초록 ▼

본 발명은 전기천공법(electroporation)을 이용한 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes, P. acnes)의 형질전환 조건의 최적화에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명은 전기천공법의 조건인 플라스미드(plasmid) DNA의 숙주 균주의 종류, 반응능세포(competent cell)의 배양 온도, 전기충격 완충용액(electroporation buffer, EPB)의 조성, 전기장의 세기 및 충격 시간을 설정하여 프로피오니박테리움 아크네스를 대상으로 형질전환시 고효율로 형질전환을 수행

본 발명은 전기천공법(electroporation)을 이용한 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes, P. acnes)의 형질전환 조건의 최적화에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명은 전기천공법의 조건인 플라스미드(plasmid) DNA의 숙주 균주의 종류, 반응능세포(competent cell)의 배양 온도, 전기충격 완충용액(electroporation buffer, EPB)의 조성, 전기장의 세기 및 충격 시간을 설정하여 프로피오니박테리움 아크네스를 대상으로 형질전환시 고효율로 형질전환을 수행할 수 있는 방법에 관한 것이다.프로피오니박테리움 아크네스의 고효율 형질전환 방법은 특정 유전자의 녹-아웃(knock-out)을 비롯한 유전자 조작에 유용하게 이용될 수 있다.

대표청구항 ▼

1) dam- 유전자형을 포함하는 대장균 균주로부터 프로피오니박테리움으로부터 유도되는 복제원점을 가지고, 외래 유전자 및 선별을 위한 내성 유전자를 포함하는 플라스미드(plasmid)를 분리하는 단계;2) 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)를 20 ~ 30℃의 배양 온도에서 배양하여 반응능세포(competant cell)로 제조하는 단계; 및3) 상기 단계 1)의 플라스미드를 단계 2)의 반응능 세포에 전기천공법(electroporation)을 이용하여 도입하되, 여기서, 상기 전기천공법은 전기천

1) dam- 유전자형을 포함하는 대장균 균주로부터 프로피오니박테리움으로부터 유도되는 복제원점을 가지고, 외래 유전자 및 선별을 위한 내성 유전자를 포함하는 플라스미드(plasmid)를 분리하는 단계;2) 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)를 20 ~ 30℃의 배양 온도에서 배양하여 반응능세포(competant cell)로 제조하는 단계; 및3) 상기 단계 1)의 플라스미드를 단계 2)의 반응능 세포에 전기천공법(electroporation)을 이용하여 도입하되, 여기서, 상기 전기천공법은 전기천공 완충용액이 슈크로즈(sucrose), 인산나트륨(sodium phosphate) 및 염화마그네슘(magnesium chloride)으로 구성되고, 충격 시간이 3.0 내지 3.6 ms이며, 전기장의 세기가 6.0 kV/cm 내지 9.5 kV/cm 또는 14.0 kV/cm 내지 16.0 kV/cm인 것을 특징으로 하는 단계;를 포함하는 프로피오니박테리움 아크네스의 형질전환 방법.