초록 ▼

본 연구에서는 칼슘 이온 통로 ${\beta}$3 유전자 변이 생쥐와 ${\alpha}$lD 유전자 변이 생쥐를 유전자 적증법을 이용하여 생산, 분석함으로써 이들 유전자의 생체내 기능을 규명하고자 하였으며, 모델 동물로써의 가능성을 타진하고자 하였다.
칼슘 이온 통로 ${\beta}$3 유전자 결손 생쥐에서 ${\beta}$3 결손 여부를 Nonhern, Western 분석을 통하여 분석하였으며, ${\beta}$3의 결손에 의하

본 연구에서는 칼슘 이온 통로 ${\beta}$3 유전자 변이 생쥐와 ${\alpha}$lD 유전자 변이 생쥐를 유전자 적증법을 이용하여 생산, 분석함으로써 이들 유전자의 생체내 기능을 규명하고자 하였으며, 모델 동물로써의 가능성을 타진하고자 하였다.
칼슘 이온 통로 ${\beta}$3 유전자 결손 생쥐에서 ${\beta}$3 결손 여부를 Nonhern, Western 분석을 통하여 분석하였으며, ${\beta}$3의 결손에 의하여 영향받는 채널 타입 및 채널의 kinetics를 연구하기 위해 129/SV co-isogenic ${\beta}$3 (-/-) 생쥐와 정상의 129/sv 생쥐로부터 Superior cervical ganglion (SCG)을 분리 및 배양하여, 이 뉴론에서의 칼슘 통로를 통한 $Ba^{2+}$ current 를 whole-cell patch clamp 방법을 이용하여 쟀다. 우울증의 형성 기작에 대한 연구로 강제 수영 검사를 실시하였다. 첫날 15분간 강제수영(1st test)을 시키고, 24시간 후에 5분간만(retest) 강제수영을 시켰으며, 이때 재시도 시에 무력감이 학습됨으로서 이로 인해 부동시간의 증가 (depression: prolongation of immobiliry) 를 보이는데 이것이 우울증에 상응하는 절망행동이다.

Abstract ▼

Voltage-dependent calcium channel (VDCC) plays a major role in the regulation of calcium entry in many cell types. To investigate the function of calcium channel $\beta$3 subunit which is expressed predominantly in brain and thought to be mostly associated with N-type a1 subunit, we have

Voltage-dependent calcium channel (VDCC) plays a major role in the regulation of calcium entry in many cell types. To investigate the function of calcium channel $\beta$3 subunit which is expressed predominantly in brain and thought to be mostly associated with N-type a1 subunit, we have tried to make and analyze $\beta$3 knock-out mice generated via gene targeting. Nowadays gene targeting became a most popular and powerful technique for analyzing in vivo gene function on various levels, i.e. molecular, cellular, and organismal levels.
Animals homozygous for this mutation developed and reproduced without obvious phenotypes.. Northern blotting, Western blotting, and immunohistochemical analysis confirmed the absence of the $\beta$3 gene product. Histological analysis of the various organs of the $\beta$3 knock-out mice showed no apparent abnormalities. Then we measured $Ba^{2+}$ currents through calcium channels in culrured Superior Cervical Ganglion (SCG) neurons by whole-cell patch clamp. The averages of the N-current density are 13$\pm$2.5 pA/pF (wild-type, mean$\pm$SEM, n=17) and 6$\pm$1.5 pA/pF (mutant, n=16, p<0.01). Thus the absence of $\beta$3 reduced the N-current density. Other types of calcium chanels were unaffected. The inactivation kinetics also unchanged. As one of the way to see the depression abnormality on mutant mice, we did forced swimming test. The averages of immbolized time at second trial are 159.56$\pm$50.40 (wild type, mean$\pm$SD, n=9), 112.75$\pm$53.49 (mutant, n=9). The statistical analysis, Mann-Whitney test, showed p-value 0.112. So it means there is no difference between wild-type and mutant. But because the p-value is near the significance, the sample number need to be increased.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 8
• 목차 ... 10
• 제1장 서론 ... 11
• 제 1 절 연구개발의 목적 ... 11
• 제 2 절 연구개발의 필요성과 중요성 ... 11
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 13
• 제 1 절 국외의 기술개발 현황 ... 13
• 제 2 절 국내의 기술개발 현황 ... 14
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 16
• 제 1 절 칼슘이온 통로 β3 유전자 결손 생쥐의 분석 ... 16
• 제 2 절 칼슘이온 통로 α1D 유전자 결손 생쥐의 생산 ... 19
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 25
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 27
• 제6장 참고문헌 ... 28
• 최종보고서 요약(초록) ... 31