초록 ▼

본 발명은 소포체 스트레스 완화제를 이용한 생체 외 배양 간세포 생성방법에 관한 것으로, 서열번호1의 염기서열을 가진 가이드 RNA(Guide RNA)를 마련하는 A단계; 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 Cas9 Nuclease 발현 가능 벡터에 삽입하여 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 포함하도록 클로닝(Cloning)된 CRISPR/Cas9용 벡터(Vector)를 마련하는 B단계; 서열번호2의 염기서열을 가진 ssODNs(Single Stranded Oligodeoxynucleotides)를 마련하는 C단계;

본 발명은 소포체 스트레스 완화제를 이용한 생체 외 배양 간세포 생성방법에 관한 것으로, 서열번호1의 염기서열을 가진 가이드 RNA(Guide RNA)를 마련하는 A단계; 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 Cas9 Nuclease 발현 가능 벡터에 삽입하여 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 포함하도록 클로닝(Cloning)된 CRISPR/Cas9용 벡터(Vector)를 마련하는 B단계; 서열번호2의 염기서열을 가진 ssODNs(Single Stranded Oligodeoxynucleotides)를 마련하는 C단계; 상기 B단계를 통해 마련된 CRISPR/Cas9용 벡터 및 상기 C단계를 통해 마련된 ssODNs를 인간 전분화능 줄기세포에 주입시키는 D단계; 상기 D단계를 통해 상기 CRISPR/Cas9용 벡터 및 ssODNs가 주입된 인간 전분화능 줄기세포를 배양하여 단일 콜로니(Colony) 다수 개를 수득하는 E단계; 및 상기 E단계를 통해 수득된 단일 콜로니 다수 개 각각에 대해 시퀀싱(Sequencing)을 수행하여, 특이적 유전자 변이를 통해 R778L 돌연변이형으로 변형된 윌슨병 원인유전자 ATP7B를 포함함에 따라 윌슨병 발병이 가능하도록 유도된 인간 전분화능 줄기세포를 가진 단일 콜로니를 선별하는 F단계;를 포함한다.

대표청구항 ▼

서열번호1의 염기서열로 이루어진 가이드 RNA(Guide RNA)를 마련하는 A단계;상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 Cas9 Nuclease 발현 가능 벡터에 삽입하여 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 포함하도록 클로닝(Cloning)된 CRISPR/Cas9용 벡터(Vector)를 마련하는 B단계;서열번호2의 염기서열로 이루어진 ssODNs(Single Stranded Oligodeoxynucleotides)를 마련하는 C단계;상기 B단계를 통해 마련된 CRISPR/Cas9용 벡터 및 상기 C단계를 통해 마련된

서열번호1의 염기서열로 이루어진 가이드 RNA(Guide RNA)를 마련하는 A단계;상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 Cas9 Nuclease 발현 가능 벡터에 삽입하여 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 포함하도록 클로닝(Cloning)된 CRISPR/Cas9용 벡터(Vector)를 마련하는 B단계;서열번호2의 염기서열로 이루어진 ssODNs(Single Stranded Oligodeoxynucleotides)를 마련하는 C단계;상기 B단계를 통해 마련된 CRISPR/Cas9용 벡터 및 상기 C단계를 통해 마련된 ssODNs를 인간 전분화능 줄기세포에 주입시키는 D단계;상기 D단계를 통해 상기 CRISPR/Cas9용 벡터 및 ssODNs가 주입된 인간 전분화능 줄기세포를 배양하여 단일 콜로니(Colony) 다수 개를 수득하는 E단계; 및상기 E단계를 통해 수득된 단일 콜로니 다수 개 각각에 대해 시퀀싱(Sequencing)을 수행하여, 특이적 유전자 변이를 통해 R778L 돌연변이형으로 변형된 윌슨병 원인유전자 ATP7B를 포함함에 따라 윌슨병 발병이 가능하도록 유도된 인간 전분화능 줄기세포를 가진 단일 콜로니를 선별하는 F단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는인간 전분화능 줄기세포를 이용한 생체 외 윌슨병 모델 제조방법.