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제안 방법
- β-Galactosidase의 활성은 ONPG(O-nitrophenyl-β-D-Agalactopyranoside)을 가수분해하여 생성된 o-nitrophenol의 흡광도(420nm)를 측정하여 효소활력을 결정하였다.
- 각 분획의 시료를 반응액(0.1M MgCl2. 4.5M p-mercaptoethanol, 4mg/mlONPG 0.1M Sodium phosphate pH 7.5)에 혼합하여 300에서 30분간 반응시킨 후 IM NazCCh용액을넣어 반응을 중단시킨 후 420nm의 흡광도를 측정하였다.
- Pantoea spp. 균주의 세포 주줄물로부터 DEAE-Sephac인 chromatographye} affinity 산iromatography를 이용하여 β-Galactosidase를 분리하였다(Fig. 1).
- Pantoea spp.로 부터 분리하였고 효소의 생화학적 특성과 우유에서의 유당 분해능력을 조사하였다.
- 분리된 쳥색 집락을 Tryptic soy agar에서 37℃에서 하룻밤 배양하여 API 20E kit (bioMerieux sa)를 사용하여 동정하였다.
- 세균 추출물을 10% SDS-polyacrylamide gel에서 50V로 전기영동을 하였으며 Comassie Blue R-250으로 염색하였다,
- 세균 추출액에서 β-Galactosidase를 분리하기 위해 DEAE-Sephac이(SIGMA)을 이용하여 이온교환 산]mmaEography 를 실시하였으며 다음으로 p-aminobenzyl-l~thio-p-galac- topyranosidee} 결합되어 있는 agarose# 이용하여 affinity chromatography# 실시하였다.
대상 데이터
- 강원도 발왕산 정상에서 부식토양을 채취하여 4℃로 온도를 유지시켜 실험실로 운반하였다.
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