곤충병원성 선충으로부터 각각 공생박테리아를 분리하여 flask 상에서 7일간 배양하여 공생박테리아의 성장정도, 단백질 분해 효소의 생성, 배양상등액의 꿀벌부채명나방 유충에 대한 살충성 및 지방산 함량에 관한 연구를 수행한 결과 XR-PC 및 XR-MK의 성장 및 살충성이 가장 우수한 것으로 나타났으며 protease 활성은 XR-DR이 배양 4일째 최대 활성을 보였으며, 지방산 함량의 경우 XR-PC 및 XR-HY가 다른 종의 지방산 함량에 비해 12:0, 14:0, 13:0 iso, 16:1 cis 5, 17:0 cyclo에서 함량의 차이를 나타내었다.
곤충병원성 선충으로부터 각각 공생박테리아를 분리하여 flask 상에서 7일간 배양하여 공생박테리아의 성장정도, 단백질 분해 효소의 생성, 배양상등액의 꿀벌부채명나방 유충에 대한 살충성 및 지방산 함량에 관한 연구를 수행한 결과 XR-PC 및 XR-MK의 성장 및 살충성이 가장 우수한 것으로 나타났으며 protease 활성은 XR-DR이 배양 4일째 최대 활성을 보였으며, 지방산 함량의 경우 XR-PC 및 XR-HY가 다른 종의 지방산 함량에 비해 12:0, 14:0, 13:0 iso, 16:1 cis 5, 17:0 cyclo에서 함량의 차이를 나타내었다.
In order to investigate fatty acid contents and effects of cell growth on the production of an extracellular protease and toxicity of exotoxin, several symbiotic bacteria with highly effective toxins were isolated from seven species of entomopathogenic nematodes belong in Steinernematidae(Steinernem...
In order to investigate fatty acid contents and effects of cell growth on the production of an extracellular protease and toxicity of exotoxin, several symbiotic bacteria with highly effective toxins were isolated from seven species of entomopathogenic nematodes belong in Steinernematidae(Steinernema glaseri XR-DR, S. glaseri XR-NC, S. glaseri XR-MK, S. carpocapsae XR-PC, S. maticola XR-MO, S. Longicaudum XR-LC) and Heterorhabditidae sp.(Heterorhabditis bacteriophora XR-HY). In the cell growth and exotoxin toxicity, XR-PC and XR-MK were superior to other species when cultured in vitro. The protease activity of XR-DR was remarkable compared to other species. In the case of XR-HY, the protease activity increased in parallel with cell growth. Interestingly the fatty acid contents of XR-PC and XR-HY were significantly different from those of other species 12:0, 14:0, 13:0 iso, 16:1 cis 5 and 17:0 cyclo.
In order to investigate fatty acid contents and effects of cell growth on the production of an extracellular protease and toxicity of exotoxin, several symbiotic bacteria with highly effective toxins were isolated from seven species of entomopathogenic nematodes belong in Steinernematidae(Steinernema glaseri XR-DR, S. glaseri XR-NC, S. glaseri XR-MK, S. carpocapsae XR-PC, S. maticola XR-MO, S. Longicaudum XR-LC) and Heterorhabditidae sp.(Heterorhabditis bacteriophora XR-HY). In the cell growth and exotoxin toxicity, XR-PC and XR-MK were superior to other species when cultured in vitro. The protease activity of XR-DR was remarkable compared to other species. In the case of XR-HY, the protease activity increased in parallel with cell growth. Interestingly the fatty acid contents of XR-PC and XR-HY were significantly different from those of other species 12:0, 14:0, 13:0 iso, 16:1 cis 5 and 17:0 cyclo.
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문제 정의
이에 본 연구에시 는 Steinemematidaee 6종과 Heterohahclit.idaee 1종의 곤충병 원 성선충으요부터 삭 사 공 셍 박테 리 아흘 분리 하이 flask 상에서 7일 산 베 양하어 공싱 박테 리 아 의성장 정도, 단백질 분해 효소의 생성, 비양상등액의 꿀벌부채명나방 유층에 대한 살충성 및 지방산 함량에 관한 연구를 수행하였다.
제안 방법
3“L의 배양 원심분리 상등액을 유충의 혈장에 mic「osy「inge를 사용해 주사하였으며 각 시료에 대해 4마리의 유충을 이용했고 이는 25V inc니xitor에 보관하면서 시간에 따른 사멸정도를 조사하였다.
NBTA배지에서 3-5일 정도 성장한 colony를 취해서 250mL fla이100mL 5% yeast extract베지에 접종하여 28℃, 200rpm incubat이■에서 7일간 배양하였으며 24시간 간격으로 sampling 하였다. 공생박테리아의 성장은 배양으日을 1:50 희석하여 560nm에서 흡광도를 측정하였다.
