초록 ▼

▷ 알로에(Aloe vera) 추출물이 항 염증효과와 상처치유효과를 가지는데 착안하여 다양한 알레르기성 질환 치료제를 개발하기 위하여 알로에로부터 연구를 시행하여 아래와 같은 결과를 얻었다. - 항 알레르기 효과를 가지는 알로에 당단백 단일물질(NY945-1)을 분리정제 - NY945-1의 N-말단 아미노산 서열(LEVPYLRTGEVLGPN)결정. 이는 새로운 물질로 확인 - NY945-1은 비만세

▷ 알로에(Aloe vera) 추출물이 항 염증효과와 상처치유효과를 가지는데 착안하여 다양한 알레르기성 질환 치료제를 개발하기 위하여 알로에로부터 연구를 시행하여 아래와 같은 결과를 얻었다. - 항 알레르기 효과를 가지는 알로에 당단백 단일물질(NY945-1)을 분리정제 - NY945-1의 N-말단 아미노산 서열(LEVPYLRTGEVLGPN)결정. 이는 새로운 물질로 확인 - NY945-1은 비만세포 활성화로 인한 histamine, Leukotrienes, TNFα의 유리를 현저히 감소 - NY945-1은 비만세포 활성화로 인한 PLD, PLC, MT효소활성 억제, DAG 생성억제 및 PKC활성억제 - NY945-1은 비만세포 활성화시 증가되는 세포질내 Ca++유입억제 - NY945-1은 생체내 Ovalbumin(OA) 투여로 인해 감소된 총 기도전도를 현저히 증가, 증가된 총 기도저항을 현저히 감소 - NY945-1은 생체내 OA 투여로 인한 알레르기 증상점수를 감소 - NY945-1은 생체내 OA 투여로 인해 증가된 해명 및 흰쥐 비강점막 호산구 및 비만세포 수를 현저히 감소 - NY945의 LD50은 5mg/kg이상으로 추정 - NY945의 일반 약리실험, 급성 및 아급성 독성시험에서 어떤 독작용도 관찰 안됨. - 유전자 공법을 이용해 대량생산을 위해 현재 유전자 clongin 및 DNA sequencing 실시중 ▷ 이상의 결과로 본 NY945-1은 비만세포 활성화로 인한 세포질내 Ca++유입을 차단함과 동시에 세포막 효소활성 및 제2전령물질 활성을 억제하므로서 histamine과 Leukotrienes(혹은 TNFα)유리를 감소시키는 것으로 사료된다. 또한 NY945은 비염 알레르기 유발시 호염기구 및 비만세포 침윤을 차단하므로 비염 알레르기성 질환시 증가되는 총기도저항을 회복시키며 감소되는 기도전도를 증가시키는 것으로 사료된다. 그러므로 신약개발의 기초 및 기반 기술을 확립하였다고 본다.

목차 Contents

• 제1장 서론...35
• 제2장 국내외 기술개발 현황...38
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...41
• 제1절 제1차년도...41
• 1. 연구수행 방법...41
• 가. 알로에 당단백 성분의 분리 및 정제...41
• (1) 알로에 전체잎에서 WIPIGT와 WIPIGC 시료제조...41
• (2) 알로에 건조분말(dry gel)에서 당단백 분리 및 정제...42
• (3) WIPIGC에서 P1, P2, P3분리...43
• 나. 전신성 과민반응(systemic anaphylaxis) 측정...43
• 다. 당단백 분리 성분의 항 알레르기 활성연구...44
• (1) 동물...44
• (2) 알로에 추출정제된 성분...44
• (3) 항체 생성을 위한 면역주사...44
• (가) 능동적 면역주사...44
• (나) 항체분리 및 역가측정...44
• (4) 해명 폐조직의 비만세포의 분리정제 및 매개체 유리 실험...45
• (5) 항원-항체 반응에 의한 비만세포의 매개체 유리 실험...45
• (6) 매개체들 측정...45
• (가) Histamine 측정...45
• (나) Leukotrienes(LT) 측정...46
• (다) Tumor necrosis factor $\alpha(TNF\alpha)$ 측정...46
• 2. 연구수행결과...47
• 가. 연구내용...47
• (1) 알로에 당단백 성분을 분리 및 정제...47
• (2) 항원-항체 반응을 위한 항체생성 분리 및 역가측정...47
• (3) 전신성 과민반응(systemic anaphylaxis) 평가...47
• (4) 비만세포 분리 정제방법 확립...47
• (5) 매개체 유리 검색...48
• (6) 각 매개체 검색...48
• 나. 연구결과...48
• (1) 알로에 당단백 분리...48
• (2) 알로에 유효성분의 정제과정 특성과 물질의 특성...49
• (가) 유효성분의 정제과정 특성...49
• (나) 분리 정제된 알로에 당단백 분획의 특성...50
• (3) 전신성 과민반응(systefmic anaphylaxis)에 미치는 알로에 WIP의 효과...50
• (4) 분리된 알로에 당단백 분획의 항 알레르기 효과...50
• (가) WIPIGT와 WIPIGC가 비만세포 활성화시 매개체유리에 미치는 영향...50
• (나) G2PGCP1-3, G2PGCP4 및 G2 IM ppt가 비만세포 활성화시 매개체 유리에 미치는 영향...51
• (다) 당단백 분획(WIPIGC)의 3peak가 비만세포 활성화시 매개체 유리에 미치는 영향...51
• 1. Histamine 유리에 미치는 영향...51
• 2. Leukotrienes 유리에 미치는 영향...52
