류의 표준 동결보존법을 위해 미세조류의 분류체계에 대한 연구가 더욱 심도 깊게 이루어져야 할 것이다. 이를 토대로 개별 미세조류의 동결 보존을 위해 동결 및 해동 시세포 손상을 최소화 수 있는 적정 온도 제어법, 최초 생존 세포 수의 적정량, 보존제 농도 및 노출 시간에 대한 연구가 필수적으로 분석되어야 할 것이다. 이와 더불어 동결 및 해동 후 살아있는 미세조류의 세포내 탄수화물, 단백질, 지방 함량이 변화하는 등의 현상이 발생하기 때문에 동결 전 후 나타나는 대사과정에 대한 분석을 분자생물학 및 생화학적 분석법을 활용하여 동결 보존 후 세포 재배양율을 높일 수 있는 방안을 모색하여야 할 것이다.
이를 토대로 개별 미세조류의 동결 보존을 위해 동결 및 해동 시세포 손상을 최소화 수 있는 적정 온도 제어법, 최초 생존 세포 수의 적정량, 보존제 농도 및 노출 시간에 대한 연구가 필수적으로 분석되어야 할 것이다. 이와 더불어 동결 및 해동 후 살아있는 미세조류의 세포내 탄수화물, 단백질, 지방 함량이 변화하는 등의 현상이 발생하기 때문에 동결 전 후 나타나는 대사과정에 대한 분석을 분자생물학 및 생화학적 분석법을 활용하여 동결 보존 후 세포 재배양율을 높일 수 있는 방안을 모색하여야 할 것이다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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