초록 ▼

Non-glucosylated(Glu?) T-even phage DNA와 5-methylcytosine을 포함하는 DNA는 wild-type E.coil에 의해 restriction 되는데, 이는 두 유전자, 즉 rglA(mcrA)와 rglB(mcrB)의 작용에 의한다고 알려져 있다. 이 일종의 host-controlled restriction system 은 알려진 지는 오래되었으나 해당하는 단백질이 정제되지 않아서 그 특이성, 역할, 크기등 성질이 거의 밝혀져 있지 않은 상태이다.
본 연구에서는 cloned rglB

Non-glucosylated(Glu?) T-even phage DNA와 5-methylcytosine을 포함하는 DNA는 wild-type E.coil에 의해 restriction 되는데, 이는 두 유전자, 즉 rglA(mcrA)와 rglB(mcrB)의 작용에 의한다고 알려져 있다. 이 일종의 host-controlled restriction system 은 알려진 지는 오래되었으나 해당하는 단백질이 정제되지 않아서 그 특이성, 역할, 크기등 성질이 거의 밝혀져 있지 않은 상태이다.
본 연구에서는 cloned rglB 유전자를 사용하여 T7 RNA polymerase에 의한 특이적 발현, complementation 및 subcloning으로 RglB product의 크기와 유전자의 위치를 결정하였다. 그리고 T7 promoter system에 의하여 대량 생성시킨 후 RglB product를 ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose chromatography, hydroxyapatite chromatography, Qsepharose chromatography의 과정을 거쳐서 부분 정제하였다.

Abstract ▼

Non-glucosylated(Glu?) T-even phage DNA(hydroxymethylated DNA) and methylated DNA are restricted by Rgl system(rglA and rqlB) in Escherichia coli. Although RglA and RglB restriction systems were found about 30 years ago, so far we have not known about the characteristics such as specificity, biologi

Non-glucosylated(Glu?) T-even phage DNA(hydroxymethylated DNA) and methylated DNA are restricted by Rgl system(rglA and rqlB) in Escherichia coli. Although RglA and RglB restriction systems were found about 30 years ago, so far we have not known about the characteristics such as specificity, biological role and size of Rgl product. Rgl products have not been purified.
In this study, the size of RglB product and the location of rglB gene were determined with the specefic expression of the cloned rglB gene by T7 RNA polymerase and complementation. And, RglB product was partially purified through ammonium sulfate fractionation, DEAE cellulose chromatography, hydroxyapatite chromatography, and Q sepharose chromatography after its overproduction by T7 promoter system. Its purity was estimated on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.

목차 Contents

• 1. 서 론...8
• 2. 실험 재료 및 방법...12
• 2.2 실험재료...12
• 2.2 실험 방법...12
• 3. 결과 및 고찰...14
• 3.1 subcloning...14
• 3.2 plasmid pEB26의 제한 효소 지도...14
• 3.3 rglB 유전자의 위치 결정...14
• 3.4 RglB product의 확인 및 크기 결정...15
• 3.5 RglB product의 부분 정제...16
• 3.6 complementation assay...17
• 4. 결 론...19
• 5. 인용문헌...32
• 6. 논문발표 실적 또는 계획...34
• 7. 학위 배출 실적...35