초록

본 발명은 극성 메타크릴레이트계 수지와 활성형 프로인슐린과의 흡착 및 탈착을 이용하여 재조합 대장균으로 부터 발현되는 비 활성형 프로인슐린을 활성형 프로인슐린으로 전환하는 단백질 재접힘 반응 후, 반응 혼합물로 부터 활성형 프로 인슐린을 분리·정제하는 방법에 관한 것이다. 활성형 프로인슐린의 정제에 본 발명의 방법을 이용하면 경제적으로 신속·용이하게 활성형 프로인슐린을 제조할 수 있다.

대표청구항 ▼

재조합 인슐린 제조시 1) 활성형 프로 인슐린을 제조하는 단계인 프로인슐린 재접힘 반응의 활성형 프로인슐린을 함유하는 불순 혼합물을 pH 약 3내지 약 11에서 공업용 흡착 수지에 적용하는 흡착단계, 2) 이수지로 부터 pH 약 3 내지 4의 수성 용출제를 사용하여 활성형 프로 인슐린을 용출시키는 탈착단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 프로 인슐린 재접힘 반응 혼합물로 부터 활성형 프로인슐린을 분리·정제하는 방법.제1항에 있어서, 1) 흡착단계후 2) 탈착단계 전에 pH 3 내지 4의 세척제를 이용하여 세척단계를 더 포함하는 것을

재조합 인슐린 제조시 1) 활성형 프로 인슐린을 제조하는 단계인 프로인슐린 재접힘 반응의 활성형 프로인슐린을 함유하는 불순 혼합물을 pH 약 3내지 약 11에서 공업용 흡착 수지에 적용하는 흡착단계, 2) 이수지로 부터 pH 약 3 내지 4의 수성 용출제를 사용하여 활성형 프로 인슐린을 용출시키는 탈착단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 프로 인슐린 재접힘 반응 혼합물로 부터 활성형 프로인슐린을 분리·정제하는 방법.제1항에 있어서, 1) 흡착단계후 2) 탈착단계 전에 pH 3 내지 4의 세척제를 이용하여 세척단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 프로 인슐린 재접힘 반응 혼합물로 부터 활성형 프로인슐린을 분리·정제하는 방법.제1항에 있어서, 공업용 흡착수지는 극성 메타크릴레이트계 수지인 것을 특징으로 하는 방법.제3항에 있어서, 극성 메타크릴레이트계 수지는 HP-2MG인 것을 특징으로 하는 방법.제1항에 있어서, 탈착단계의 수성용출제는 25% 이상의 아세톤을 함유하는 아세트산인 것을 특징으로 하는 프로 인슐린 재접힘 반응 혼합물로 부터 활성형 프로인슐린을 분리·정제하는 방법.제 2항에 있어서, 세척제는 아세트산 완충용액인 것을 특징으로 하는 프로 인슐린 재접힘 반응 혼합물로부터 활성형 프로 인슐린을 분리·정제하는 방법.제 1항에 있어서, 활성형 프로인슐린은 인간 프로인슐린의 아미노산 서열에 상응하는 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 프로 인슐린 재접힘 반응 혼합물로 부터 활성형 프로인슐린을 분리·정제하는 방법.