초록 ▼

1.약효, 약리, 안전성연구
1)약효연구
①1998년 이전까지의 단회 및 7일 반복투여에 의한 단기 기억력 증진효과 검증에 이어 54주간 JES9501을 rat에 경
구투여한 후 passive avoidance test로 평가한 결과 기억력손상 억제 경향
②뇌허혈동물모델에 복강내 1회 및 7일반복투여시 기억력손상 억제 및 해마부위 뇌세포사멸 감소확인
③LTP(Long-term potentiation):rat의 해마 slice를 이용한 검색결과 10μM에서 LTP 유도확인
④노화동물모델과

1.약효, 약리, 안전성연구
1)약효연구
①1998년 이전까지의 단회 및 7일 반복투여에 의한 단기 기억력 증진효과 검증에 이어 54주간 JES9501을 rat에 경
구투여한 후 passive avoidance test로 평가한 결과 기억력손상 억제 경향
②뇌허혈동물모델에 복강내 1회 및 7일반복투여시 기억력손상 억제 및 해마부위 뇌세포사멸 감소확인
③LTP(Long-term potentiation):rat의 해마 slice를 이용한 검색결과 10μM에서 LTP 유도확인
④노화동물모델과 뇌허혈동물모델에서 뇌세포보호효과와 기억력증진효과가 있음을 확인
2)약리기전 연구기존에 밝혀진 AChE 억제, 뇌혈류 증진, APPs 증진 PEP 억제 이외의 약리기전 규명
①아밀로이드베타펩타이드와 glutamate toxicity를 농도의존적으로 억제(rat 뇌세포 이용)
②rat 해마에서의 synaptic transmission에 미치는 효과검색결과 fEPSP가 JES9502 10μM에서 long-lasting
facilitation됨을 확인, 이같은 효과가 muscarinic 또는 NMDA receptor antagonsit에 의해 억제되므로 이들 수용
체들의 long-lasting facilitation이 기억력증진효과 기전중 하나임
3)일반약리 연구
①JES9501 원말의 Rat에서의 일반약리 연구에 이어 토끼에 대한 호흡, 심박수, 심전도 및 혈압에 대한 영향 연구결
과 1mg/kg 이상요량에서 혈압이 약간 떨어지는 경향 있으나 유의성은 없음
②용해도 개선을 한 paste type의 JES9501의 중추신경계에 미치는 영향 검색결과 특이한 부작용 보이지 않음
4)일반독성 연구
①Beagle dog 아급성독성시험: 120, 140, 180, 220 mg/kg 90 일 경구 투여시 무해용량은 120mg/kg 이하로 추정됨
사망례 없었으나 구토 GPT 및 Alk phosphatese 상승 1례에서의 담낭비대 관찰됨
②Beagle dog에서의 장용피정의 급성독성: 10mg/kg - 100mg/kg 경구 증량투여시 역겨운 맛에 의한 거부반응 저하
가능성 확인, 고용량에서 경련, 행동이상, 불안 등 확인
③Rat에서의 용해도 개선 paste type JES9501 의 반복투여독성 : 60, 120. 250mg/kg 90일경구투여시 원말에서의 무
해용량(500mg/kg) 보다 낮은 250mg/kg에서 독성 관찰됨.

2.약동력학 연구
1)Beagle dog에서의 체내동태와 생체이용율(0.5mg/kg IV 및 PO) 2차에 걸친 실험결과 생체내이용율 88.52% CLt
21.29ml/min/kg였음
2)Beagle dog 에서의 원말충진캅셀이 단회 및 반복투여시 생체이용율
①생체이용율: 1, 10, 50mg/kg 투여시 각각 30.5, 18.2, 7.47%
②7일 1일 2회 10mg/kg 반복투여시 생체이용율: 14.0% ⇒용량증가 및 반복투여시 생체이용율 감소경향
3)Autoradiography를 이용한 rat에서의 조직분포 및 태자 이행성C14표지 JES9501(0.106mCi/mg) 꼬리정맥 투여시,
뇌나 태자로의분포는 혈액에 비하여 상대적으로 매우 작음
4)용해도 개선 paste type 제제의 rat에서의 흡수특성0.5, 10mg/kg 경구투여시 CMC 현탁제와 유의성 있는 차이를
나타내지 않아 실제적인제제 개선효과는 나타나지 않음.
5)Beagle dog에서의 JES9051 장용정의 생체내 이행성 평가
①1, 10, 100mg/kg 경구투여시, CMC 현탁제와 유의성 있는 차이를 나타내지 않아 실제적인 제제개선효과는 나타나
지 않음
②10mg/kg 14회 반복투여시(1일 2회 7일간) 실측혈중농도가 simulation 결과대비 감소

