선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 녹차에 함유된 폴리페놀 이외의 물리적 안정도가 높은 당단백질과 펩타이드를 분리하고, 분석하여 녹차로부터 유래하는 신규 물질 특성을 밝히고자 한다.
가설 설정
- 식물에서의 펩타이드는 신호전달 물질로 작용하며, 특히 식물의 성장과 분화, 외부의 자극에 의한 반응에 관여함이 연구되었다.(9) 이런 연구 결과들을 바탕으로 녹차에도 녹차 생장과 분화, 외부의 반응에 역할을 하는 독특한 펩타이드가 존재할 것으로 가정하고, 본 연구를 시작하였다. 그리고 지속가능에 대한 이슈가 전세계적으로 퍼지면서 식물유래 피부효능 소재 발굴을 위해 다양한 연구 시도가 되고 있는 트렌드를 살펴볼 때, 안정성이 확보된 피부효능이 있는 당단백질 및 펩타이드를 찾는다면 글로벌 산업 경쟁요소로 작용 할 수 있을 것으로 판단된다.
제안 방법
- LC column에서 정제된 시료에 대한 아미노산 서열을 결정하기 위하여 dry 된 시료를 20%(v/v) acetonitrile/water 용매 20ul 로 녹인 후, biobrene 이 coating 되어져 있는 micro-filter 에 시료를 분주 및 건조를 하였고 edman degradation에 의한 N말단아미노산 서열결정방법을 기반으로 분석되어지는 automatic amino acid sequencer ABI492 system(Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 pulsed-liquid 방법으로 N말단으로부터 순차적으로 아미노산을 결정하였다. (Ref-1,2) 이때, 분석 장비에 대한 validation 은 beta-lactoglobulin 표준 단백질 10 pmol을 시료 분석과 동일과정으로 분석 하였을 때, PTH(Phenylthiodation)-amino acid 의 반복적인 수율은 93% 이상을 유지하고, 최초 유리된 PTH-amino acid 의 수율은 50% 이상을 유지하는 조건 하에서 분석을 실시하였다.
- 2.2에서 추출한 분말을 이용하여 분자 특성을 분석하기 위하여 GPC 분석을 실시하였다. 시료는 물에 완전용해시킨 후, 0.
- 2.6방법에 의하여 GPC 분석을 실시하였다. 총 두 번에 걸쳐 분석을 하였다.
- LC column에서 정제된 시료에 대한 아미노산 서열을 결정하기 위하여 dry 된 시료를 20%(v/v) acetonitrile/water 용매 20ul 로 녹인 후, biobrene 이 coating 되어져 있는 micro-filter 에 시료를 분주 및 건조를 하였고 edman degradation에 의한 N말단아미노산 서열결정방법을 기반으로 분석되어지는 automatic amino acid sequencer ABI492 system(Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 pulsed-liquid 방법으로 N말단으로부터 순차적으로 아미노산을 결정하였다. (Ref-1,2) 이때, 분석 장비에 대한 validation 은 beta-lactoglobulin 표준 단백질 10 pmol을 시료 분석과 동일과정으로 분석 하였을 때, PTH(Phenylthiodation)-amino acid 의 반복적인 수율은 93% 이상을 유지하고, 최초 유리된 PTH-amino acid 의 수율은 50% 이상을 유지하는 조건 하에서 분석을 실시하였다.
- Powder 20mg을 D.W. 1mL에 완전히 녹인 후, 20uL를 HPLC C18 Column loading해서 retention time 16.148 min에서 분리된 Fraction을 펩타이드 서열 분석을 하였다.
- 건조된 녹차 100g 측정하여 정제수(80-90℃ 열수 )를 5배 가하여 추출하였다. 온도를 유지하며 2시간가열교반하고 상온으로 온도를 식힌 후에, 수용성 성분만 분리하고, Adventech No.
- 공시험액, 아미노산 표준혼합액 및 2.3에서 분해물이 함유된 검액을 20 μL씩 준비하여, HPLC 바이알에 넣고 AccQ-Tag amino acids derivatization kit의 유도체화 시액 중 borate buffer 70 μL, Flour reagent 2A 20 μL를넣어 잘 흔들어 섞어 1분간 실온에 방치 후 55 ℃에서 10분간 반응시켜 형광 유도체화하여 검액으로 하였으며 검액과 표준액은 3회 반복 측정하였다.
- 단백질 분해는 Bromelain을 이용하여, pH6-7, 온도 50℃에서 overnight하여 단백질 분해하고, 85℃ 30분 가온하여 효소 실활시킨 후 상온으로 냉각한다. 그 후 규조토 여과 후 동결건조하여 단백질분해물을 제조하였다.
- 녹차 당단백질과 펩타이드 추출물을 2.3 조건으로 분해 후, 전체 아미노산 구성비를 조사하였다. 전체 아미노산 농도는 35987.
- 녹차에 함유된 수용성 성분 중 폴리페놀과 클로로필을 제외한 당단백질과 펩타이드의 밝은 노란빛의 추출물을 최종적으로 제조하였다. 최종 수득율은 3%로 확인할 수 있었다.
- 본 연구는 녹차 추출물로부터 에탄올 침전을 통한 펩타이드들 성분 중에서 에드만서열 결정법을 통한 아미노산 서열 분석을 통하여 친수성 hexapeptide인 TNTLSN을 확인하였다. 이러한 hexapeptide의 다양한 피부생리활성적인 연구는 더욱 필요할 것으로 사료되며, 녹차유래 펩타이드 소재는 화학적 합성으로도 가능하기 때문에 산업적 효용성이 클 것으로 판단된다.
