초록

유전공학기술에 의한 인체인슈린을 대장균에서 다량 생산할 수 있는 체계를 확립하였다. 산업체에서 인슈린 생산이 적합한 생산균주를 개발하였고, 그에 따라 생산과정의 단순화를 위한 신기술을 개발완료하였다. 이 공정단순화는 유전자재조합기술과 연계된 금속친화침전 방법으로 복잡한 정제과정을 단순화하였다. 이와 연계하여 공정의 단순화와 산업체 생산비적 정원을 맞추기 위해 정제시간 단축, 관련 Unit Operation수의 최소화, 관여 화합물 최소화를 통해 이룩했다. 또한 프로인슈린과 인슈린의 생화학 및 생물학적 분석체계를 수립하였다.

Abstract ▼

In continuing study on human insulin, this report, firstly, covers optimization of proinsulin gene expression by modifying the regulatory gene and replication origin gene in the expression vectors.
Secondly, modification of N-terminal portion of insulin-fused protein to remove internal methionine

In continuing study on human insulin, this report, firstly, covers optimization of proinsulin gene expression by modifying the regulatory gene and replication origin gene in the expression vectors.
Secondly, modification of N-terminal portion of insulin-fused protein to remove internal methionine residue and to reduce the size of the fused proteins. The size of N-terminal B-galactosidase genes where the insulin genes were fused were further reduced down by removing the restriction fragment. Also methionine residue inside the fused N-terminal region was replaced by leucine residue to facilitate cyanogen bromide cleavage reaction through site-specific mutagenesis.
Thirdly, for the development of new insulins, new insulin gene were designed and synthesized. Moreover in order to facilitate to purify the proinsulin, the metal-affinity tag was introduced to the junction part of fused-protein.

목차 Contents

• 제1장 서론...11
• 제2장 실험재료 및 방법...14
• 제1절 시험 재료 및 기기...14
• 1. 균주...14
• 2. 배지 및 완충 용액...14
• 3. 효소 및 생화합물...15
• 4. 기기...16
• 제2절 실험 방법...16
• 제3장 조절 유전자의 구축...20
• 제1절 '신규 인슈린 제조와 탄수화물 대사 영향에 관한 연구 (I)' 보고서의 요약...20
• 제2절 '신규 인슈린 제조와 탄수화물 대사 영향에 관한 연구 (II)' 보고서의 요약...21
• 제4장 균주의 배양과 발현...26
• 제1절 배양 조건...26
• 제2절 발현 정도의 확인...27
• 제5장 세포의 파쇄, 융합 단백질의 용해 및 정제...27
• 제1절 세포의 파쇄...27
• 제2절 융합단백질의 용해...28
• 제6장 물성 변화에 따른 정제...28
• 제7장 시안화 브롬의 처리와 프로인슈린의 정제...29
• 제1절 반응의 조건과 결과...30
• 제2절 프로인슈린의 정제...30
• 제8장 Oxidative Sulfonation...32
• 제9장 Proinsulin의 재조립...32
• 제1절 실험 방법...32
• 제2절 확인 방법...32
• 제10장 proinsulin의 효소에 의한 절단...33
• 제11장 인슈린의 확인...33
• 제12장 요약 및 계획...34
• 제13장 연구 개발의 결과 및 활용 가능성...38
• 제14장 참고 문헌...39