초록 ▼

선천성 대사질환은 매우 종류가 많지만 우리 나라에 비교적 많은 질환인 Lesch-Nyhan 증후 군 환아의 Genomic DNA 추출, Primer의 구축 및 각 exon PCR, SSCP분석, PCR 산물을 이용 한 직접적 염기 서열 결정, PCR-RFLP와 PCK-ASO Hybridzation으로 확인, 분자 유전학 진단 법을 개발하고, 페닐케톤뇨증환아에서 Genomic DNA추출, PCR-RFLP실시,산전 진단의 분자유 전학적 진단법 개발, GCMS을 이용한 유기산 대사 이상증의 진단법을 개발하고, 윌슨씨병과, 당원병의 DNA

선천성 대사질환은 매우 종류가 많지만 우리 나라에 비교적 많은 질환인 Lesch-Nyhan 증후 군 환아의 Genomic DNA 추출, Primer의 구축 및 각 exon PCR, SSCP분석, PCR 산물을 이용 한 직접적 염기 서열 결정, PCR-RFLP와 PCK-ASO Hybridzation으로 확인, 분자 유전학 진단 법을 개발하고, 페닐케톤뇨증환아에서 Genomic DNA추출, PCR-RFLP실시,산전 진단의 분자유 전학적 진단법 개발, GCMS을 이용한 유기산 대사 이상증의 진단법을 개발하고, 윌슨씨병과, 당원병의 DNA 진단과 부신피질 과형성 환아의 Genomic DNA의 southern blot, 돌연변이 조사 를 실시하여 정신 박약과 만성질환 등을 예방하여 건강한 삶을 살 수 있도록 하여 국가 경제 적 발전에 큰 도움이 되고자 한다. 1. 한국인 Lesch-Nyhan 증후군 5가계 6명의 환자에서 가계도를 구축하고 피부아세포주를 확립 하였으며 4가계 5명의 환자에서 새로운 돌연변이를 발견하였으며 2가계에서 임신 10주경 융모 막채취시료로서 성공적인 산전진단을 수행하였다. 나머지 한 가계에서는 지속적으로 연구중 이다. 2. Phenyketonuria(PKU) 환아 28명의 연구 결과에서 Y204C가 21.4% (12/56)로서 가장 많은 빈 도를 보였으며, IVS4가 12.5%(7/56) 빈도를 보였고 N207D 5.4% (3/56), Y325X 3.6% (2/56), A3 45T 3.6% (2/56), V388M 3.6% (2/56), R53H 1.8% (1/56), R413P 1.8% (1/56), Y356X 1.8% (1/56), R243Q 1.8% (1/56), T206R 1.8% (1/56), Y204X 1.8% (1/56) 순의 빈도를 보여 Y204C 가 가장 많은 것을 알 수 있었다. 3. 30명의 윌슨씨병 환자들에 대한 분석결과 9개의 새로운 돌연변이를 발견하였으며 8개의 polymorphism을 발견하였다. 특히 Arg778Leu은 약 37.5%의 빈도를 보여 중국인이나 일본인보다 높게 관찰되었다. exon 8의 2304delC의 발견으로 이 지역이 돌연변이가 발생하기 쉬운 지역임 을 확인하였다. 4. 간 조직에서 glucose-6-phosphatase를 측정하여 Glycogen storage disease Ia로 진단된 환자 14명에 대한 염기서열 분석결과 249bp에서 G->A change에 의해 83번째 아미노산인 arginine이 histidine으로 바뀐 돌연변이를 발견한 환자가 1예, exon 5에 존재하는 nt722bp에서 G->T 에 의하여 exon 5에서 91bp를 결손시켜서 alternative splicining을 초래하는 돌연변이를 6례 발 견하였다. 이들은 모두 homozygote로 발견되었다. 이들 6명중 UM39 marker에서 모두 공통적 으로 181bp의 allele을 가지고 있었고, 이중 1명은 181bp allele homozygote였다. 5. 연구 결과 우리나라 환자들에서 active gene의 결실은 전체의 8.6%(6/70), intron 2의 splicing mutation은 27.1%(19/70), exon 4의 Ilel73Asn은 12.8%(9/70), exon 8의 Gln319Stop 돌연변이 는 7.1%(5/70), Arg357Trp이 돌연변이는 4.3%(3/70) 이었고 본 연구에서 아직 세계적으로 보고 된 바 없는 His245Tyr이 exon 6에서 발견되었다. 또한 silent mutation으로 알려져 있는 exon 3의 Arg103Lys 돌연변이는 21.4% (15/70)의 높은 빈도를 보였다.

