초록 ▼

본 연구에서는 도베실레이트칼슘(독시움정, 일성신약)의 생체이용률시험을 통하여 동 제제의 표준 생물학적동등성시험의 지침을 제시하는 것을 목적으로 하였으며 이를 통해 생물학적동등성시험의 활성화 및 약효동등성시험 관리의 효율화에 기여하고자 한다. 제 1 세부기관, 제 2 세부기관 및 제 3 세부기관의 세부기관 별로 각각 도베실레이트칼슘 표준 분석법을 확립하였다. 1차 시험으로 제 1 세부기관에서 건강한 성인 8인을 모집하여 생물학적동등성시험 방법에 따라 대조약인 일성신약의 독시움정(도베실레이트 250 mg)을 경구로 투여한 다음, 취한

본 연구에서는 도베실레이트칼슘(독시움정, 일성신약)의 생체이용률시험을 통하여 동 제제의 표준 생물학적동등성시험의 지침을 제시하는 것을 목적으로 하였으며 이를 통해 생물학적동등성시험의 활성화 및 약효동등성시험 관리의 효율화에 기여하고자 한다. 제 1 세부기관, 제 2 세부기관 및 제 3 세부기관의 세부기관 별로 각각 도베실레이트칼슘 표준 분석법을 확립하였다. 1차 시험으로 제 1 세부기관에서 건강한 성인 8인을 모집하여 생물학적동등성시험 방법에 따라 대조약인 일성신약의 독시움정(도베실레이트 250 mg)을 경구로 투여한 다음, 취한 혈청시료로부터 분석법을 확인하고 채혈시간 등 생물학적동등성시험의 세부사항을 검토하였다. 2차 및 3차 시험을 제 2 세부기관 및 제 3세부기관에서 순차적으로 진행하여 분석법 및 채혈시간 등 생물학적동등성시험의 세부사항을 재검토하였다. 최종적으로 이를 종합하여 도베실레이트 제제의 생물학적동등성시험의 표준지침을 작성하였다. 다음의 HPLC 분석조건, 즉, 컬럼 (RP-8 column, particle size 5㎛)), 이동상 (Acetonitrile:$KH_{2}PO_{4}$ (pH adjusted 4.0 with phosphoric acid) = 7:93 (v/v %)), 유속 (1.0 ml/min), 자외선검출기 (305nm)에서 도베실레이트칼슘을 분석하였다. 혈청 0.5 mL에 내부표준물질로 2,5-Dihydroxybenzoic acid (1mg/mL in methanol)의 용액 5 uL를 가하여 1분간 vortexing 하여 시료로 한다. 각 시료에 메탄올 1.0 mL를 가하고 3분간 vortex하여 제단백시킨후 4,000 rpm에서 15분간 원심분리한다. 위층의 액을 모두 취하여 13,000rpm에서 5분간 다시 원심분리한 후 위층액을 여과하였다 (0.2 μm syringe filter). $N_2$ gas하에 건조한 후, 잔류물에 phosphate buffer (pH 4.0) 200 μL를 가하여 vortex하여 용해하였다. 이 액 20 μL를 이용하여 HPLC로 분석하였다
상기의 분석조건으로 제 1 세부, 제 2 세부 및 제 3 세부 기관 모두에서 순차적으로 분석법을 검증한 결과, 모두 특이성 및 직선성이 양호하게 판명되었으며, 또한, 일내 및 일간 정밀성 및 정확성이 모두 규정 조건을 만족시켰다. 정량한계농도를 1 ug/mL로 결정하였다. 이로부터 혈청(장) 중 도베실레이트칼슘에 대한 본 HPLC분석법은 인체에 대한 생체이용률 시험에 이용될 수 있는 충분한 감도, 특이성, 직선성, 정확성 및 정밀성을 갖고 있음을 알 수 있었다. 절식상태 건강한 한국인 성인 남성 24명(세 세부기관 합계)을 대상으로 한 도베실레이트 제제 500 mg 일회 경구투여 시험 결과, 최종상 반감기($t_{1/2}$)는 3.47±1.09 시간, 최고혈청중 농도($C_{max}$)는 13.39±4.40 ug/ml, 최고혈청중 농도 도달시간($t_{max}$)은 4.17±1.09 시간으로 나타났다. 한편, $AUC_{t}$은 72.22±24.92 을 나타내었다. 따라서 채혈시간은 14시간까지로 하는 것이 타당하다고 생각된다. 또한, $T_{max}$는 4.17시간의 값으로, 초기 채혈시간을 0.5, 1, 2 시간으로 설정하여도 최고혈중농도 도달전 적어도 2포인트 이상 채혈할 것이라는 생물학적동등성시험 기준을 만족하는 것으로 평가되었다.

