초록 ▼

제 1 세부과제 : HLA 검사 신뢰도평가조사는 연간 2회씩 총 4회에 걸쳐 실시하였고 HLA class I 항원검사, class II DNA 검사 및 crossmatch 검사를 포함하였다. 전국 HLA 검사기관을 대상으로 HLA crossmatch의 검사방법을 표준화하고 검사성적을 향상시키기 위해 워크샵을 실시하였으며, HLA 검사실 현황에 대한 설문조사도 실시하였다. PRA 검사의 모델정립을 위해 장기이식 대기환자의 혈청을 대상으로 NIH법과 AGH법의 두가지 세포독성방법을 비교하였으며, 동결림프구 PRA tray의 제조 및

제 1 세부과제 : HLA 검사 신뢰도평가조사는 연간 2회씩 총 4회에 걸쳐 실시하였고 HLA class I 항원검사, class II DNA 검사 및 crossmatch 검사를 포함하였다. 전국 HLA 검사기관을 대상으로 HLA crossmatch의 검사방법을 표준화하고 검사성적을 향상시키기 위해 워크샵을 실시하였으며, HLA 검사실 현황에 대한 설문조사도 실시하였다. PRA 검사의 모델정립을 위해 장기이식 대기환자의 혈청을 대상으로 NIH법과 AGH법의 두가지 세포독성방법을 비교하였으며, 동결림프구 PRA tray의 제조 및 안정성 평가, flow PRA screening 검사법의 수립 등을 실시하였다. 제 2 세부과제 : 장기이식의 가장 중요한 과제인 급성거부반응의 진단의 측면에서 볼때, 현째까지는 신기능 검사와 같이 예민도가 매우 낮은 검사나, 신조직검사와 같은 위험부담이 큰 검사방법에 의존하고 있어서 조기진단에 어려움이 있어왔다. 따라서 본 연구에서는 급성거부반응 초기에 발현되는 각종 급성거부반응 매개인자들에 대한 조기진단적 유용성을 검토하고자 한다. 급성거부반응의 발생기전을 단계적으로 분석하기 위하여 제 1 단계로 마우스에서 동종이식 모델을 정립하고, 동물모델을 이용하여 ELISA법을 이용하여 급성거부반응의 병리소견을 관찰하고, 이와 관련하여 급성거부반응을 매개하는 cytokine으로 알려진 IL-2, IL-6를 측정한다. 제 2 단계에서는 동종이식 동물모델에서 급성거부반응의 조기진단 지표를 혈청내 지표와 조직내 지표로 나누어 측정한다. 혈청내 지표는 급성거부반응의 간 단계에서 설정하며, Th cell 단계에서는 IL-2와 INF-gamma, 효과기 세포단계에서는 IL-1beta, TNF-alpha, tissue factor를, 조직단계에서는 granzyme B와 IL-12를 측정한다. 조직 내 지표로는 이상의 지표에0 대하여 RT-PCR로 mRNA를 측정한다. 더불어 이식환자에서 거부반응 검토를 위한 전향적 연구체계를 설립한다. 제 3차년도에서는 동종이식 동물 모델에서 림프구 기능변화를 측정하기 위하여 말초혈액에서 FACS를 이용한 CD4, CD8, MHC II, LFA-1, VLA등의 T림프구의 표면항원 분포를 분석하고, 세포독성 T 림프구의 기능을 T-림프구 증식반응 검사를 통하여 살펴본다. 제 3 세부과제: 첫째, 장기간 생존하는 신이식환자에서 어느 정도 면역관용 상태와 형성될 수 있는지 보기 위해 신이식후 공여자 특이적 저반응성을 MLC 검사로 관찰하였고, 신이식 환자에서 미세키메리즘 발현여부를 알기 위해 HLA DRB1 gene 및 Y- 염색체를 이용한 nested PCR 기법을 확립하고 이를 이용하여 이식환자의 혈액과 피부조직에서 미세키메리즘 발현을 알아보았으며, 미세키메리즘과 MLP 저반응성의 상관관계 및 임상특성을 분석하여 미세키메리즘 발현의미를 알아보았다. 둘째로, 소동물에서 면역관용 유도모델 개발을 위해서는 순계쥐의 이소성 심장이식술을 확립한 후, 다른 면역억제제 투여 없이 anti-CD4 단클론항체를 주입하여 면역관용여부를 이식심장의 생존 및 FACS 분석을 통하여 알아보았다. 제 4 세부과제: 제 1소제목: 급성 거부반응의 치료 반응에 영향을 미치는 원인에 관한 분석 아산재단 서울중앙병원에서 1990년부터 1996까지 499예의 신이식(생체 신이식 28예, 사체 신이식 107예)이 시행되었으며 임상적으로 급성 거부반응의 진단 후 치료를 시행한 92예 가운데 조직검사로 확진된 급성 거부반응은 39예(생체 신이식 28예, 사체 신이식 11예)였다. 이들의 진단 시점에서의 크레아티닌의 기저치와 비교해 100%이상 증가한 군과 그 이하로 증가한 군의 신기증의 변화와 이러한 진단 시점에서의 신기능 저하가 급선 거부반응의 치료반응에 미치는 영향을 살펴보았으며 그 외 발생시기, 신조직검사의 심각도, HLA-DR 부적합성, 공여자의 유형에 따른 신기능의 변화 및 이들이 치료반응에 미치는 영향을 조사하였다. 제 2 소제목 : Hepatitis B surface antigen(HBsAg) 양성 환자에서의 신이식 성적 1993년 1월부터 1997년 12월까지 서울중앙병원에서 신이식을 받은 13명의 HBsAg 양성인 말기 신부전 환자(나이;33±11, 남;여=10:3)를 대상으로 하여 그들의 임상 경과와 바이러스 표식자를 분석하였다. 신이식 후 추적 기간은 중앙값 17개월(범위; 1-30개월)이었다. 제 3 소제목: 사람 신사구체 내피세포에서의 VCAM-1과 HLA-DR의 발현 양성 본 연구자들은 IL-1β, TNF-α, IFN-r가 내피세포의 VLA-4의 연결물질인 VCAM-1과 HLA-DR발현에 미치는 영향과 염증 반응 조절 인자인 dexamethason과 TGF-β에 의한 VCAM-1 발현 변화를 ELISA와 flowcytometry를 이용하여 관찰하였다. 제 5 세부과제 : 이종장기이식 model 개발 장기이식후 거부반응의 판정 장기이식후 면역반응의 연구 세포면역반응의 관찰 - Immunohistochemistry, RT-PCR 항체의 역할 규명 - Immunohistochemistry, ELISA, Western blot 보체의 역할 규명 - RT-PCR 이종장기이식후 장기생존 연장법의 개발 CVF(Cobravenom factor)를 주사하여 장기생존의 연장유도 CVF 사용후 면역반응에 관한 연구