3. 대사체 연구 및 뇌로의 이행동태
1)대사체 연구
①Rat에 정맥투여(0.5mg/kg)후 담즙과 뇨 채취하여 회수한 미변화체 총량은 투여량의 5.0±3.3%였으며 주로 뇨로
소실되었다.
②가장 주된 대사체 M1은 JES9501의 hydroxylation 반응후 황산포합체일 것으로 추정
2)뇌로의 이행동태
①투여용량범위(1-10mg/kg)에서 JES9501의 뇌중농도는 혈중농도와 비슷
②약물이 BBB를 수동확산으로 통과함을 시사
③MBEC4 세포배양계 이용 수송연구에서 배양액중의 약물농도에 비례하는 linear kinetics를 따름⇒순환혈에서 뇌,
뇌에서 순환혈로의 이행의 수동확산에 의해 매개됨을 시사

4.유전독성 연구
1)Salmonella typhimurium을 이용한 복귀돌연변이시험
①모든 균주에서 돌연변이원성 나타내지 않음
②5,000㎍/plate에서 세포독성 나타냄
2)CHL세포를 이용한 염색체 이상시험:대사활성계가 존재하거나 존재하지 안을 때 모두 5㎍/ml 및 10㎍/ml 에서
각각 5% 이상 및 10%이상의 염책제이상 빈도
3)마우스 조혈세포를 이용한 소핵시험: 양성대조군 mitomycin의 현저한 소핵 출현빈도 약 20/1000 이상에 비해
3/1000 이하의 현저하게 낮은 수치의 소핵발현빈도
4)Commet Assay: 음성
⇒결과적으로 JES9501은 유전독성을 거의 유발하지 않거나 거의 없는 것으로 판단

5. 생식·발생독성 연구
1)수태능 및 일반생식독성: 수컷은 교배전 60일부터 부검시까지 투여 암컷은 교배 14일전부터 동거기간 교미성립
후 임신 전 기간 및 분만후 이유때까지 투여한 후 관찰하였으며 고용량군에서 태자 사망률이 대조군(2/134)에 비
해 15/71로 현저히 증가
2)최기형성:임신 8일째부터 17일째까지 투여한후 임신 말기인 30일째 부검하여 관찰하였으며 치료용량 이상에서 최
기형성 유발 될 수 있을 것으로 판단
3)주산 및 수유기 시험
①임신 말기에 독성으로 인해 생존율 저하
②이유기간 동안 태아사망과 체중저하 관찰
③이유 후 발육분화 검사 및 감각 운동성 검사에서 이개개전, 치아망출, 안검개열, 모생성, 핫플레이트 로타로드
에 약물이 미치는 영향에 의해 유의한 변화가 관찰되지 않음

6. 유연물질. 강제분해산물 연구
1)JES9501 원료약품중 0.1% 이상 함유된 유연물질은 rutaecarpine으로 동정
2)JES9501은 열에 의해 N-demethylation 되어 rutaecarpine으로 분해 빛에는 비교적 안정, 산성, 중성 수용액에서
도 안정하고 염기성 수성 현탁액에서는 매우 불안정하며 가수분해반응이 주요 분해경로임

Abstract ▼

1. Efficacy mechanism general phamacology and safety study
1)Efficacy study
①Following the study on memory enhancing effects by single and repeated dose of 7 days till 1998,
we orally administered JES9501 for 54 weeks and perform passive avoidance test resulted that there was

1. Efficacy mechanism general phamacology and safety study
1)Efficacy study
①Following the study on memory enhancing effects by single and repeated dose of 7 days till 1998,
we orally administered JES9501 for 54 weeks and perform passive avoidance test resulted that there was
tendency of inhibiting memory-deficiency
②JES9501 has anti-ishemic effects using MCA occlusion model of rats.
③JES9501 induced LTP induction in the study of using hippocampus slices of rats
④Cognitive impairment could be protected by JES9501 in normal aging model of rats.
2)Mechanism
Determination of drug acting mechanism adding to previously revealed mechanism of inhibition of AChE and
PEP increasing cerebral circulation and APPs
①Cytotoxicity induced by amyloid beta peptide or glutamate was inhibited by JES9501 in dose-dependent
manner.
②Application of JES9501(10uM) for 20 or 40 min induced a long-lasting facilitation of fEPSPs and the
long-lasting facilitation was blocked by muscarinic and NMDA receptor antagonist.
3)General pharmacology
①In addition to previous study using rat we studied using rabbit on breathing heart rate
electrocardiography and hear pressure which resulted that there is heart pressure decreasing tendency
with dose above 1mg/kg JES9501
②In the study using dissolution rate-improved paste type JES9501 no special side effect on CNS observed.
4)General toxicity study
①Subacute toxicity in beagle dog: We administered orally 120, 140, 180, 220mg/kg for 90days there is no
toxicity with dose below 120mg/kg. There was no death case but vomiting increase of GPT and Alk.
phosphatase and one case of gall bladder hypertrophy
②Acute toxicity of enteric-coated tablet in beagle dog: We confirmed the possibility of lowering the
rejective reaction caused by nauseous taste by enteric coating.
③In 90 days repeated dose of improved-dissolution rate paste type JES9501 toxicity was observed above
250mg/kg comparing to 500mg/kg in raw material administration of JES9501

