초록 ▼

1. 초기 발생시기별 원시생식 세포의 분리방법 확립
○ 생식선 반월로 부터 원시생식세포 분리
○ 혈관으로부터 원시생식세포 분리
○ 원시생식기로부터 원시생식세포 분리
2. 혈관내 미세 주입법 개발
○ 배발달 과정중 혈관내 미세주입법 개발
3. 체외 배양 시스템 조성
○ 체외 배양시설 환경 조성
○ 수정란 생산 공급 체계 확립
○ 체외 배양액 개발
○ 대리난각 공급을 위한 대량멸균체계 확립
○ 초기배자 물리적 조작의 발생영향 검토
4. 질병저항성 유전자 확

1. 초기 발생시기별 원시생식 세포의 분리방법 확립
○ 생식선 반월로 부터 원시생식세포 분리
○ 혈관으로부터 원시생식세포 분리
○ 원시생식기로부터 원시생식세포 분리
2. 혈관내 미세 주입법 개발
○ 배발달 과정중 혈관내 미세주입법 개발
3. 체외 배양 시스템 조성
○ 체외 배양시설 환경 조성
○ 수정란 생산 공급 체계 확립
○ 체외 배양액 개발
○ 대리난각 공급을 위한 대량멸균체계 확립
○ 초기배자 물리적 조작의 발생영향 검토
4. 질병저항성 유전자 확보
○ PCR에 의한 질병저항성 유전자 클로닝
○ 닭 T-cell cDNA library screening
5. 원시생식세포의 배양조건 확립
○ 최적의 배양액 조성 확립
○ PKH2, PKH26등의 염색에 의한 원시생식세포 분열 확인
○ 생식선 반월, 혈관계, 원시생식기의 원시생식세포별 배양 성적비교
6. 원시생식세포 이용 생식선키메라 생산 체계 확립
○ 수용체에 안정적 주입 기법 확립
○ 후대검정에 의한 키메라율 검증
○ 생식전 키메라 안정적 생산
7. 대리난각 배양법 개발(In vitro culture)에 의한 개체 생산
○ 체외배양법에 의한 개체의 안정적 생산
8. 질병저항성 유전자 검증
○ 질병저항성 유전자의 염기서열 결정
○ 질병저항성 유전자의 역가 측정
9. 원시생식세포 내에 DNA 전이 기술 확립
○ Liposome에 의한 전이
○ Electroporator에 의한 전이
10. 질병저항성 유전자 검증
○ 질병저항성 유전자의 primer 제작
○ Genomic DNA library에서 인터페론, 인터루킨 유전자 screening
○ 인터페론, 인터루킨 유전자 클로닝
○ 인터페론 프로모터, MT 프로모터, SV40 프로모터 등과 발현 벡터 재조합
11. 체외배양 중의 배자에 미세주입법 개발
○ 배자내 미세주입법 개발
12. 재조합된 질병저항성 유전자의 발현검증
○ E. coli로 부터 재조합 인터페론, 인터루킨 정제
○ Cell line으로부터 재조합 인터페론, 인터루킨 생산
13. 질병저항성 유전자 도입 개체 생산 확인
○ Liposome를 이용하여 전이된 원시생식세포 주입 개체 생산
○ Electroporator를 이용하여 전이된 원시생식세포 주입 개체 생산
○ 체외배양법 이용 유전자 도입 개체 확인
○ 원시생식세포를 이용한 질병 저항성 유전자가 전이된 닭 생산
○ 유전자 미세주입 또는 전이 후 형질전환 닭 생산
14. 유전자 도입 개체의 검증 및 확인
○ 질병저항성 유전자의 개체에 대한 질병저항성 검증
○ 발생된 개체에서 유전자 검증(PCR, Southern blotting, Northen blotting)
15. 유전자 도입 개체의 생산 및 개량
○ 질병저항성 유전자 도입 개체 자손생산
○ 질병저항성 유전자 도입 개체 선발

Abstract ▼

In poultry industry, bacterial or viral infection disease has been causing the untold economic losses. However, only vaccine programs and use of antibiotics were treated to prevent these disease. Thus, the cost for curing and preventing the disease imposes a heavy burden on poultry farmers and it ma

