초록

본 발명은 올리고뉴클레오타이드 및 표적 핵산의 검출 및/또는 구별에서 이를 사용하는 방법을 제공한다. 올리고뉴클레오타이드 및 방법은 다수의 표적을 동시에 증폭, 검출, 및/또는 구별하는 데에서의 특정 용도를 발견한다.

대표청구항 ▼

샘플에서 제1 표적 및 제2 표적의 존재 또는 부재를 결정하는 방법으로서, 하기 단계들을 포함하는 방법:(a) 반응 혼합물을 제조하는 단계로서, 제1 표적 및/또는 제2 표적 또는 이의 앰플리콘을 포함할 것으로 추정되는 샘플 또는 이의 유도체를제1 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드 및 제2 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드, 여기서 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 각각은 비혼성화된 뉴클레오타이드의 폐쇄된 단일 가닥 루프 부분에 연결된 혼성화된 뉴클레오타이드의 이중 가닥 줄기 부분을 포함하며,제1 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레

샘플에서 제1 표적 및 제2 표적의 존재 또는 부재를 결정하는 방법으로서, 하기 단계들을 포함하는 방법:(a) 반응 혼합물을 제조하는 단계로서, 제1 표적 및/또는 제2 표적 또는 이의 앰플리콘을 포함할 것으로 추정되는 샘플 또는 이의 유도체를제1 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드 및 제2 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드, 여기서 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 각각은 비혼성화된 뉴클레오타이드의 폐쇄된 단일 가닥 루프 부분에 연결된 혼성화된 뉴클레오타이드의 이중 가닥 줄기 부분을 포함하며,제1 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드 및 제2 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 줄기 부분에서의 혼성화된 뉴클레오타이드의 수 및/또는 혼성화된 뉴클레오타이드의 서열은 상이함, 및오직 표적 또는 이의 앰플리콘과 접촉할 때만 제1 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드 및 제2 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 단일 가닥 루프 부분을 절단하거나 분해할 수 있는 효소와 접촉시켜 반응 혼합물을 제조하는 단계;(b) 반응 혼합물을 처리하는 단계로서,- 제1 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드 및 제2 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드를 제조하기 위해, 효소가 제1 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드 및 제2 폐쇄 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 루프 부분의 절단 또는 분해를 유도하기에 적합한 조건 하에;- 제1 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 줄기 부분의 형광단과 켄쳐 분자의 공간 분리를 수월하게 하고 제1 검출 가능한 형광 신호를 제공하기 위해 제1 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 이중 가닥 줄기 부분의 가닥이 해리하는 제1 온도 이상에서, 그리고- 제2 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 줄기 부분의 형광단과 켄쳐 분자의 공간 분리를 수월하게 하고 제2 검출 가능한 형광 신호를 제공하기 위해 제2 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 이중 가닥 줄기 부분의 가닥이 해리하는 제2 온도 이상에서, 반응 혼합물을 처리하는 단계;여기서,제1 온도는 제2 온도보다 낮고,제1 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 형광단 및 제2 개방 줄기-루프 올리고뉴클레오타이드의 형광단은 가시 스펙트럼의 동일한 색상 영역에서 발광함(emit); 및(c) 제2 온도 이상인 온도를 포함하거나 이것으로 이루어진 하나 이상의 온도에서 상기 제1 형광 신호 및 제2 형광 신호의 수준을 검출하므로써 샘플에서 상기 표적의 존재 또는 부재를 결정하는 단계.