초록 ▼

1. 연구개발사업 목표
가. 우유 항균물질 검사를 위한 최적 미생물 선발 및 배양조건 확립
나. 항균물질 검사를 위한 발색 system 개발
다. 선발된 미생물과 발색 system을 혼합한 항균물질 검사법 확립
2. 연구의 내용 및 범위
가. 우유 항균물질 검사를 위한 최적 미생물 선발 및 배양조건 확립
1) 국내외 관련자료 및 문헌조사
2) 국내산 우유를 소재로 항균물질 검사용 최적 미생물 검색
3) 항균물질에 민감한 균주선발 및 특성조사
4)

1. 연구개발사업 목표
가. 우유 항균물질 검사를 위한 최적 미생물 선발 및 배양조건 확립
나. 항균물질 검사를 위한 발색 system 개발
다. 선발된 미생물과 발색 system을 혼합한 항균물질 검사법 확립
2. 연구의 내용 및 범위
가. 우유 항균물질 검사를 위한 최적 미생물 선발 및 배양조건 확립
1) 국내외 관련자료 및 문헌조사
2) 국내산 우유를 소재로 항균물질 검사용 최적 미생물 검색
3) 항균물질에 민감한 균주선발 및 특성조사
4) 선발균주 배양을 위한 배양조건 설정
나. 항균물질 검사를 위한 발색 system 개발
1) 우유검사 관련 국내외 실태조사
2) 항균물질 검사용 미생물 선발 및 특성조사
3) 지시약 선발 및 발색특성 조사
4) 미생물과 지시약을 혼합한 발색체계 확립 및 보완
다. 선발된 미생물과 발색 system을 혼합한 항균물질 검사법 확립
1) 우유검사관련 국내외 실태조사
2) 선발된 균주를 이용한 균주체 제조
3) 선발균주 배양을 위한 배지체 제조
4) 항균물질 검사 최적 복합체 제조
5) 균주체 배지체 발색제를 혼용한 항균물질 검사 bio system 확립

Abstract ▼

This study carried out to establish effective bio system for the detection of antimicrobials in milk. Lactic bacteria was isolated from the raw milk and selected based on the sensitivity of antimcrobials in milk. Various kinds of medium and indicators were tested its sensitivity on the antimicrobial