In poultry industry, bacterial or viral infection disease has been causing the untold economic losses. However, only vaccine programs and use of antibiotics were treated to prevent these disease. Thus, the cost for curing and preventing the disease imposes a heavy burden on poultry farmers and it makes the national competitiveness weaken. In the near future, using up-to-date technology for improvement and introgression of the economic traits will be inevitable for agriculture. To date, since substantial technologies such as genetic manipulation and management of pluripotent cells have currently much room to be improved in aves, practical application of the transgenic system was still limited. Recently, primordial germ cells have been utilized for inducing germline transmission for avian transgenesis and subsequent finding showed that the embryonic gonad is the most favorable site to collect large number of primordial germ cells. Thus, we intended to establish the efficient production system of germline chimera using primordial germ cells and transgenic chicken carrying disease resistance-related gene for improving immune system.
This research was conducted with three big topics; 1) Cloning of disease resistance-related genes in chicken and characterization by using in vitro and in vivo test, 2) Development of effective production system for germline chimeras usmg primordial germ cells and application of this system to transgenesis in chicken, and 3) Development and optimization of surrogate system for in vitro manipulation of fertilized eggs as follow,

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 요약문...3
• SUMMARY...10
• CONTENTS...13
• 목차...15
• 제 1 장 서론...17
• 제1절 연구 개발의 목적 및 중요성과 범위...17
• 1. 연구 개발의 배경 및 목적...17
• 2. 연구 개발의 목적 및 범위...19
• 제 2 장 질병 저항성 유전자 클로닝 및 특성 분석...25
• 제1절 질병저항성 유전자 클로닝...25
• 1. 비장세포 및 T임파구 세포주로부터 인터페론 감마 (Interferon-γ) 클로닝...25
• 2. 닭의 인터루킨 15 (IL-15) 유전자 클로닝...26
• 제2절 질병저항성 유전자 특성 분석...31
• 1. 질병저항성 유전자 특성 분석...31
• 2. 질병저항성 유전자 발현 단백질 역가 측정...37
• 제3절 닭 질병 저항성 유전자의 in vivo 특성 분석...50
• 1. 질병저항성 유전자의 in vivo 발현 벡터 개발...50
• 2. 질병저항성 유전자의 in vivo 발현 특성 분석...50
• 제 3 장 생식선 카이메라의 효율적 생산에 관한 연구...55
• 제1절 원시생식세포 분리 및 단기 체외 배양...55
• 1. 배발달 단계에 따른 원시생식세포 분리 조건 확립...55
• 2. 수용체 배자로의 미세주입기법 확립...63
• 3. 원시생식세포의 단기 체외 배양 조건 확립...65
• 제2절 원시생식세포내로의 효율적인 유전자 전이...70
• 1. liposome에 의한 전이...70
• 2. 전기충격법 (Electroporator)에 의한 외래 유전자 전이...74
• 3. 전이된 외래 유전자의 발현 양상 검증...75
• 제3절 원시생식세포를 이용한 생식선카이메라 생산...76
• 1. 수용체에 안정적 주입 기법 확립...76
• 2. 원시생식기내 원시생식세포의 이동 능력 검증...81
• 3. 원시생시세포의 미세 주입에 의한 실험 축군 확립...83
• 제4절 형질전환 개체 생산을 위한 연구...89
• 1. 외래 유전자가 도입된 원시생식세포의 이동 및 수용체 배자내 분열 능력 검증...89
• 2. 질병 저항성 유전자 전이 개체 생산...89
• 제 4 장 체외 배양 시스템 개발 및 활용...102
• 제1절 체외 배양 시스템 개발...102
• 1. 체외 배양시 환경 조성...102
• 2. 체외 배양액 개발...103
• 3. 1세포기 수정란 적출 시술법 개발...103
• 4. 대리난각공급을 위한 대량 멸균체제 확립...103
• 제2절 체외 배양 시스템의 최적화...105
• 1. 체외 배양시 환경 조성...105
• 제3절 체외 배양 시스템을 이용한 배자 미세 주입...107
• 1. 체외배양 중의 배자에 미세주입법 개발...107
• 제4절 체외 배양 시스템을 이용한 레트로 바이러스 전이...117
• 1. 체외배양 중의 배자에 레트로 바이러스 전이...117