Abstract ▼

Project 1: Four trials of HLA proficiency surveys were perfornmed (two times a year) with 35-39 participating laboratories, and HLA class I antigen typing, class II DNA typing and HLA crossmatch tests were included in each survey. HLA crossmatch workshop was performed to standardize test methods and

Project 1: Four trials of HLA proficiency surveys were perfornmed (two times a year) with 35-39 participating laboratories, and HLA class I antigen typing, class II DNA typing and HLA crossmatch tests were included in each survey. HLA crossmatch workshop was performed to standardize test methods and improve the test results of crossmatch tests. In addition, a questionnaire survey among all participant HLA laboratiories was performed. For PRA tray was made and stability on strage was tested, and a test method was established for PRA screening by flow cytometry. Project 2: The first step(the first year) is to develop the allogenic transplantation model between mice, to observe the change of cytokines with time by ELISA, such as IL-2, IL-6 and so on. The second step(the second year) is to divide the markers into serum markers and tissue markers and measure these markers of acute rejection in animal model. Serum markers of each step as follows; IL-2 and INF-gamma at the first and second step, IL-1 beta, TNF-alpha, tissue factor at the third step, granzyme-B, IL-12 at the fourth step. For tissue markers of above markers mRNAs will be maesured by RT-PCR, The thrid step(the third year) is to elucidate the functional change of peripheral T lymphocytes by FACS analysis of surface markers such as CD4, CD8, MHC II, LFA-1, VLA. Project 3: First, in order to investigate the presence of some degree of specific immunologic hyporesponsiveness to donor antigen in long-term surviving renal transplant recipients, MLC test was performed. To know the presence of microchimerism in the blood and forearm skin of renal transplant patients, we have performed the nested PCR technique using HLA DRBI gene and Y-chromosome. We analysed the meaning of microchimerim by the correlation between microchimeric status and donor specific MLR hyporesponsiveness and clinical parameter such as acute rejection. Secondly, to develope the tolerance induction model in small animal, we established surgical technique of heterotopic cardiac transplantation in rats and observed the cardiac graft survival in anti-CD4 treated rats. FACS test was performed to check the effect of anti-CD4 monoclonal antibody. Project 4: Analysis of Factors Influencing Treatment Response in Acute Rejection In our center, between 1990 and 1996, 499 patients(392 living donor transplantation (LDT), 107 cadaveric donor transplantation(CDT) underwent kidney transplantation, of whom 92patients had been treated for episodes of acute or chronic rejection. In this study, 39 biopsy proven acute rejections(28 LDT, 11 CDT) were analyzed. The factors affect the response to anti-rejection therapy were as follows: the onset of acute rejection, pathologic severity by Banff classification, the severity of renal dysfuction, HLA-DR mismatch and the donor type. Renal Transplantation in HBsAg(+) Patients During the past 5 years, thirteen end-stage renal disease patients (age 33±11, Male:Female = 10:3) who were HBsAg carrier underwent kidney transplantation in Asan Medical Center. The clinical course and changes in viral markers were analyzed. The Expression of Vascular Cell Adhesion Molecule-1(VCAM-1) and HLA-DR in Cultured Human Glomerular Endothelial Cells The human glomerular endothelial cells were isolated and cultured from the normal portion of the kidneys resected due to renal cell carcinoma. The effects of IL-1β, TMF-α and IFN-r on the cell surface expression of VCAM-1 and HLA-DR were measured by ELISA and flow cytometry. The effect of dexamethasone and TGF-β on the cytokine induced VCAM-1 expression was measured using ELISA method, also. Project 5: We already reported the early immunologic events occuring soon after xenograft in animal model, in which natural antibody and complement have a crucial role in rejection response. As a further step for the prolongation of graft survival, we used anticomplement agent(cobravenom factor, CVF) in the same model.

목차 Contents

• 제1세부과제: 이식전 면역학적 검사의 표준화...30
• 제2세부과제: 이식거부반응의 기전 규명 및 조기진단법 개발...50
• 제3세부과제: 장기이식에서 면역관용의 유도기술 개발...82
• 제4세부과제: 장기이식에서의 면역요법 연구...106
• 제5세부과제: 이종이식후 작용하는 면역반응의 기전규명 및 면역억제요법의 개발...136