초록 ▼

대장균 세포를 LB 배양액에서 대량으로 배양하여 세포를 원심분리하여 수확하였다. 수확한 세포를 French press로 파쇄한 다음, 다시 초원심분리하여 crude extract를 얻었다. 이crude extract를 이온교환수지인 DEAE-cellulose chromatography에 의해 분리해 보면 여러가지 단백질 분해효소들이 염의 농도에 따라 용출되어 나온다. 효소활성도 측정을 위하여, 기질로는 방사능이 표지된 casein과 insulin을 사용하였는데, 대장균 세포내에는 이온교환 수지에 의해 분리되어 나오는 순서에 따라 5

대장균 세포를 LB 배양액에서 대량으로 배양하여 세포를 원심분리하여 수확하였다. 수확한 세포를 French press로 파쇄한 다음, 다시 초원심분리하여 crude extract를 얻었다. 이crude extract를 이온교환수지인 DEAE-cellulose chromatography에 의해 분리해 보면 여러가지 단백질 분해효소들이 염의 농도에 따라 용출되어 나온다. 효소활성도 측정을 위하여, 기질로는 방사능이 표지된 casein과 insulin을 사용하였는데, 대장균 세포내에는 이온교환 수지에 의해 분리되어 나오는 순서에 따라 5 peak의 효소 활성을 가진 단백질 분획들이 분리되어 진다. 이들이 용출되어 나오는 순서에 따라, protease Do, Re, Mi, Fa, So, La 등의 casein을 분해하는 효소들과 protease Ci, Pi와 같은 insulin을 분해하는 효소들로 나뉘어 진다. 이들 중 protease La는 ATP 의존성 단백질 분해효소로서 분해효소들 중 가장 많이 그 성격 및 생리적 기작에 대하여 알려져 있다. 최근에 들어 protease La의 돌연변이 균주에서 또 다른 ATP 의존성 분해효소인 protease Ti가 발견되어 이 효소의 정제와 그 생화학적 성격에 대한 보고가 있었다.대장균 세포 내 여러 단백질 분해효소 중 일차로 이온교환수지에서 나온 5가지 peak에서 protease Re와 protease So를 여러가지 conventional column을 이용하여 순수분리 정제하였다. 순수분리한 두가지 단백질 분해효소들의 세표 내 생리적 기작을 알아보기 위하여 우선 그 생화학적인 성격을 규명하였다. 특히, 단백질 분해효소 억제제를 이용하여 그 효소의 기능과 역할에 대해 알아 보았고, mixed function oxidation system을 이용하여 가능한 세포 내 기질 특이성에 대하여 조사하였다. 대장균 세포 내 질소대사 과정에 중요한 역할을 하는 glutamine synthetase를 ascorbate, 철, 산소에 의해 산화를 시킨 뒤 분리한 분해효소를 이용하여 선택적인 분해 능력에 대한 특이성을 조사하였다.

목차 Contents

• 제1장 Introduction...11
• 제2장 Materials and Methods...15
• 제1절 Materials...15
• 제2절 Activity Assays...16
• 제3절 Electrophoresis and Estimation of Molecular Weights...17
• 제4절 Preparation of Crude Extract...18
• 제3장 Results and Discussion...20
• 제1절 Purification and Characterization of Protease Re...20
• 제2절 Purification and Characterization of Protease So...31
• References...41