[논문]항종양활성이 있는 차나무 종자 추출물의 부분 분리 및 정제

남정옥; 남보라; 김진주; 조향숙; 김진만; 김창한

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남정옥 (건국대학교 축산대학 축산식품생물공학) , 남보라 (건국대학교 축산대학 축산식품생물공학) , 김진주 (건국대학교 축산대학 축산식품생물공학) , 조향숙 (건국대학교 축산대학 축산식품생물공학) , 김진만 (건국대학교 축산대학 축산식품생물공학) , 김창한 (건국대학교 축산대학 축산식품생물공학)

본 연구는 폐기되는 차나무 종자를 이용하여 항종양효과를 비교하고 차나무 잎뿐만 아니라 항종양 효과를 나타내는 차나무 종자의 이용가능성에 대해 탐색하고자 기획하였다. 항종양활성을 검토하기 위하여 2종류의 인체 암세포주(위암 및 폐암)에 대하여 조사하였다. 항종양효과는 종자 물추출물에서는 큰 효과를 나타내었다. 종자 물 추출물에서 분리한 상징액의 항암효과를 측정한 결과, 100 ${\mu}$g/mL 농도에서 위암 세포인 AGS 세포주에 대해 72.8%, 폐암 세포인 A549 세포주에 대해 71.4%의 항종양 효과를 얻을 수 있었고 침전물에서는 종양세포증식억제효과가 나타나지 않았다.

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문제 정의

1992). 따라서 본 연구는 차나무 종자를 물로 추출하여 활성물질을 부분 분리하여 MTT assay를 통해 차나무 종자의 항종양 효과를 확인하고자 기획하였다.

제안 방법

5 mg/mL) 50μL씩 각각 첨가한 후 37℃에서 4시간 추가 배양하여 formazan 형성을 유도시켰고, 이것을 용해시키기 위하여 dimethyl sul- foxide(DMSO)를 각 well당 100μL씩 첨가한 후 plate shaker에서 20분간 교반하였다. Multi well scanning spectrophotometer (microplate autoreader, Bio-Tek instrument, U.S.A) 로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항종양효과는 세포성장 저해율로 평가하였다.
A) 로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항종양효과는 세포성장 저해율로 평가하였다. 저해율이 50% 이상일 때를 항종양활성이 있는 것으로 판정하였다.
Fig. 1의 순서에 따라 건조분쇄한 종자 20g에 10배의 증류수(distilled water, DW)를 가하여 실온에서 6시간씩 3회 추출하고 Whatman No. 2 여과지를 사용하여 여과하였다. 모두 합한 추출액을 원심분리한 후 상등액만을 취해 동량의 Ethylether를 넣고 추출물속에 남아있는 지방을 제거하여 추출물을 물층과 에테르층으로 분리하였다.

대상 데이터

sinensis L.) 열매를 제공 받아 사용하였다. 열매는 종자를 분리하여 동결건조시킨 후 시료로 사용하였다, 본 연구에 사용된 종양세포주는 AGS(human stomach carcinoma), A549(human lung carcinoma)이며, Gibco사(Life Technologies, INC.
) 열매를 제공 받아 사용하였다. 열매는 종자를 분리하여 동결건조시킨 후 시료로 사용하였다, 본 연구에 사용된 종양세포주는 AGS(human stomach carcinoma), A549(human lung carcinoma)이며, Gibco사(Life Technologies, INC., Rockville, Maryland, USA)의 배지를 이용하여 배양하였고 RPMI 1640에 10% fetal bovine serum(FBS, heat mactwmed)을 함유한 배지를 사용하여 37℃에서 5% CC)2 배양기에서 배양하였다.

이론/모형

차나무 종자 추출물에 대한 항종양효과를 알아보기 위하여 MTT(3-(4, 5- dimethyl- thiazol-2-yl)-2, 5-dmhenyltetrazolium bromide) assay를 이용하였다. 즉, 각각의 종양 세포주 2×10⁵ cells/mL를 100 μL씩 96 well plate에 접종하여 37℃, CO₂ incubator에서 24 시간 동안 배양한 후, 적절한 농도의 시료를 100nL 분주하여 48시간 동안 배양시켰다.

성능/효과

종자 물추출물(0.5 mg/mL)에 대한 종양세포 증식저해 정도를 보면 종양세포주 마다 약간의 차이는 있으나 약 98% 정도의 종양세포 증식억제율이 나타나 물주줄 시에도 그 활성이 상당히 유지되었다.

후속연구

이상에서와 같이 차나무 종자 물 추출물의 항종양 효과를 확인하였고 상징액에서는 100 Lig/mL 농도에서 비교적 높은 항종양효과를 얻을 수 있었다, 따라서 차나무 종자의 물 추줄물에 대한 물질의 추가적인 정제 및 동정과 함께 항종양 효과에 대한 활성기작에 관한 규명이 필요하리라고 사료된다,

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