초록 ▼

B형 간염 바이러스(HBV)의 polymerase는 protein-primedreaction을 통해 역전사를 시작한다. 이 과정은 첫 번째 deoxyribonucleotide가 polymerase의 N-terminal에 위치한 terminal protein이 이러한 protein priming 과정을 수행한다고 알려져 있다.본 연구에서는 사람의 B형 간염 바이러스의 polymerase로부터 terminal protein과polymerase domain만을 각각 분리하여 대장균에서 발현시켜서 affinity chr

B형 간염 바이러스(HBV)의 polymerase는 protein-primedreaction을 통해 역전사를 시작한다. 이 과정은 첫 번째 deoxyribonucleotide가 polymerase의 N-terminal에 위치한 terminal protein이 이러한 protein priming 과정을 수행한다고 알려져 있다.본 연구에서는 사람의 B형 간염 바이러스의 polymerase로부터 terminal protein과polymerase domain만을 각각 분리하여 대장균에서 발현시켜서 affinity chromatography로정제해 내었다.이렇게 정제된 polymerase domain의 활성을 조사한 결과, 전체 polymerase에 비해26%의 DNA-dependent DNA polymerase 활성을 나타내었다. 여기서 HBV polymerase의활성을 위해서는 다른 domain이 존재하여 구조적으로 안정화 되어야 함을 유추할 수 있다.또, replication 상에서 dominant negative effect를 나타내는 domain을 조사하기 위해서 replication이 가능한 virion을 생산해 내는 system을 구축하고, HBV polymerase의 일부분이 deletion된 mutant들을 제조하여 endogeneous polymerase assay를 실시한 결과N-terminal 지역보다는 C-terminal 지역이 HBV의 복제에 더 중요함을 알 수 있었다.

Abstract ▼

Human hepatitis B virus(HBV) polymerase initiates replicationby a protein-primed reaction that involves the covalent linkage of the firstdeoxyribonucledtide to the polymerase polypeptide. Several reports have it that thisreaction is due to priming activity of termanal protein l

Human hepatitis B virus(HBV) polymerase initiates replicationby a protein-primed reaction that involves the covalent linkage of the firstdeoxyribonucledtide to the polymerase polypeptide. Several reports have it that thisreaction is due to priming activity of termanal protein located in N-terminal region ofHBV polymerase.In this research, terminal protein and polymerase domain were cloned andexpressed in E. coli separately. The products were purified by affinitychromatography.The DNA-dependent DNA polymerase activity of purified HBV polymerase domainwas 26%, compared with the whole polymerase of HBV. This result implies that otherdomains of the HBV polymerase are necessary for structural stability of the protein.In order to identify which domain shows the dominant effect on HBV replication,we constructed virion-producing system. We found that C-terminal region of the HBVpolymerase is more important than N-terminal region on HBV replication by usingendogeneous polymerase assay with serial deletion mutants.

목차 Contents

• 목 차...6
• 서론...7
• 연구배경...7
• 연구목적 및 기대효과...8
• 연구방법 및 결과...10
• 고찰 및 결론...17
• 인용문헌...19