초록 ▼

본 발명은 동물유래 성분을 포함하지 않는 단순화된 공정으로 보툴리눔 독소를 고수율로 수득할 수 있는 보툴리눔 독소의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 보툴리눔 독소의 제조방법은 클로스트리디움 보툴리눔 균주의 배양을 비롯한 전체 공정에서 동물성 성분을 사용하지 않아 안전성이 우수하며, 종래 분리 공정과 비교하여 첨가제 처리를 통한 별도의 핵산제거 과정을 생략하고 또한 이온교환 크로마토그래피만을 이용하여 공정을 수행하며 이때 모두 동일한 버퍼를 사용하여 버퍼의 농도와 pH 조절만으로 단순화된 공정을 통해 현저히 향상된 수율로 보

본 발명은 동물유래 성분을 포함하지 않는 단순화된 공정으로 보툴리눔 독소를 고수율로 수득할 수 있는 보툴리눔 독소의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 보툴리눔 독소의 제조방법은 클로스트리디움 보툴리눔 균주의 배양을 비롯한 전체 공정에서 동물성 성분을 사용하지 않아 안전성이 우수하며, 종래 분리 공정과 비교하여 첨가제 처리를 통한 별도의 핵산제거 과정을 생략하고 또한 이온교환 크로마토그래피만을 이용하여 공정을 수행하며 이때 모두 동일한 버퍼를 사용하여 버퍼의 농도와 pH 조절만으로 단순화된 공정을 통해 현저히 향상된 수율로 보툴리눔 독소를 분리할 수 있음을 확인하였는바, 매우 경제적이고 효율적인 분리방법으로써 이를 통해 분리된 보툴리눔 독소는 미용 및 의약분야에서 유용하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

대표청구항 ▼

하기의 단계를 포함하는, 보툴리눔 독소의 제조방법:(a) 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)을 동물유래 성분이 없는 파이톤 펩톤(Phytone peptone)을 포함하는 배양배지에서 배양하여 보툴리눔 독소를 생성시키는 단계;(b) 상기 보툴리눔 독소가 생성된 배양액을 산 침전시키는 단계;(c) 상기 단계 (b)의 보툴리눔 독소가 포함된 침전물에 완충액을 첨가하여 상등액을 수득한 다음, 황산암모늄을 첨가하여 침전 상등액을 수득한 후 한외여과(ultrafiltraion) 하는 단계;(d) 다이에틸아미노에틸(

하기의 단계를 포함하는, 보툴리눔 독소의 제조방법:(a) 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)을 동물유래 성분이 없는 파이톤 펩톤(Phytone peptone)을 포함하는 배양배지에서 배양하여 보툴리눔 독소를 생성시키는 단계;(b) 상기 보툴리눔 독소가 생성된 배양액을 산 침전시키는 단계;(c) 상기 단계 (b)의 보툴리눔 독소가 포함된 침전물에 완충액을 첨가하여 상등액을 수득한 다음, 황산암모늄을 첨가하여 침전 상등액을 수득한 후 한외여과(ultrafiltraion) 하는 단계;(d) 다이에틸아미노에틸(diethylaminoethyl; DEAE)-세파로오스(Sepharose) 컬럼을 통해 1차 음이온교환 크로마토그래피를 실시하여 보툴리눔 독소 정제물을 수득하는 단계;(e) 단계 (d)의 정제물에 황산암모늄을 첨가하여 침전 상등액을 수득한 후 한외여과(ultrafiltraion) 하는 단계;(f) Q-세파로오스(Sepharose) 컬럼을 통해 2차 음이온교환 크로마토그래피를 실시하여 보툴리눔 독소 정제물을 수득하는 단계; 및(g) HS-컬럼을 통해 양이온교환 크로마토그래피를 실시하여 보툴리눔 독소를 농축하는 단계.