초록 ▼

본 발명은 표적핵산의 존재 하에서 임의의 대리표적이 함께 증폭되도록 유도하는 표적핵산 검출 방법에 관한 것으로, 보다 자세하게는 표적핵산이 존재할 경우, 표적핵산과 임의의 대리표적 간의 융합 증폭산물(fusion amplicon)이 생성되도록 유도하며, 상기 융합 증폭산물을 증폭하여 표적핵산 검출의 고효율 및 고민감도를 구현하는 방법 및 상기 방법 구현을 위한 중합효소연쇄반응(PCR; polymerase chain reaction)용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 표적핵산 검출 방법은 중합효소연쇄반응 산물의 염기서열 일부를

본 발명은 표적핵산의 존재 하에서 임의의 대리표적이 함께 증폭되도록 유도하는 표적핵산 검출 방법에 관한 것으로, 보다 자세하게는 표적핵산이 존재할 경우, 표적핵산과 임의의 대리표적 간의 융합 증폭산물(fusion amplicon)이 생성되도록 유도하며, 상기 융합 증폭산물을 증폭하여 표적핵산 검출의 고효율 및 고민감도를 구현하는 방법 및 상기 방법 구현을 위한 중합효소연쇄반응(PCR; polymerase chain reaction)용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 표적핵산 검출 방법은 중합효소연쇄반응 산물의 염기서열 일부를 임의로 조정할 수 있으며, 결과적으로 표적핵산 염기서열에 대한 의존도가 최소화되어 만약 구아닌/시토신 비중이 지나치게 높아 해당 부위 검출이 어려운 표적핵산이라고 하더라도 이에 대한 검출을 효과적으로 수행할 수 있으며, 상기 대리표적의 표적핵산 상보적 염기서열 부위와 증폭 프라이머 상보적 염기서열 부위 사이에 임의의 염기서열을 삽입할 수 있으므로, 이러한 임의의 염기서열 부위와 혼성화하는 범용(universal) 프로브를 제작함으로써, 표적핵산의 염기서열이 변경되더라도 상기 범용 프로브는 계속 사용이 가능한 장점이 있다. 또한 본 발명에 따른 표적핵산 검출 방법은 상기 대리표적의 주입량을 조절하여 쉽게 표적핵산 검출의 민감도만을 독립적으로 조정할 수 있으며, 진단제품 개발 시 민감도의 최적화 과정에서 검출 효율이 변동되는 것을 최소화할 수 있어 분자진단, 산전진단, 조기진단, 암진단, 유전관련 진단, 유전형질 진단, 감염균의 진단, 약제내성균의 판별, 법의학, 생물체의 종판별 등에 유용하다.

대표청구항 ▼

다음의 단계를 포함하는 표적핵산 증폭방법:(a) 검체 시료로부터 핵산을 분리하는 단계;(b) i) 표적핵산과 혼성화(hybridization)할 수 있는 한 개 이상의 탐색 프라이머(primer);ii) 상기 탐색 프라이머가 결합하지 않는 표적핵산 부위와 결합하는 서열 및 표적핵산에 결합하지 않는 임의의 서열을 포함하는 한 개 이상의 대리표적(surrogate target); 및iii) 상기 대리표적을 증폭할 수 있는 한 개 이상의 증폭 프라이머;를 주입하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행하는 단계; 및(c) 융합 증폭산물의 존재

다음의 단계를 포함하는 표적핵산 증폭방법:(a) 검체 시료로부터 핵산을 분리하는 단계;(b) i) 표적핵산과 혼성화(hybridization)할 수 있는 한 개 이상의 탐색 프라이머(primer);ii) 상기 탐색 프라이머가 결합하지 않는 표적핵산 부위와 결합하는 서열 및 표적핵산에 결합하지 않는 임의의 서열을 포함하는 한 개 이상의 대리표적(surrogate target); 및iii) 상기 대리표적을 증폭할 수 있는 한 개 이상의 증폭 프라이머;를 주입하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행하는 단계; 및(c) 융합 증폭산물의 존재 여부를 판별하는 단계에 있어서,상기 대리표적은 탐색 프라이머가 혼성화하는 표적핵산과 같은 가닥 또는 반대 가닥에 혼성화하는 것을 특징으로 하며,상기 증폭 프라이머는 상기 대리표적이 탐색 프라이머가 혼성화하는 표적핵산과 같은 가닥에 혼성화할 경우에는 상기 대리표적의 임의의 서열에 상보적이고, 상기 대리표적이 탐색 프라이머가 혼성화하는 표적핵산과 반대 가닥에 혼성화할 경우에는 상기 대리표적의 임의의 서열과 같은 것을 특징으로 함.