초록 ▼

▷ 본 연구에서는 숙주 세포로서 전통효모 S. cerevisiae 및 비전통효모 H. polymorpha를 이용하여 유전자 발현 시스템을 개발하고, 생산공정 최적화 연구를 수행하였다. 먼저 전통효모 S. cerevisiae를 이용한 알부민 생산 시스템에서 알부민 발현 및 분비에 영향을 주는 인자들을 분석하고, 이를 발현시스템에 도입하여 고발현을 유도하여 배양중 분비된 알부민의 분해산물 생성을 방지하기위하여 단백질 분해효소 결여 변이주 개발을 시도하고, 알부민의 발효생산 최적화를 위해서 알부민 발현 유도에 필수적인 탄소원 galact

▷ 본 연구에서는 숙주 세포로서 전통효모 S. cerevisiae 및 비전통효모 H. polymorpha를 이용하여 유전자 발현 시스템을 개발하고, 생산공정 최적화 연구를 수행하였다. 먼저 전통효모 S. cerevisiae를 이용한 알부민 생산 시스템에서 알부민 발현 및 분비에 영향을 주는 인자들을 분석하고, 이를 발현시스템에 도입하여 고발현을 유도하여 배양중 분비된 알부민의 분해산물 생성을 방지하기위하여 단백질 분해효소 결여 변이주 개발을 시도하고, 알부민의 발효생산 최적화를 위해서 알부민 발현 유도에 필수적인 탄소원 galactose의 공급방법등을 결정하였다. cerevisiae에서는 fed-batch 배양 결과 재조합 알부민 생성량이 1.5 g/L 수준으로 발현되었고, 다양한 연구시도 결과, 알부민 발현벡터 개선에 의한 더 이상의 생산성 향상은 어려울 것으로 생각되었다. Hansenula에서는 유전자의 염색체내에 다중 도입을 유발하는 자기복제 서열(HARS)을 확보하고 다중도입에서의 역할을 규명하였다. 아울러 발현 벡터의 다중 도입을 용이하게 하기 위한 한 방편으로 E.coli의 kanamycin 저항 유전자(kanr)를 이용하여 형질전환체를 얻고 안정화 과정을 거친 후, G418 농도가 각기 다른 배지에서 선별한가능성을 보여주었고 H. polymorpha가 효모에서의 재조합 단백질 생산에 적합한 시스템으로 사용되어 고부가가치 치료용 단백질을 생산하는데 적극 활용할 수 있게 되었다.