Abstract ▼

The purpose of the present study was to propose a guideline of the bioequivalence test of dobesilate calcium tablet on the basis of the bioequivalence criteria of the Korea Food and Drug Administration. For this purpose, a simple, specific and sensitive HPLC assay method using UV detection (305nm) f

The purpose of the present study was to propose a guideline of the bioequivalence test of dobesilate calcium tablet on the basis of the bioequivalence criteria of the Korea Food and Drug Administration. For this purpose, a simple, specific and sensitive HPLC assay method using UV detection (305nm) for dobesilate calcium in serum was evaluated and validated. The compound was separated on an C-8 reversed-phase HPLC column with a mobile phase of Acetonitrile:$KH_2PO_4$ (pH adjusted 4.0 with phosphoric acid) = 7:93 (v/v %). 2,5-Dihydroxybenzoic acid 5 μL(1mg/mL in methanol) was added as an internal standard to an aliquot of human serum (0.5 mL). After the addition of 1 ml of methanol, each sample was vortex mixed for 1 min and centrifuged at 4,000rpm for 15 min. The organic portion was separated, then centrifuged one more time at 13,000 rpm for 5 minutes. The supernatant was filtered through 0.2 um filter and was evaporated under nitrogen gas. The residue was reconstited in 200 uL of phosphate buffer (pH 4.0), an aliquot (20 uL) was injected into the HPLC system. The HPLC assay is linear over the usable concentration range (1-20 ng/ml) and it provides good validation data for both intra-day and inter-day accuracy and precision. The coefficients of variation for all criteria of validation were less than 20% in the quantitation limit (1 ug/mL) and less than 15% in the other concentration ranges. A bioavailability study of the Doxium Tablet ${\circledR}$ (250 mg), a formulation of dobesilate calcium, was conducted. Twenty four healthy Korean subjects were received each formulation at the dose of 500 mg of dobesilate calcium. AUC was calculated by the linear trapezoidal method. Cmax and tmax were compiled from the serum drug concentration-time data.
The half life value (t1/2), Cmax, tmax and AUCt were calculated to be 3.47±1.09hr, 13.39±4.40 ug/ml, 4.17±1.09hr and 72.22±24.9258 ug?hr/ml, respectively. In conclusion, the methods proposed in the present study was, therefore, considered to be suitable for the assay of dobesilate calcium in serum samples. Moreover, the guideline proposed in the present study is able to be used for the bioequivalence test of dobesilate calcium tablet in the near future.

