초록

본 발명은 신규 7β-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제 돌연변이체, 이러한 효소 돌연변이체를 인코딩하는 서열, 이러한 효소 돌연변이체의 제조 방법, 및 콜산(cholic acid) 화합물의 효소적 전환, 상세하게는 우르소데옥시콜산(ursodeoxycholic acid; UDCA)의 제조에서의 이러한 효소 돌연변이체의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 효소 돌연변이체를 사용한 UDCA의 신규 합성 방법; 및 다중 변형된 재조합 미생물을 사용한 UDCA의 신규 제조 방법에 관한 것이다.

대표청구항 ▼

상응하는 7-하이드록시스테로이드로의 7-케토스테로이드의 입체특이적 효소적 환원을 적어도 촉매화하는 7β-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7β-HSDH), 7β-HSDH로서,상기 효소는 서열번호 2의 위치 17, 또는 이로부터 유래되며 서열번호 2와 적어도 80%의 서열 동일성을 가진 아미노산 서열의 상응하는 서열 위치에 돌연변이를 포함하며;위치 17에서의 돌연변이가 T17X2이며,X2는 F, A, I 또는 S를 나타내고,상기 효소가, 서열번호 2를 포함하는 7β-HSDH와 비교하여, 하기 특성 프로파일을 보여주는, 7β-HSDH

상응하는 7-하이드록시스테로이드로의 7-케토스테로이드의 입체특이적 효소적 환원을 적어도 촉매화하는 7β-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7β-HSDH), 7β-HSDH로서,상기 효소는 서열번호 2의 위치 17, 또는 이로부터 유래되며 서열번호 2와 적어도 80%의 서열 동일성을 가진 아미노산 서열의 상응하는 서열 위치에 돌연변이를 포함하며;위치 17에서의 돌연변이가 T17X2이며,X2는 F, A, I 또는 S를 나타내고,상기 효소가, 서열번호 2를 포함하는 7β-HSDH와 비교하여, 하기 특성 프로파일을 보여주는, 7β-HSDH:a) 보조인자인 NAD(P)H를 이용한 DHCA의 효소적 환원에서 데하이드로콜산(DHCA)에 대한 증가된 비활성(specific activity)(Vmax[U/mg]);b) 보조인자인 NAD(P)H를 이용한 DHCA의 효소적 환원에서, NAD(P)H에 대한 증가된 비활성(Vmax[U/mg]);c) DHCA에 의한 감소된 기질 저해;d) NADH 및 NADPH에 대한 변형된 보조인자 특이성;e) 이들 특성 a) 내지 d)는 개별적으로 또는 하나 이상의 조합으로 존재할 수 있는, 7β-HSDH.