단빅질 분해 효소의 활성은 Schmidt 등의 방법을 수정하여 측정하였다. O.lmL의 베양원심분리 상등액, 3mg HPA 그리고 1.4mL buffer(lmM CaCl2, 50mM Tris-HCl pH 8.0)를 혼합하여 2시간 동안 30℃에서 2(X)rpm으로 이viking해 반응시 킨 후 원심분리 하여 반응하지 않고 남은 HPA를 제거한 반응여액의 흡광도를 596nm에人4 측정하였다.
곤충병 원성 선충 SteineiTiematidae 6종(Stein。厂nema glaseri XR-DR, S. glaseri XR-NC, S. glaseri XR-MK, S ca「pocaps眼 XR-PC, S. inoticola XR-MO, S Longicaudttm XR-LC) 과 Heterorhabditidae 1.종(Hetemrhabdltls bacterioph이p XR-HY)을 꿀벌 부채 명 나방 유층에 접종하여 사멸시킨 후 95% ethancl에 담궈 표면 살균한 후 3-4회 무균증류수를 이용하여 세척하여 무균적으로 유충을 해부하고 혈강을 NBTA배지에 plate out한 후 28C incubator에 서 베 양하였다.
하였다. 공생박테리아의 성장은 배양으日을 1:50 희석하여 560nm에서 흡광도를 측정하였다. 그리고 배양액을 IQOOOrpm에서 15분간 원심분리하여 박테리아를 제거한 상등액으로 단백질 분해 효소 및 꿀벌부채명나방 유충에 대한 살충성 test에 시료로 사용하였다.
단빅질 분해 효소의 활성은 Schmidt 등의 방법을 수정하여 측정하였다. O.
데이터처리
4mL로 흘려주었고 column의 초기온도는 1701로 260C까지 5℃/niin의 속도를 온도를 상승시켰으며 detect이-는 FID를 사용하였다. 그리고 지방산 성분 및 함량의 최종분석은 MIS Sherlock software# 이용하여 분석하였다.
이론/모형
살충성 test는 꿀벌부체명나방 유충의 이용해 Park과 Yu의 방법에 준하여 실행하였다. 3“L의 배양 원심분리 상등액을 유충의 혈장에 mic「osy「inge를 사용해 주사하였으며 각 시료에 대해 4마리의 유충을 이용했고 이는 25V inc니xitor에 보관하면서 시간에 따른 사멸정도를 조사하였다.
성능/효과
곤충병원성 선충으로부터 각각 공생박테리아를 분리하여 flask 상에서 7일간 배양하여 공 셍박테리아의 성장정도, 단백질 분해 효소의 생성, 베양상등액의 꿀벌부채명나방 유충에 대한 살충성 및 지방산 함량에 관한 연구를 수행한 결과 XR-PC 및 XR-MK의 성장 및 살충 성이 가장 우수한 것으로 나타났으며 protease 활성은 XR-DR이 베양 4일째 최대 활성을 보였으며, 지방산 함량의 경우 XR-PC 및 XR-HY가 다른 종의 지방산 함량에 비해 00. 14:0, 13:0 iso, 16: 1 cis 5, 17:0 cyclo에서 함량의 차이를 나타내었다.
이러한 결과는 공생박테리아의 성장 초기단게에서 살충 활성이 뛰어남을 시사해 준다. 공생박테리아의 protease 활성의 겅우 XR-DR이 베양 4일째에 죄대 활성을 나타내있으며 XR-HY는 베양 초기부터 베양 7일째까지 서서히 증가하는 경향을 보였으며 이들을 제외한 나머지 종은 배양 초기부터 말기까지 거의 일정하게 유지되었다.
Figure 1을 보면 대부분의 종이 배양 4일째에 최데 성장을 나타내었으며 이후는 사멸기로 접어들었고 그리나 XR-HY의 경우는 다른 종들에 비하여 성장속도가 느렸고 6일째에 최대 성장을 나타내었다. 공생박테리아의 성장과 관련하여 꿀벌부체명 나방에 데한 살충성 test를 실시한 결과 XR-PC 및 XR-MK가 살충성이 우수하였고 XR-HY를 제외한 대분분의 종이 배양 1-2일째에 살충 활성이 뛰어났으며 XR-HY종의 경우는 배양 3일 이후에 살충 활성이 나타났다. 이러한 결과는 공생박테리아의 성장 초기단게에서 살충 활성이 뛰어남을 시사해 준다.
공싱박테리아의 성장은 XR-PC 및 XR-MK가 가장 우수한 것으로 나타났다. Figure 1을 보면 대부분의 종이 배양 4일째에 최데 성장을 나타내었으며 이후는 사멸기로 접어들었고 그리나 XR-HY의 경우는 다른 종들에 비하여 성장속도가 느렸고 6일째에 최대 성장을 나타내었다.
나타남을 시사해 준다. 기존에 알려진 Xenorhabdus속의 지방산 성분 및 함량과 비교해 꼴 때 전제 직 인 지 방산 성분과 함량비 가 유사하였으나 그 중 X. nematophilus의 17:0 cyclo 의 함량비에 있어서 본 연구에 사용된 공싱박테리아는 약 4-15%로 기존의 X. nematophilus 에 비해 적은 함량비를 나타내는 것으로 확인되었다.
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