• 3. Tumor necrosis factor $\alpha(TNF\alpha)$유리에 미치는 영향...52
• 제2절 제2차년도...53
• 1. 연구수행 방법...53
• 가. 알로에 당단백 성분의 분리 및 정제...53
• (1) NY945 분리...53
• (2) NY945 Deglycosylation...54
• (3) 항 알레르기 단일성분 분리 정제...55
• 나. NY945의 항 알레르기 기전 연구...55
• (1) 동물...55
• (2) 면역주사 방법 및 역가측정...55
• (가) 능동적 면역주사(anti-ovalbumin antibody 생성)...55
• (나) 항체 분리 및 역가 측정...56
• (3) 해명 폐조직의 비만세포의 분리정제 및 매개체 유리실험...56
• (4) Phospholipase D(PLD)활성도 측정...56
• (5) 1,2-diacylglycerol(DAG) 생성량 측정...57
• (가) Butanol이 존재하에서 DAG 측정...57
• (나) 총 1,2-diacylglycerol(DAG)생성량 측정...57
• (6) Adenylate cyclase(AC) 활성도 측정...57
• (7) Methyltransferase(MT) 활성도 측정...58
• (8) Intracellular $Ca^{++}$ 측정...58
• (9) 항원-항체 반응에 의한 비만세포의 매개체 유리실험...58
• (10) 매개체들 측정...59
• (가) Histamine 측정...59
• (나) Leukotrienes(LT) 측정...59
• 2. 연구수행 결과...60
• 가. 연구내용...60
• (1) 알로에에서 추출된 후보물질 및 약효검색...60
• (2) 알레르기 질환 치료 성분 검색 및 작용기전 연구...60
• (3) 알로에 당단백의 구조 분석...60
• (가) 당단백 성분 분석...60
• (나) 알로에 단일 물질의 N-말단 아미노산 서열 결정...61
• (4) NY945의 항 알레르기 기전 연구...61
• (가) 면역주사 및 역가...61
• (나) 해명 폐조직의 비만세포의 분리정제 및 매개체 유리 평가...61
• (다) Phospholipase D(PLD) 활성도 평가...62
• (라) 1,2-diacylglycerol(DAG) 생성량 측정...62
• (마) Adenylate cyclase(AC) 활성도 평가...62
• (바) Methyltransferase(MT) 활성도 평가...62
• (사) Intracellular $Ca^{++}$ 평가...63
• 나. 연구결과...63
• (1) 알로에 당단백의 분리 및 약효 검색...63
• (2) NY945 분리 정제 방법의 확립...63
• (3) 알로에 당단백의 구조 분석...64
• (가) 당단백의 성분 분석...64
• 1. 단백질 부분 제거...64
• 2. 당쇄 부분 제거...64
• (4) 항 histamine 단일 당단백 정제...64
• (5) 알로에 당단백 분획이 비만세포 활성화시 histamine 유리에 미치는 영향...65
• (가) NY945 세분획(P1, P2, P3)이 비만세포 활성화시 histamine 유리에 미치는 영향...65
• (나) 단백질 부분이 제거된 당쇄부분이 비만세포 활성화시 histamine 유리에 미치는 영향...65
• (다) 효소처리에 의해 얻어진 분획이 비만세포 활성화시 histamine 유리에 미치는 영향...65
• (6) 알로에 당단백(NY945)에 비만세포 활성화시 야기되는 효소들 및 제 2전령 물질에 미치는 영향...66
• (가) Phospholipase D(PLD) 활성도에 미치는 영향...66
• (나) Phospholipase C(PLC) 활성도에 미치는 영향...66
• (다) 총 1,2-diacylglycerol(DAG) 생성에 미치는 영향...67
• (마) Adenylate cyclase(AC) 활성도에 미치는 영향...67
• (바) Methyltransferase(MT) 활성도에 미치는 영향...68
• 제3절 제3차년도...68
• 1. 연구수행 방법...68
• 가. 알로에 당단백의 순수분리 정제...69
• (1) Aloe vera의 NY945 정제...69
• (2) NY945-1의 분리정제...70
• (3) Tricine-SDS polyacrylamide gel electrophoresis(Tricine-SDS PAGE)...70
• (4) N-terminal 아미노산 서열 규명...71
• (5) PCR(Polymerase Chain Reaction)을 이용한 gene screening...71
• 나. NY945의 독성시험...72
• (1) 급성독성시험...72
• (가) $LD_{50}$ 측정...72
• (2) 일반약리시험...72
• (가) 일반적 행동 관찰...72
• (나) 체중변화...72
• (다) 해명 적출회장, 기도, 폐, 우심방에 대한 실험...72
• (라) 토끼 적출회장, 방광근, 우심방에 대한 실험...73
• (3) 아급성 독성 시험...73
• (가) 실험군의 구성...73
• (나) 관찰항목...74
• 다. 알로에 NY945-1의 항 알레르기 기전 연구...75