This study carried out to establish effective bio system for the detection of antimicrobials in milk. Lactic bacteria was isolated from the raw milk and selected based on the sensitivity of antimcrobials in milk. Various kinds of medium and indicators were tested its sensitivity on the antimicrobials and selected. Based on the results of sensitivity, lactic bacteria, medium and indicators were selected and antimicrobials testing bio system were established. The results obtained were summarized as follows;
1. Among 807 strains of lactic bacteria isolated from the raw milk, 15 were selected as a testing organism based on the sensitivity on the antibiotics(sulfamethazine 0.01 ppm, sulfadimetoxin 0.01 ppm, sulfathiazole 0.01 ppm, sulfathiazole 0.01 ppm, erythromycine 1 ppm, chloramphenicol 0.1 ppm).
2. Among 15 strains of lactic bacteria, 8 of them shown coagulability and sensitivity on the skim milk and tryptic soy broth. They were identified as Lactobacillus para paracasei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum, Leuconostoc mesen. cremoris, Lactobacillus acidophilus.
3. Through the pH changes during the fermentation of lactic bacteria in skim milk at various temperatures, optimun temperature for the incubation of selected lactic bacteria were revealed as $37^{\circ}C$.
4. Totally 64 strains of lactic bacteria were selected from 1532 strains of bacteria isolated from raw milk during 2 years study.
5. Various kinds of indicators(14) were tested its sensitivity for the antimicrobial testing and optimun indicator for the detection of antimicrobials were resazurin, methyl red and bromocresol purple and its optimum concentration and dosage were 0.1-0.005% and 0.5 ml respectively.
6. Practical indicator for the detection of antimicrobials were Resazurin, Resazurin + Methyl red(1:1) and Resazurin + Bromocresol purple(1:1) compared to the other kinds of indicators.
7. Through the sensitivity test on the tryptic soy broth and skim milk medium, selected strains were identified as Enterococcus casseliflavus, Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus cellobiosus, and Streptococcus thermophilus. And MRS broth was optimum medium for the preparation of starter cultures of selected lactic bacteria.
8. Through the various kinds of medium test with the Resazurin indicator, MRS broth, M17 broth, MRS + Skim milk(1:1) and SPC + Skim milk were revealed as good medium and SPC+Skim milk was one of the best medium for the antimicrobial test in milk.
9. SPC+Skim milk and Resazurin were the optimum medium and indicator for the antimicrobial testing of raw milk.
10. The optimum bio system for the testing of antimicrobials in milk is composed of 20ul of lactic starter culture(Enterococcus casseliflavus, Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus cellobiosus, Streptococcus thermophilus), 140ul of medium broth(SPC + Skim milk), 60ul of indicator solution(Resazurin, Methyl red, Bromocresol purple) and 40 ul of sample milk in the multiwell plate. The mixed solution of the multiwell plate is incubated at $37^{\circ}C$ for 3 hours then the result will be defined according to the changes of indicator in the mixed solution.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 요약문...4
• SUMMARY...10
• 목차...18
• 제1장 서론...22
• 제1절 연구개발의 목적과 범위...22
• 1. 연구목적...22
• 2. 연구범위...22
• 제2절 원유품질 및 항균물질 검사...23
• 1. 원유 품질...23
• 2. 항균물질 검사...31
• 제2장 우유 항균물질검사를 위한 최적미생물선발 및 배양조건 확립...44
• 제1절 서설...44
• 제2절 재료 및 방법...45
• 1. 국내 원유에서 젖산균의 분리...45
• 2. 항균물질감수성 및 TTC II test와 지시약 실험을 위한 항균물질 용액의 제조...46
• 3. 항균물질 감수성 검사...47
• 4. TTC / TTC II test에 적용 가능한 균주 선발...48
• 5. TTC / TTC II test용 시약조제...48
• 6. 항균물질에 감수성 있는 선발균주의 TTC / TTC II test...49
• 7. 최종 선발된 균주의 동정...49
• 8. 선발균주의 최적 배양조건 설정...50
• 제3절 결과 및 고찰...50
• 1. 국내산 우유를 소재로 항균물질 검사용 최적 미생물 검색...50
• 2. 항균물질에 민감한 균주선발 및 특성조사...58
• 3. 선발균주 배양을 위한 배양조건 설정...66
• 제3장 항균물질 검사를 위한 발색 system 개발...72
• 제1절 서설...72
• 제2절 재료 및 방법...74
• 1. 1차년도 균주의 항균물질 감수성 재검사...74
• 2. 국내 원유에서 젖산균의 분리...75
• 3. 2차년도 균주의 항균물질 감수성 검사...75
• 4. 선발균주 이용한 지시약 선발 및 발색 특성조사...76
• 5. 미생물과 지시약을 혼합한 발색체계 확립 및 보완...77
• 제3절 결과 및 고찰...81
• 1. 항균물질 검사용 미생물 선발 및 특성조사...81
• 2. 지시약 선발 및 발색특성 조사...85
• 3. 미생물과 지시약을 혼합한 발색체계 확립 및 보완...93
• 제4장 선발된 미생물과 발색 system을 혼합한 항균물질검사법 확립...106
• 제1절 서설...106
• 제2절 재료 및 방법...107
• 1. 최종선발된 균주의 동정...107
• 2. MRS 배양균주와 Skim milk 배양균주의 비교...107
• 3. 선발된 균주의 배지별 감수성 실험...108
• 4. 최적 배지조건 설정...112
• 5. HPLC를 이용한 우유내 잔류 설파제 분석...113
• 6. 최적의 균주/배지/지시약 혼합체 설정...114
• 제3절 결과 및 고찰...115
• 1. 선발된 균주를 이용한 균주체 제조...115
• 2. 선발균주 배양을 위한 배지체 제조...128
• 3. 항균물질 검사 최적 복합체 제조...136
• 4. 균주체 배지체 발색제를 혼용한 항균물질 검사 bio system 확립...142
• 참고문헌...154
• 부록 1. 미국출장조사 결과 요약...160
• 부록 2. 호주출장조사 결과 요약...163