[논문]Low-temperature pausing of cultivated mammalian cells

Hunt, Lisa; Hacker, David L.; Grosjean, Fré; dé; ric; De Jesus, Maria; Uebersax, Lorenz; Jordan, Martin; Wurm, Florian M.

doi:10.1002/bit.20320

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Biotechnology and bioengineering, v.89 no.2, 2005년, pp.157 - 163

Hunt, Lisa (Swiss Federal Institute of Technology Lausanne, Faculty of Basic Sciences, Institute of Biological and Chemical Process Sciences, CH1015 Lausanne, Switzerland) , Hacker, David L. (telephone: 041.21.693.6141) , Grosjean, Frédéric (fax: 041.21.693.6140) , De Jesus, Maria (Swiss Federal Institute of Technology Lausanne, Faculty of Basic Sciences, Institute of Biological and Chemical Process Sciences, CH1015 Lausanne, Switzerland) , Uebersax, Lorenz (telephone: 041.21.693.6141) , Jordan, Martin (fax: 041.21.693.6140) , Wurm, Florian M. (Swiss Federal Institute of Technology Lausanne, Faculty of Basic Sciences, Institute of Biological and Chemical Process Sciences, CH1015 Lausanne, Switzerland)

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There are currently two methods for maintaining cultured mammalian cells, continuous passage at 37°C and freezing in small batches. We investigated a third approach, the “pausing” of cells for days or weeks at temperatures below 37°C in a variety of cultivation vessels. High cell viability and exponential growth were observed after pausing a recombinant Chinese hamster ovary cell line (CHO-Clone 161) in a temperature range of 6–24°C in microcentrifuge tubes for up to 3 weeks. After pausing in T-flasks at 4°C for 9 days, adherent cultures of CHO-DG44 and human embryonic kidney (HEK293 EBNA) cells resumed exponential growth when incubated at 37°C. Adherent cultures of CHO-DG44 cells paused for 2 days at 4°C in T-flasks and suspension cultures of HEK293 EBNA cells paused for 3 days at either 4°C or 24°C in spinner flasks were efficiently transfected by the calcium phosphate-DNA coprecipitation method, yielding reporter protein levels comparable to those from nonpaused cultures. Finally, cultures of a recombinant CHO cell line (CHO-YIgG3) paused for 3 days at 4°C, 12°C, or 24°C in bioreactors achieved the same cell mass and recombinant protein productivity levels as nonpaused cultures. The success of this approach to cell storage with rodent and human cell lines points to a general biological phenomenon which may have a wide range of applications for cultivated mammalian cells. © 2004 Wiley Periodicals, Inc.

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