초록

핵산 에세이에서의 향상된 용융 식별 및 복합화를 위한 프로브핵산의 정량 및 검출을 위한 조성물 및 방법이 제공된다. 특정 구현예에서, 방법은 리포터와 연결된 비-천연 뉴클레오티드를 포함하는 프라이머 또는 프로브의 사용을 포함한다. 표적 핵산은 소광제와 연결된 동족 비-천연 뉴클레오티드를 포함하는 상보적 프로브 또는 프라이머의 중합화에 의해 검출된다.

대표청구항 ▼

하기를 포함하는, 샘플 내 제1 및 제2 표적 핵산 분자 중 하나 또는 둘 모두의 존재를 검출하는 체외(in vitro) 방법:(a) 샘플을 적어도 프라이머의 제1 및 제2 세트와 접촉시키는 단계로, 프라이머의 각 세트는, 5'에서 3'로의, (i) 리포터, (ii) 공지된 융해점을 가지는 헤어핀, (iii) 폴리머라제 연장-차단 개질(modification), (iv) 적어도 하나의 비-천연 뉴클레오티드, 및 (v) 표적 핵산의 제1 가닥 상 제1 영역과 상보적인 표적-특이적 서열;을 포함하는 제1 프라이머 및 표적 핵산의 제2

하기를 포함하는, 샘플 내 제1 및 제2 표적 핵산 분자 중 하나 또는 둘 모두의 존재를 검출하는 체외(in vitro) 방법:(a) 샘플을 적어도 프라이머의 제1 및 제2 세트와 접촉시키는 단계로, 프라이머의 각 세트는, 5'에서 3'로의, (i) 리포터, (ii) 공지된 융해점을 가지는 헤어핀, (iii) 폴리머라제 연장-차단 개질(modification), (iv) 적어도 하나의 비-천연 뉴클레오티드, 및 (v) 표적 핵산의 제1 가닥 상 제1 영역과 상보적인 표적-특이적 서열;을 포함하는 제1 프라이머 및 표적 핵산의 제2 가닥 상 영역과 상보적인 서열을 포함하는 제2 프라이머를 포함하고, 프라이머의 제1 및 제2 세트로부터의 리포터는 동일하고, 프라이머의 제1 및 제2 세트는 구별가능한 융해점을 가지는 헤어핀을 포함하는, 단계; (b) 프라이머의 제1 및 제2 세트와 함께 표적 핵산을 증폭시키는 단계, 상기 증폭시키는 단계는 제1 및 제2 프라이머 세트의 제1 프라이머의 비-천연 뉴클레오티드와 염기-페어화하는 소광제-라벨 된 비-천연 뉴클레오티드의 존재하에서 수행됨 ; (c) 리포터로부터의 신호의 소광을 검출함으로써 표적 핵산 분자의 존재를 검출하는 단계; 및(d) 샘플의 온도를 변화시킴에 의하여 제1 표적 핵산 분자, 제2 표적 핵산 분자 또는 이 둘의 존재에서 결과된 리포터로부터의 신호의 소광 여부를 측정하고 리포터의 비소광(unquenching)에 상응하는 융해점 또는 융해 피크를 측정하여 제1 및 제2 표적 핵산 분자 중 하나 또는 이들 둘의 존재를 검출하는 단계.