식물병원균에 대한 Helicosporium 의 항균작용을 확인하기 위하여 식물병원균인 Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler, Alternaria 속을 선정하였고, 이에 대한 항균작용을 검토한 결과, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2 에는 강한 항균활성을 나타내었으며, Alternaria에는 미약한 항균활성을 가졌으며 Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler에 대해서는 항균활성을 하지 않는 것으로 확인되었다. 이 항균물질의 구조를 $^1H-NMR$ 스펙트럼을 통해서 분석한 결과 이 물질은 콜레스테롤 에 해당하는 구조를 가진 것으로 추정된다.
식물병원균에 대한 Helicosporium 의 항균작용을 확인하기 위하여 식물병원균인 Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler, Alternaria 속을 선정하였고, 이에 대한 항균작용을 검토한 결과, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2 에는 강한 항균활성을 나타내었으며, Alternaria에는 미약한 항균활성을 가졌으며 Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler에 대해서는 항균활성을 하지 않는 것으로 확인되었다. 이 항균물질의 구조를 $^1H-NMR$ 스펙트럼을 통해서 분석한 결과 이 물질은 콜레스테롤 에 해당하는 구조를 가진 것으로 추정된다.
To confirm the antifungal activity to plant pathogenic fungi, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler, Alternaria sp. were selected. Helicosporium has the antifungal activity to Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, while Fusarium oxysporium,...
To confirm the antifungal activity to plant pathogenic fungi, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler, Alternaria sp. were selected. Helicosporium has the antifungal activity to Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, while Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler did not affected even though Alternaria made a feeble response to that antifungal compounds. From $^1H-NMR$ spectrum of antifungal compound, this compound was guessed to be a structure corresponding to cholesterol.
To confirm the antifungal activity to plant pathogenic fungi, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler, Alternaria sp. were selected. Helicosporium has the antifungal activity to Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, while Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler did not affected even though Alternaria made a feeble response to that antifungal compounds. From $^1H-NMR$ spectrum of antifungal compound, this compound was guessed to be a structure corresponding to cholesterol.
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문제 정의
이러한 농약의 남용으로 심각하게 파괴된 생태계를 복원하기 위해서는 자연계에 존재하는 식물에 대한 비병원성 진균, 기생성선충 둥 유익한 생물 농약 인자를 탐색, 선발 및 개발하여 환경 친화형 식물 병해충방제 시스템 기술을 정 립하는 것이 시급하다. 따라서 본 연구에서는 Helicosporium을 대량 배양하여 항균활성을 가지는 물질을 분리, 정제하고, 이를 이용하여 몇 종의 진균류를 대상으로 항균활성을 검증함과 동시에 이 물질을 분석하였다.
제안 방법
전개 후 plate를 50% 황산으로 분무한 후 가열하여 생긴 spot을 확인하였다. HPLC는 Hypersil BDS C18로 역상액체 크로마토그래피 시스템(Water HPLC)으로 실온에서 분석하였으며, 용매는 acetonitrile / water (60 : 40)을 사용하여 분당 0.5ml의 유속으로 분석하였다. 또한 ifl-NMR을 이용하여 항균물질의 예상되는 구조를 밝혔다.
Helicospo厂ium의 항균활성을 확인하기 위하여는 PDB와 YM배지를 사용하였다. 대상 진균류로는 Rhizoctonia solani, Fusarium, Altemaria, Pytophthora 등이며, Rhizoctonia so/onz.
상등액에 petroleum ether를 가하여 150rpm으로 25℃에서 72시간 shaking 후, petroleum ether 층으로 이동한 Helicosporium sp. KCTC 0635BP의 항균물질을 분별깔대기를 이용하여 분리시시켰다. 분리된 petroleum ethei층을 다시 6, 000rpm으로 상온에서 10분간 원심분리하고 침전물을 제거한 상둥액을 25℃ 에서 3시간동안 농축시키고, 농축물질을 methyl alcohol°fl 녹인 후, 0.
UV-spectrophotometer로 540nm에서 흡광도를 측정하여 성장률을 조사하고, 최적온도, 최적 pH를 결정하였다. 본 배양은 PDB 배지에 초기 흡광도가 0.
