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제안 방법
- 강원대학교에 재학 중인 19 ~ 26세의 남녀 학생 37명으로 소변 시료를 채취하여 실 험실로 옮겨 분석 전까지 냉장고에 보관하였고 48시간 이내에 추출하여 분석하였다. 또한, 소변의 부피에 대하여 보정하기 위해 크레아티닌의 농도를 측정하였고, 코티닌의 농도를 크레아티닌의 농도로 나눈 값(cotinine/creatinine ratio, CCR)을 자료 분석에 이용하였다.
- 2g(소변 4mL를 포화시키기에 충분한 양)을 첨가하여 제조된 시료를 분석하여 얻은 피크 면적을 비교하였다. 또한, 추출 후 농축하기 전에 0.5N HCI in MeOH의 첨가 여부에 따른 내부 표준물질, 니코틴 및 코티닌의 손실 정도를 비교하여 보았다. 이와 같은 실험은 각각 두 번 반복하여 실시하였다.
- 본 연구에서는 기존의 방법들을 기초로 하여 주줄 효율을 최대화하고 농죽 과정에서 의 손실 정도를 실험을 통해 검증하고, GC/NPD를 이용하여 니코틴과 코티닌을 동시에 분석하는 방법을 확립하였으며, 이를 일부 비흡연자와 흡연자들로부터 얻은 소변 시료에 적용하였다.
- 소변 시료 중 니코틴과 코티닌을 분석하기 위해 시료를 염기성으로 만든 후, Na2SO4 를 첨가하여 주줄 효율을 증대시키고 DCM으로 주줄한 후에, 질소 기체로 농죽하기 전에 HC1 을 소량 첨가하여 손실을 최소화할 수 있는 방법을 확립하였다. 이 분석 방법으로 좋은 직선관계의 검량선과 재현성 및 회수율을 얻을 수 있었으며, 이를 일부 성인 남녀 흡 연자와 비흡연자에 대하여 적용시킨 결과, 흡연자 집단이 비흡연자 집단에 대해 통계적으 로 유의성 있는 높은 수치를 나타내었다.
- 5mL를 또다른 원심분리관으로 옮겼다. 여 기에 O.lmL의 0.5N HC1 in MeOH 용액을 첨가하여 잘 섞어 준 후에 질소 가스로 불어 주어 건조시키고 0.3ml工의 MeOH을 첨가하여 vortex mixinge} 후에 2“L를 GC/NPD를 이용하여 분석하였다.
- 65이었다. 여 섯 점에 대하여 그린 니코틴과 코티닌의 정량을 위한 검량선은 Fig. 2에 나타내었는데, 니코틴 및 코티닌에 대한 검량선의 결정계수(户)는 각각 0.9970과 0.9998로 좋은 직선의 관계를 나타내었으며, 여기에서 구한 직선의 회귀식으로부터 각 시료 중에 함유된 코티닌 의 농도를 구하였다.
- 5). 여기에 4mL의 DCM을 가한 후에 0.315mg/mL의 농도로 제조된 내부 표준물질(DMAP) 4匹를 가하였다. 여기에 Na2SO4 1.
- 위의 과정과 동일한 방법으로 시료를 준비하되 Na2SC)4의 첨가 여부에 따른 추출 효 율을 비교하기 위하여, 니코틴과 코티닌에 대하여 낮은 농도(10.1 및 68.0 ng/mU와 높은 농도(60.6 및 408 mg/mL)에 대하여 소변 시료에 염을 첨가하지 않은 경우와 1.2g(소변 4mL를 포화시키기에 충분한 양)을 첨가하여 제조된 시료를 분석하여 얻은 피크 면적을 비교하였다. 또한, 추출 후 농축하기 전에 0.
- 정량을 위한 검량선은 여섯 점의 농도를 이용하여 작성하였으며, 니코틴 및 코티닌의 농도 범위는 각각 2.02 ~ 141ng/mL 및 13.6 ~ 952ng/mL로 정하였다. 정량을 위한 식 은 분석 물질의 농도(Qx)와 각 농도에 대하여 추출하여 분석한 니코틴 또는 코티닌에 대한 GC 크로마토그램의 피크 면적(Ax)을 내부표준물질에 대한 피크 면적(A*)으로 나눈 값(AJA*)과의 직선의 관계식으로부터 구하였다.
- 이와 같은 실험은 각각 두 번 반복하여 실시하였다. 회수율과 재현성에 대한 시험은 각 농도에 대하여 세 번씩 반복 하여 실시하였다.
대상 데이터
- (S)-(-)-Nicotine, (-)-cotinine, 2-(dimethylamino)pyridine(DMAP, 내부표준물질) 및 dichloromethane(DCM)■& Sigma-Aldrich에서, methanol(MeOH)은 Fluka Chemie에서 구 입하였다. Sodium hydroxide(NaOH), sodium sulfate(Na2SO4)및 hydrochloric acid(37%) 는 각각 Duksan Pure Chemical Co.
- 강원대학교에 재학 중인 19 ~ 26세의 남녀 학생 37명으로 소변 시료를 채취하여 실 험실로 옮겨 분석 전까지 냉장고에 보관하였고 48시간 이내에 추출하여 분석하였다. 또한, 소변의 부피에 대하여 보정하기 위해 크레아티닌의 농도를 측정하였고, 코티닌의 농도를 크레아티닌의 농도로 나눈 값(cotinine/creatinine ratio, CCR)을 자료 분석에 이용하였다.
- 분석에 사용된 GC와 NPD는 도남 인스트루먼트사의 DS6200A이었으며, 분석용 칼럼 은 BP-5(SGE)로 필름의 두께는 0.25“m이고, 길이는 30m, 내경은 0.32mm이었다. 주입구 와 검출기의 온도는 각각 240℃와 300℃이었고, 분석 시료는 1:4로 분할 주입하였다.
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