초록 ▼

대장균 세포내의 단백질 분해작용은 크게 2가지로 나눌 수가 있는데, 하나는 세포내 normal 단백질의 constant turnover로 필수단백질 합성을 위한 아미노산pool을 제공하는 작용과, 또 하나는 세포내에서 spontanuous denaturation, mutation 및 biosynthetic error에 의해 생성되는 abnormal protein 들을 제거하는 작용을 들 수가 있겠다. 이러한 세포내 단백질 분해작용의 mechanism과 pathway를 알기 위해서는, 이들 process를 담당하는 단백질 분해효소의

대장균 세포내의 단백질 분해작용은 크게 2가지로 나눌 수가 있는데, 하나는 세포내 normal 단백질의 constant turnover로 필수단백질 합성을 위한 아미노산pool을 제공하는 작용과, 또 하나는 세포내에서 spontanuous denaturation, mutation 및 biosynthetic error에 의해 생성되는 abnormal protein 들을 제거하는 작용을 들 수가 있겠다. 이러한 세포내 단백질 분해작용의 mechanism과 pathway를 알기 위해서는, 이들 process를 담당하는 단백질 분해효소의 identification과 isolation이 전제조건이 될 것이다. 따라서 본 연구에서는 대장균 세포내에 존재하는 new enzyme인 serine 단백질 분해효소, protease Re를 DEAE-, CM-cellulose; hydroxylapatite, heparin-agarose 및 butylagarose chromatographic 방법을 순차적으로 사용하여 순수분리 하였다. 이와 같이 정제된 효소를 사용하여 이 효소가 갖는 physicochemical 특성을 분석하였고, protease specific에 대한 inhibitor에 대한 sensitivity, kinetic study 및 substrate specificity를 조사하였다. 또한 protease Re가 여러가지 physiological process중에서 어떤 역할을 하는지를 알고자 세포내의 nitrogen balance를 조절하는 key enzyme인 glutamine synthatase의 turnover에 미치는 영향을 조사하였다.

목차 Contents

• 1. 연구배경...5
• 2. 연구방법...7
• 2.1 대장균 세포배양...7
• 2.2 Substrate Preparation...7
• 2.2.1 Native form 기질 Prep....7
• 2.2.2 Denatured form 기질...7
• 2.3 단백질 분해효소의 활성도 측정...7
• 2.4 전기영동...8
• 2.4.1 SDS-polyacrylamide gel 전기영동...8
• 2.4.2 IEF-polyacrylamide gel 전기영동...8
• 2.4.3 이차원 전기영동...8
• 2.5 Glutamine systhetase 의 oxidation...9
• 3. 연구결과...10
• 3.1 Protease Re의 순수분리...10
• 3.1.1 Preparation of crude Extract...10
• 3.1.2 DEAE-cellulose chromatography...10
• 3.1.3 CM- cellulose chromatography...11
• 3.1.4 Hydroxylapatite column chromatography...11
• 3.1.5 Heparin-agarose column chromatography...11
• 3.1.6 Butyl-agarose column chromatography...11
• 3.2 Protease Re의 물리$\cdot$화학적 성질...12
• 3.2.1 분자량의 결정...12
• 3.2.2 Isoelectric point의 결정...12
• 3.2.3 최적 pH의 결정...12
• 3.3 Protease Re의 생화학적 성질...12
• 3.3.1 여러가지 기질에 대한 Protease Re의 분해 능력...12
• 3.3.2 Protease Re의 활성에 미치는 여러가지 금속 Tons의 영향...13
• 3.3.3 Protease Re의 활성에 미치는 일반적인 여러가지 Inhibitors 또는 (or activators)에 대한 영향...13
• 3.3.4 Glutamine synthetase에 대한 Protease Re의 분해 능력...13
• 4. 인용문헌...15