• (1) 매개체 유리...75
• (2) Phospholipase D(PLD) 활성도에 측정...75
• (3) Phospholipase C(PLC) 활성도에 측정...76
• (4) 1,2-diacylglycerol(DAG) 생성량 측정...76
• (5) protein kinase C(PKC) 활성도 측정...76
• (6) Phospholipase $A_2(PLA_2)$ 활성도 측정...76
• (7) Intracellular $Ca^{++}$ 량 측정...77
• 라. 알레르기 비염에 관한 연구...77
• (1) 해명에서 알레르기 비염 모델 제작...77
• (가) 전신감작(systemic sensitization)...77
• (나) 비강내 국소감작(intranasal sensitization)...78
• (2) 기도전도 및 기도저항의 변화 측정...78
• (3) 알레르기 증상의 평가...79
• (4) 해명 및 흰쥐 비점막의 광학 현미경 표본 제작 및 관찰...79
• 2. 연구결과...80
• 가. 연구내용...80
• (1) 알로에 당단백의 분리정제 및 N-말단 서열 규명...80
• (2) 독성시험...80
• (가) 급성독작용시험...80
• (나) 일반약리시험...80
• (다) 아급성 독작용시험...80
• (3) 알로에 성분의 항 알레르기 기전 연구...81
• (가) 매개체 유리 검색...81
• (나) Phospholipase D(PLD) 활성도 평가...81
• (다) Phospholipase C(PLC) 활성도 평가...81
• (라) 총 1,2-diacylglycerol(DAG) 생성량 평가...81
• (마) Protein kinase C(PKC) 활성도 평가...81
• (바) Phospholiase $A_2(PLA_2)$ 활성도 평가...81
• (사) Intracellular $Ca^{++}$ 량 평가...81
• (4) 알레르기 비염에 대한 효과...81
• (가) 해명에서 알레르기 비염 모델 제작...81
• (나) 기도전도 및 기도저항 검색...81
• (다) 알레르기 증상 평가...81
• (라) 해명 비강점막의 광학 현미경 표본제작 및 관찰...82
• 나. 연구결과...82
• (1) 알로에(Aloe vera) 추출물인 NY945의 glycoprotein 함량...82
• (2) NY945-1의 분리정제 및 함량...82
• (3) NY945-1의 특성...83
• (4) NY945-1의 N-말단 아미노산 서열...83
• (5) NY945-1의 유전자 cloning...84
• (6) 독성시험 결과...84
• (가) 급성독성시험($LD_{50}$치)...84
• (나) 일반약리시험...84
• (다) 아급성 독작용시험...85
• (7) NY945-1의 항 알레르기성 기전 연구...87
• (가) NY945-1이 histamine과 leukotrienes 유리에 미치는 영향...87
• (나) NY945-1이 Phospholipase D(PLD) 활성도에 미치는 영향...87
• (다) NY945-1이 Phospholipase C(PLC) 활성도에 미치는 영향...87
• (라) NY945-1이 1,2-diacylglycerol(DAG) 생성에 미치는 영향...87
• (마) NY945-1이 protein kinase C(PKC) 활성도에 미치는 영향...88
• (바) NY945-1이 phospholiase $A_2(PLA_2)$ 활성도에 미치는 영향...88
• (사) NY945-1이 Intracellular $Ca^{++}$ 량에 미치는 영향...88
• (8) In vivo 실험결과...89
• (가) NY945가 기도전도(total airway conductance; TAC)에 미치는 영향...89
• (나) NY945가 기도저항(total airway resistance; TAC)에 미치는 영향...89
• (다) NY945가 알레르기 증상의 평가(allergic symptom score)에 미치는 영향...90
• (라) NY945가 비강 점막내 침윤세포에 미치는 영향...90
• 1. 감작된 해명 비강 점막내 호산구수(tissue eosinophil count)에 미치는 영향...90
• 2. 감작된 흰쥐 비강 점막내 호산구수(tissue eosinophil count)에 미치는 영향...91
• 3. 감작된 해명 비강 점막내 비만세포수(tissue mast cell count)에 미치는 영향...91
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도...92
• 제1절 제1차년도...92
• 1. 당해년도 연구개발 목표...92
• 2. 평가의 착안점...92
• 3. 연구개발 목표의 달성도...92
• 4. 기술발전에의 대외기여도...93
• 제2절 제2차년도...94
• 1. 당해년도 연구개발 목표...94
• 2. 평가의 착안점...94
• 3. 연구개발 목표의 달성도...94
• 4. 기술발전에의 대외기여도...95
• 제3절 제3차년도...96
• 1. 당해년도 연구개발 목표...96
• 2. 평가의 착안점...96
• 3. 연구개발 목표의 달성도...96
• 4. 기술발전에의 대외기여도...97