목차 Contents

• 최종보고서 ...1
• 표지 ...2
• 목차 ...4
• 제출문 ...5
• 요약문 ...6
• Project Summary ...7
• 제1장 서론 ...8
• 1. 연구목적 및 필요성 ...8
• 2. 연구내용 및 방법 ...8
• 제2장 국내.외 기술개발 현황 ...9
• 1. 국내외 연구동향(연구배경) ...9
• 2. 연구결과에 대한 기여도, 기대효과 및 활용방안 ...9
• 3. 공동연구로 수행해야 할 필요성 ...9
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...10
• 1. 분석법 확립 결과 (validation 포함) ...10
• 2. 생체이용률시험 결과 ...11
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외 기여도 ...12
• 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ...12
• 가. 계량적 성과 ...12
• 나. 성과내용기술 ...12
• 다. 활용계획 ...12
• 제6장 기타 중요변경 사항 ...12
• 제7장 생물학적동등성시험 표준지침(안) ...13
• 가. 서론 ...13
• 나. 생물학적동등성시험 ...14
• 다. 참고문헌 ...18
• 제8장 참고문헌 ...19
• 제1세부과제 결과보고서 ...20
• 목차 ...21
• 1. 시험 제목 ...23
• 2. 시험 목적 ...23
• 3. 시험 결과의 요약 ...23
• 4. 시험약 ...24
• 1) 성분 및 함량 ...24
• 2) 명칭 ...24
• 3) 제형 ...24
• 4) 용법 및 용량 ...24
• 5. 시험기관 ...24
• 6. 시험책임자 및 담당자 ...24
• 6.1. 시험책임자 ...24
• 6.2. 시험담당자 ...24
• 7. 시험약의 관리 ...25
• 8. 피험자의 선정 및 방법 ...25
• 1) 지원자 모집 및 동의 방법 ...25
• 2) 건강검진 ...25
• 3) 피험자의 선정 ...25
• 4) 최종 선정된 피험자 ...26
• 9. 시험방법 ...29
• 1) 투약량 및 투약방법 ...29
• 2) 피험자관리 : 투약 12시간 전부터 채혈종료 시까지 관리 ...29
• 3) 채혈장소 및 인원 ...29
• 4) 채혈 시 감염방지 대책 ...29
• 5) 채혈 : 채혈시간 및 횟수, 휴약기간 ...29
• 10. 분석방법 : 분석대상 설정, 분석방법, 분석법 검증 ...30
• 1) 분석대상 ...30
• 2) HPLC 분석조건 ...30
• 3) 검량선 작성 ...31
• 4) 분석법 검증 ...31
• 5) 혈장시료의 처리 ...32
• 6) 혈중농도계산 ...32
• 11. 시험 결과 ...33
• 1) 분석 조건의 확립 ...33
• 2) 각 피험자의 시간에 따른 혈청중 도베실레이트칼슘의 농도 추이 ...37
• 3) 생체이용률 파라미터의 산출 ...41
• 12. 결론 ...42
• 13. 참고 문헌 ...43
• 제2세부과제 결과보고서 ...44
• 목차 ...45
• 1. 시험제목과 시험목적 ...47
• 1.1. 시험제목 ...47
• 1.2. 시험목적 ...47
• 1.3. 시험결과의 요약 ...47
• 2. 대조약의 성분명, 명칭, 제형, 제조일자, 제조번호 ...48
• 3. 시험책임자 및 담당자 성명, 소속 및 직책 ...48
• 3.1. 시험책임자 ...48
• 3.2. 시험담당자 ...48
• 4. 예비시험 ...48
• 5. 피험자 선정기준 및 방법 ...48
• 5-1. 지원자 모집 ...48
• 5-2. 건강검진 ...48
• 5-3. 선정기준 ...49
• 5-4. 지원자 동의 방법 ...49
• 6. 시험대상 예수 및 시험대상군 분류 ...49
• 7. 시험방법 ...49
• 7-1. 시험 전날 피험자 관리 ...49
• 7-2. 시험 당일 ...50
• 8. 채혈인 경우 감염방지 대책 ...50
• 9. 검체처리 및 분석방법 ...50
• 9-1. 분석대상 ...50
• 9-2. 주요기기 및 장치 ...50
• 9-3. 분석기기 조건 ...50
• 9-4. 검량선 작성 ...51
• 9-5. 혈청 시료의 처리 ...51
• 9-6. 혈중농도계산 ...51
• 10. 시혐결과 및 validation 자료 ...51
• 10-1. 분석조건의 검증 ...51
• 10-2. 각 피험자의 시간에 따른 혈청 중 도베실레이트칼슘의 농도 추이 ...57
• 10-3. 생체이용률 파라메타의 산출 ...62
• 10-4. 시험의 신뢰성 보증 ...63
• 제3세부과제 결과보고서 ...64
• 목차 ...65
• 1. 시험제목, 시험 목적 및 시험결과의 요약 ...67
• 1.1. 시험제목 ...67
• 1.2. 시험목적 ...67
• 1.3. 시험결과의 요약 ...67
• 2. 대조약의 성분명 및 명칭, 제형, 함량, 제조일자, 제조번호 ...68
• 3. 시험책임자 및 담장자 성명, 소속 및 직책 ...68
• 3.1. 시험책임자 ...68
• 3.2. 시험담당자 ...68
• 4. 예비시험 ...68
• 5. 피험자 선정기준 및 방법 ...69
• 5.1. 지원자 모집 ...69
• 5.2. 건강검진 ...69
• 5.3. 선정기준 ...70
• 5.4. 지원자 동의방법 ...70
• 6. 시험대상 예수 ...70
• 7. 시험방법 ...71
• 7.1. 시험전날 피험자의 관리 ...72
• 7.2. 시험일 피험자의 관리 (2003년 9월 21일 - 9월 22일) ...72
• 8. 채혈인 경우 감염방지대책 ...73
• 9. 검체처리 및 분석방법 ...74
• 9.1. 분석대상 ...74
• 9.2. 주요기기 및 장치 ...74
• 9.3. 분석기기(HPLC)의 조건 ...74
• 9.4. 검량선 작성 ...74
• 9.5. 혈청 시료의 처리 ...74
• 9.6. 혈청 중 농도계산 ...74
• 10. 시험결과 및 validation 자료 ...76
• 10.1. 분석조건의 검증 ...76
• 10.2. 각 피험자의 시간에 따른 혈청중 도베실레이트칼슘의 농도추이 ...79
• 10.3. 생체이용률 파라미터의 산출 ...85
• 10.4. 시험결과에 대한 종합 의견 ...86
• 11. 시험의 신뢰성 보증 ...87
• 연구과제요약 ...88
• 총괄 연구과제 요약 ...89
• 세부 연구과제 요약 (제1세부) ...91
• 세부 연구과제 요약 (제2세부) ...93
• 세부 연구과제 요약 (제3세부) ...95