- 6방법에 의하여 GPC 분석을 실시하였다. 총 두 번에 걸쳐 분석을 하였다. 수평균 분자량은 평균 886, 중량평균분자량은 25218, 최대피크분자량은 890으로 분석이 되었으며, 다분산 지수인 Mw/Mn은 28.
- 측정기기는 Waters GPC System,, 펌프 Waters 515, 검출기 Waters 410 Differentia Refractometer를 사용하였으며, 용매는 0.1 M NaNO3, 컬럼 및 분석조건은 TSKgel G4000PWxl + TSKgel G2500PWxl (7.8 x 300 mm), 온도는 35℃, 유속 1.0 mL/min, 주입량 100 μL, 데이터처리 EMPOWER, 표준물질은 PEG/PEO를 사용하여 분석하였다.
대상 데이터
- 분석 컬럼은 ACQUITY UPLC AccQ-Tag Ultra C18컬럼(2.1 * 100 mm, 1.7 μm)을 사용하였으며 이동상은 AccQ-Tag Ultra Eluent A, B를 이용하여 농도구배조건으로 분석하였으며 분리조건은 Table 1에 나타내었다.
- 실험에 사용한 녹차는 ㈜장원의 서광다원에서 채취한 2010년 7월에 생산된 녹차로 옥록제법(증열-조유-유념-중유-재건-건조)으로 제조되었으며, 최종 건조된 녹차는 수분함량이 3% 미만으로 유지하였다.
- 열풍건조시 30-40℃를 유지시켜주어, 열변성을 방지한다. 열풍 건조후 최종 수율은 녹차 중량 대비 3%이며, 분말로 균질화하여 이를 실험에 사용하였다.
성능/효과
- 차나무는 Camellia 속으로 분류되는 82종 중 하나로 현재 아시아를 중심으로 아프리카, 남아메리카, 오세아니아 등의 50여개 국가에서 재배되고 있다.(1) 차의 종류는 차나무 잎의 가공방법에 의하여 크게 비발효차, 반발효차, 발녹차, 후발효차로 구분되며, 이중 비발효차는 차나무에 함유된 Polyphenol Oxydase를 열처리에 의하여 불활성화물 시킨 것으로, 다른 차에 비하여 flavonol, flavanone, flavonoid 등의 Polyphenol 류를 많이 함유하고 있어 강한 항산화력을 나타내며, 이러한 물질들은 차 건조중량의 약 30%를 차지한다.(2)
- 차의 건강에 대한 이로움은 오랜 역사를 통해서 증명이 되어왔으며, 최근의 연구에 의하면 차에 함유된 폴리페놀에 의하여 피부의 자외선 보호효과와 피부암 억제 효과가 있음이 밝혀졌고.(7) 녹차 추출물이 피부의 섬유아세포를 활성산소로부터 보호함이 증명되었다.(8) 이렇듯 녹차의 피부효능에 대한 연구가 최근에 밝혀지기 시작하며, 녹차를 이용한 화장품 및 의학용으로 산업화하는 시도들이 생기고 있다.
- 총 두 번에 걸쳐 분석을 하였다. 수평균 분자량은 평균 886, 중량평균분자량은 25218, 최대피크분자량은 890으로 분석이 되었으며, 다분산 지수인 Mw/Mn은 28.46으로 일반적인 중합 폴리머가 2정도인 것에 비하여, 매우 높은 것을 알 수 있다. 이를통해 다양한 구조의 당단백질 및 펩타이드가 혼합되어 있음을 추축해 볼 수 있다.
- 3 조건으로 분해 후, 전체 아미노산 구성비를 조사하였다. 전체 아미노산 농도는 35987.4ug/g으로 분석되었고, 가장 많은 아미노산은 Glutamic acid로 14073.9ug/g, 39.11%로 분석되었고, 녹차에만 존재하는 Theanine 은 7533.9ug/g으로 두 번째로 많은 20.93%를 차지하였다. 신경전달 물질로 알려진 GABA는 1176.
- 녹차에 함유된 수용성 성분 중 폴리페놀과 클로로필을 제외한 당단백질과 펩타이드의 밝은 노란빛의 추출물을 최종적으로 제조하였다. 최종 수득율은 3%로 확인할 수 있었다.
후속연구
- (9) 이런 연구 결과들을 바탕으로 녹차에도 녹차 생장과 분화, 외부의 반응에 역할을 하는 독특한 펩타이드가 존재할 것으로 가정하고, 본 연구를 시작하였다. 그리고 지속가능에 대한 이슈가 전세계적으로 퍼지면서 식물유래 피부효능 소재 발굴을 위해 다양한 연구 시도가 되고 있는 트렌드를 살펴볼 때, 안정성이 확보된 피부효능이 있는 당단백질 및 펩타이드를 찾는다면 글로벌 산업 경쟁요소로 작용 할 수 있을 것으로 판단된다.
- 본 연구는 녹차 추출물로부터 에탄올 침전을 통한 펩타이드들 성분 중에서 에드만서열 결정법을 통한 아미노산 서열 분석을 통하여 친수성 hexapeptide인 TNTLSN을 확인하였다. 이러한 hexapeptide의 다양한 피부생리활성적인 연구는 더욱 필요할 것으로 사료되며, 녹차유래 펩타이드 소재는 화학적 합성으로도 가능하기 때문에 산업적 효용성이 클 것으로 판단된다.
- 2)에 포함된 펩타이드로 판단된다. 이러한 펩타이드는 친수성이며, 안정도가 높은 특징을 가지고 있고, 분자량이 1000이하로 피부 흡수도가 높을것으로 기대되며, Biodegradable 하며, Renewable 한 자연 친화적인 화장품 소재로서 널리 활용될 수 있을 것으로 판단된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.