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제안 방법
- 핵산 추출은 핵산 추출 키트(DNeasy Blood & Tissue Kit, Qiagen, cat. #69506)를 이용하여 추출하였다.
- 1세대 PCR 방식은 유전자 증폭 후 아가로스 젤을 이용한 전기영동을 통해 결과를 확인하였으며, 형광물질을 이용하여 검출목표 유전자의 증폭을 실시간 확인 할 수 있는 real-time PCR 방식인 2세대 PCR 방법으로 발전하였다. 반면 3세대 PCR 방식인 digital PCR 방법(이하 dPCR)은 표준물질 없이도 검출목표 유전자의 실시간 절대정량이 가능한 새로운 접근 방식의 PCR 방식이다[1-3].
- #69506)를 이용하여 추출하였다. 실험 방법은 제조사의 매뉴얼을 따랐다.
- 시약사의 권고 안에 맞춰 반응조건을 확립하였다.
- 농도를 알고 있는 동물 DNA에 농도를 알고 있는 사람 DNA에 넣은 다음 (spiking), dPCR 기법으로 증폭하여, 사람 DNA의 증폭 여부에 따라 positive (1, 파랑색)와 negative (0, 노란색)로 digital signal처럼 받아들이는 형태로 계수하였다. 이때 동일한 농도의 동물 DNA 내 사람 DNA 농도를 10배씩 희석하여 사람 DNA 농도에 따른 DNA 증폭 정도를 확인할 수 있었다.
- 증폭된 DNA의 수를 정량하고자 히스토그램(histogram)의 형태로 확인하기 위해, 비증폭 또는 증폭된 DNA의 형광 값을 x축으로 두고 중복된 DNA well의 개수를 y축으로 두고 계측하였다.
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