Abstract ▼

In order to prevent mental retardation and chronic disease, we developed molecular diagn o-stic method includes 1) in Lesch-Nyhan syndrome, extraction of genomic DNA, primer development, SSCP analy sis, direct sequencicing of PCR procuct and PCK-ASO hybridization method were develope d. 2) in PKU, e

In order to prevent mental retardation and chronic disease, we developed molecular diagn o-stic method includes 1) in Lesch-Nyhan syndrome, extraction of genomic DNA, primer development, SSCP analy sis, direct sequencicing of PCR procuct and PCK-ASO hybridization method were develope d. 2) in PKU, extrction of genomic DNA, RFLP-PCR, sequencing of PKU were developed 3) in Wilson's diseaae, glycogen storage disease and congenital adrenal hyperplasia southerk blotting technique and detection of mutation was developed. Ⅳ. Results 1. In this study, four different mutations in the HPRT gene of four probands have been identified in four unrelated families; K215X, Q109X, nt.631 △A, and nt.289 △GT. Two mutations among them altered restriction enzyme sites; SpeI for Q109X and MaeI for nt.289 △GT. 2. Among the Korean PKU, the Y204C mutation was the most prevalent, and the frequency of this mutation was 21.4% of all PKU alleles. The IVS4 mutations was 12.5%, N207D was 5.4%, Y325X, A345T and V388M were 3.6% each. R53H, Y204X, T206R, Y356X, R413P, were 1.8% each. 3. Nine mutations in the copper transporting enzyme, P-type ATPase(ATP7B) were identified in Korean patients with Wilson disease. Arg778Leu, the most frequently reported mutation of this enzyme, showed alleleic frequency of upto 37.5%, which is considerably higher than those in other Asian populations. 4. Nucleotide 722 G->A change mutation which causes alternative splicing was found among six patients among 14 patients (43%). All of six patient patients are nt722G->A homozygotes. Microsatellite analysis indicates the founder effect of this mutation is suggested. New mutation, cDNA 249bp: G->A change was found and caused the change of 83rd amino acid codon from agrinine to histidine. 5. The frequency of each mutation of 21-OH gene in Korean CAH patients were as follows. Active gene deletion was 8.6%, intron 2 splicing mutation was 27.1%, Ilel73Asn was 12.8%, Gln319stop was 7.1% and Arg357Trp was 4.3%. In addition, His245Tyr mutation was identified that was not reported so far in other countries. Frequency of a silent mutation, Arg103 Lys, was 21.4%. In total, 18 different mutations were identified and 10 of them revealed as causes of disease.

목차 Contents

• 목차...8
• 1. 제 1 세부과제...9
• Lesch-Nyhan 증후군의 분자 유전학적 산전 진단 및 치료법 개발...9
• 2. 제 2 세부과제...40
• 페닐케톤뇨증의 분자생물학적 진단...40
• 3. 제 3 세부과제...50
• 한국인 윌슨씨병 환자에서의 유전자 변이에 대한 연구...50
• 4. 제 4 세부과제...59
• 당원병의 진단과 치료법의 개발...59
• 5. 제 5 세부과제...65
• 선천성 부신 과형성 환아에서 21-hydroxylase 유전자 내의 돌연변이...65