2. Pharmacokinetic study
1)PK and bioavailability in Beagle dog(0.5mg/kg IV and PO)After twice experiments on it we determined that
bioavailability is 88.52% and total body clearance is 21.29mg/min/kg.
2)Bioavailability of single and repeated dose of plain capsule in beagle dog
①Bioavailability at single dose: At 1, 10, 50mg/kg dose 30.5, 18.2, 7.47% respectively
②Bioavailability ar repeated dose of 10mg/kg twice a day for 7 days :14%
⇒B/A of plain capsule decreased with increasing dose and by repeated dose
3)Disposition study using whole body autoradiography in the rat
The whole body autoradiograms revealed that the disposition of JES9501 into brain and feturs was less
than that of the other organs.
4)Absorption characteristics of improved-dissolution rate paste type JES9501
The paste was which was orally administered to rat was not sufficient to improve the absorption
characteristics of JES9501 compared with JES9501 suspension.
5)Absorption characteristics of enteric-coated tablet of JES9501 in beagle dog
①The absorption window was observed in the all of dose 1, 10, 100mg/kg
②The measured plasma concentration of 10mg/kg 14 times repeated dose(twice a day 7days) was lower than
simulated data of single dose.

3. Metabolite study and distribution to brain
1)Metabolite study
①When the JES9501 was administered intravenously at the dose of 0.5mg/kg totla cumulative JES9501
excreted in the urine(primary excretion pathway for the unchanged form) and the bile was approximately
5.0±3.3% of the dose.
②The major metabolite M1 is presumed to be made by firstly hydroxylated at the indole ring and sulfate
conjugated
2)Disposition to brain
①The temporal profiles of JES9501 concentration in the brain was comparable to that in the plasma in the
dose rangel of 1-10mg/kg
②and it indicate that the drug was crossed the BBB by the passive diffusion system.
③The result of the further study on the mechanism of transport kinetics across the BBB using MBEC4 cells
indicates that brain distribution from the systemic circulation and systemic re-distribution from the
brain was mediated by the passive diffusion in vivo.

4. Genotoxicity
1)Salmonella mutagenicity test
①There is no mutagenecity in all the tested micro-organisms
②Positive mutagenicity only at >5,000 ㎍/plate
2)Chromosome damage test : positive chromosome abberations at>10㎍/ml
3)Micronucleus test: Low micronuleus manifestation(2/1000) comparing to 20/1000 of positive control
mitomycin.
4)Commet Assay: No genotoxicity was observed in comet assay

5. Teratogenicity and reproductive toxicity
1)Teratogenicity: Positie response was suggested at over the therapeutic dose.
2)General reproductive toxicity: Incidences of absorption dams were observed by 23.9% and 85.1% at 100
mg/kg and 200mg/kg respectively. Decrease in mating rate was observed by 40% only at 200mg/kg and weight
loss of fetus was shown by 57.5% only at 100 mg/kg. Fetus death rate significantly increased by 15/71
compared to control 1/134 in fertility test.

6. Impurities stressed degradants of JES9501
1)The related impurities of JES9501 was elucidated to be retaecarpine 14N-demethylated compound of JES9501
by MS and NMR spectroscopies.
2)The stressed degradation of DHED was investigated after exposure to heats lights and storage in buffer
solutions of various pH. Degradation of DHED after heat exposure involved 14N-demethylation. Degradation
of DHED in alkaline buffer was extensive and involved hydrolysis of more than two pathways as determined
by LC-ESI-MS

목차 Contents

• 총괄연구개발과제 연구결과...8
• 1.총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...8
• 2.총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...8
• 3.총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...15
• 4.총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...18
• 5.총괄연구개발과제의 활용계획...23
• 6.첨부서류...23
• 제1세부연구개발과제 연구결과...80
• 1.제1세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...82
• 2.제1세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...83
• 3.제1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...102
• 4.제1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...174
• 5.제1세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...181
• 6.제1세부연구개발과제의 활용계획...184
• 7.참고문헌...184