여과된 추출물을 UV-VIS spectrophotometer5. spectrmm을 확인하였고, TLC, HPLC 및 NMR로 분석, 확인하였다. TLC plate(Merck)에 추출된 항균물질을 methanol에 녹인 샘플을 점적하여 chloroform / methanol / acetic acid가 85 : 15 : 2의 비율로 섞인 용매로 이동시켰다.
5ml의 유속으로 분석하였다. 또한 ifl-NMR을 이용하여 항균물질의 예상되는 구조를 밝혔다.
최적 pH를 결정하였다. 본 배양은 PDB 배지에 초기 흡광도가 0.002가 되도록 접종한 후 150rpm, 251에서 진탕 배양하면서 경시적으로 흡광도를 측정하여 균주의 성장을 측정하였다.
KCTC 0635BP의 항균물질을 분별깔대기를 이용하여 분리시시켰다. 분리된 petroleum ethei층을 다시 6, 000rpm으로 상온에서 10분간 원심분리하고 침전물을 제거한 상둥액을 25℃ 에서 3시간동안 농축시키고, 농축물질을 methyl alcohol°fl 녹인 후, 0.45㎛ syringe filter로 여과되어진 추출물을 UV-VIS spectrophotometer# 사용하여 spectrmm 분석하였고, acetonitrile과 증류수를 60:40으로 혼합한 용액을 전개용액으로 사용하여 HPLC로 분석하였다. HPLC columne C18을 사용하여 220nm에서 탐지하였고, flow rate는 li戒/min로 하였다.
TLC plate(Merck)에 추출된 항균물질을 methanol에 녹인 샘플을 점적하여 chloroform / methanol / acetic acid가 85 : 15 : 2의 비율로 섞인 용매로 이동시켰다. 전개 후 plate를 50% 황산으로 분무한 후 가열하여 생긴 spot을 확인하였다. HPLC는 Hypersil BDS C18로 역상액체 크로마토그래피 시스템(Water HPLC)으로 실온에서 분석하였으며, 용매는 acetonitrile / water (60 : 40)을 사용하여 분당 0.
대상 데이터
대상 진균류로는 Rhizoctonia solani, Fusarium, Altemaria, Pytophthora 등이며, Rhizoctonia so/onz.에 대해서는 항균활성을 강하게 가지며, AVema厂에는 미약하게 항균작용을 나타내며, Fusarium과 Pytophth이p에는 항균활성을 나타내지 않는 것으로 확인되었다.
본 실험에서 사용한 배지는 Potato dextrose agar, Yeast extract agar 및 Commeal agar였다.
본 실험에서 사용한 시약은 Sigma사 제품이며, 흡광도 측정에는 Spectrophotometer (UV1601, Shimadzu), HPLC column (AGILENT 1100)은 C18을 사용하였다.
성능/효과
PDB 배지에 접종하여 20, 25, 30, 35, 40X:의 온도에서 진탕 배양하여 경시적으로 540nm에서 흡광도를 측정한 결과 최적 배양온도는 25℃인 것으로 확인되었으며, 최적 pH는 8로 나타났다.
&比77皿口.。에는 미약한 항균활성을 가졌으며, Fusarium oxysporium, Phytophthora d厂esc/i/e厂에 대해서는 항균활성을 하지 않는 것으로 확인되었다. 이 항균물질의 구조를 1H-NMR 스펙트럼을 통해서 분석한 결과 이 물질은 콜레스테롤에 해당하는 구조를 가진 것으로 추정된다.
식물병원균에 대한 Helicosporium 의 항균작용을 확인하기 위하여 식물병원균인 Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2, Fusarium oxysporium, Phytophthora dreschler, A/temci「ici속을 선정하였고, 이에 대한 항균작용을 검토한 결과, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia solani AG2-2에는 강한 항균활성을 나타내었으며, &比77皿口.。에는 미약한 항균활성을 가졌으며, Fusarium oxysporium, Phytophthora d厂esc/i/e厂에 대해서는 항균활성을 하지 않는 것으로 확인되었다.
대상 진균류로는 Rhizoctonia solani, Fusarium, Altemaria, Pytophthora 등이며, Rhizoctonia so/onz.에 대해서는 항균활성을 강하게 가지며, AVema厂에는 미약하게 항균작용을 나타내며, Fusarium과 Pytophth이p에는 항균활성을 나타내지 않는 것으로 확인되었다. 한편 식물병원균인 Fusariume A昭厂 에 대해 길항작용을 하는 것으로 확인되었다.
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