초록 ▼

Oxytocin(OT)은 종래에 밝혀진 뇌하수체후엽 호르몬으로서의 기능 이외에 학습, 기억력, 자율신경 조절 등 신경전달물질로서의 역할이 제기되고 있으나 기능적 측면에서 확인되어 있지 않다. 위에서 제기된 신경전달물질로서의 역할을 규명하기 위하여는 OT 세포를 주위의 신경세포들과 구분할 수 있어야 하고 또한 특정 자극에 대한 이 세포 개개의 활성을 검색할 수 있는 조직화학적 연구방법이 절실히 요구된다. 본 연구는 세포에서 일어나는 OT 합성을 유전자 발현단계에서 검출할 수 있는 in situ hybridization 조직화학 방

Oxytocin(OT)은 종래에 밝혀진 뇌하수체후엽 호르몬으로서의 기능 이외에 학습, 기억력, 자율신경 조절 등 신경전달물질로서의 역할이 제기되고 있으나 기능적 측면에서 확인되어 있지 않다. 위에서 제기된 신경전달물질로서의 역할을 규명하기 위하여는 OT 세포를 주위의 신경세포들과 구분할 수 있어야 하고 또한 특정 자극에 대한 이 세포 개개의 활성을 검색할 수 있는 조직화학적 연구방법이 절실히 요구된다. 본 연구는 세포에서 일어나는 OT 합성을 유전자 발현단계에서 검출할 수 있는 in situ hybridization 조직화학 방법을 개발하고자 계획되었다. 이를 위하여 OT mRNA에 상보적인 22mer 및 30mer oligonucleotide 2 종류를 합성하여 ??P로 표지한 후 probe로 사용하였다. 흰쥐의 시상하부 조직 절편에 in situ hybridization을 시행한 후 autoradiography 과정을 거쳤다. Hybrid signal은 시각교차위핵(SON)과 뇌실옆핵(PVN)의 vasopressin 분비세포에서 집중적으로 관찰되었다. Slot blots 방법에 의하여 정상군과 소금물 투여군의 시상하부 조직내의 mRNA양을 비교하였던 바 소금물 투여군은 정상군에 비하여 mRNA 총량이 1.08배 증가한 반면 OT mRNA는 1.93배 증가하였다. 또한 소금물 투여군의 SON과 PVN에서는 c-Fos 항체 염색에 양성반응을 보인 세포가 출현하였고 이들 중 많은 세포들이 OT 세포임을 이중면역세포화학 반응에 의하여 관찰할 수 있었다. 이와같은 실험결과는 적용한 probe가 OT 분비세포를 동정할 수 있을 뿐만아니라 세포의 합성능을 가늠할 수 있는 유용한 방법임을 입증하는 것으로 사료된다.

Abstract ▼

An in situ hybridization technique was applied to detect oytocin(OT) mRNA in the hypothalamic neurosecretory neurons. Two oligonucleotides, 22 mer and 30 mer, complementary to the rat OT mRNA were synthesized, radio-labelled at the 5' end with ??P. The probes were applied to sections of the rat hy

An in situ hybridization technique was applied to detect oytocin(OT) mRNA in the hypothalamic neurosecretory neurons. Two oligonucleotides, 22 mer and 30 mer, complementary to the rat OT mRNA were synthesized, radio-labelled at the 5' end with ??P. The probes were applied to sections of the rat hypothalamus, and were visualized by autoradiography. Autoradiographic signals representing hybrids of the probe and the AVP mRNA were localized distinctly over the supraoptic and paraventricular nuclei. Magnitudes of hybrid signals analysed by slot blot technique in the salt-loaded rats appeared to be significantly higher than those in control rats. We have also found the c-Fos protein expression in the oxytocinergic neurons of the salt loaded rat by means of double-immunostaining. These results show that the in situ hybridization method using synthetic oligonucleotide probes can be a powerful and specific tool for the study of OT gene expression in the hypothalamic nuclei.

목차 Contents

• 차례...7
• 서론...10
• 연구목적...13
• 연구재료 및 방법...14
• 결과...20
• 고찰...27
• 결론...32
• 참고문헌...33
• 논문발표실적 또는 계획...39
• 학위배출실적...39
• 연구비항목별 집행내역...40