초록 ▼

본 발명은 유전자조작을 이용하여 사람의 프로인슐린 융합단백질을 생산하는 데 있어서 프로인슐린 융합단백질의 안정성과 발현율을 증가시키는 방법에 관한 것이다.먼저 사람 프로인슐린 유전자를 cDNA 클로닝 방법으로 대장균 속주의 클로닝하였다. 클로닝된 사람 프로인슐린 유전자를 Lac 리보솜 결합부위 유전자, (Thr)6 코딩하는 유전자와 함께 pUC8에 도입 [pUC8-(Thr)6-PI]하였고, pUC8-(Thr)6-PI와 pEX2로 터 pYK10-9 발현벡터를 제조하였다.프로인슐린 전서열이 짧은 pYK10-9 벡터가 도입된 대장균에서도

본 발명은 유전자조작을 이용하여 사람의 프로인슐린 융합단백질을 생산하는 데 있어서 프로인슐린 융합단백질의 안정성과 발현율을 증가시키는 방법에 관한 것이다.먼저 사람 프로인슐린 유전자를 cDNA 클로닝 방법으로 대장균 속주의 클로닝하였다. 클로닝된 사람 프로인슐린 유전자를 Lac 리보솜 결합부위 유전자, (Thr)6 코딩하는 유전자와 함께 pUC8에 도입 [pUC8-(Thr)6-PI]하였고, pUC8-(Thr)6-PI와 pEX2로 터 pYK10-9 발현벡터를 제조하였다.프로인슐린 전서열이 짧은 pYK10-9 벡터가 도입된 대장균에서도 발현되 융합 단백질은 대장균 세포내에서 안정하였다. pYK10-9 발현벡터가 형질전환된 대장균 pop2136은 플라스크 발효에서 249mg/1의 사람 프로인슐린 융합단백질을 생성하였고, 이 균을 유가배양한 결과 생성된 프로인슐린의 양은 2.2g/l로 현저히 증하하였다.

대표청구항

사람 프로인슐린 융합 단백질 유전자를 대장균에서 발현시켜 사람 프로인슐린 융합단백질을 대량 생산함에 있어서, 사람 프로인슐린 융합단백질의 유전자를 Lac 리보솜 결합부위 유전자, (Thr)6를 코딩하는 유저자와 함께 파지람다 PR프로모우터를 함유한 대장균 발현 벡터에 삽입하여 제조한 발현벡터 pYK10-9로 대장균을 형질전화시킨 후, 형질전환된 대장균을 배양하여 사람 프로인슐린 융합 단백질을 생산함을 특징으로 하는 사람 프로인슐린 융합단백질의 제조방법.

사람 프로인슐린 융합 단백질 유전자를 대장균에서 발현시켜 사람 프로인슐린 융합단백질을 대량 생산함에 있어서, 사람 프로인슐린 융합단백질의 유전자를 Lac 리보솜 결합부위 유전자, (Thr)6를 코딩하는 유저자와 함께 파지람다 PR프로모우터를 함유한 대장균 발현 벡터에 삽입하여 제조한 발현벡터 pYK10-9로 대장균을 형질전화시킨 후, 형질전환된 대장균을 배양하여 사람 프로인슐린 융합 단백질을 생산함을 특징으로 하는 사람 프로인슐린 융합단백질의 제조방법.