초록 ▼

백신은 바이러스성 질병의 예방 수단으로 널리 사용되고 있으나 종종 오염된 물질에 의한 부작용이 보고되는 등의 문제점이 있어 백신에 오염되어 있을지도 모르는 유해 바이러스의 검출법 표준화가 시급하다. 본연구에서는 수두, 소아마비, 풍진, 홍역 등의 백신을 생산하는 MRC-5와 Vero 세포주에 오염될 가능성이 있는 adenovirus를 검출하는 방법을 조사하였다. Adenovirus는 호흡기 질환 및 장염의 원인체이며 일부 동물에서 종양을 유발하는 것으로 알려져 있다. 민감도가 높은 adenovirus 오염 검출 법을 확립하기 위하여

백신은 바이러스성 질병의 예방 수단으로 널리 사용되고 있으나 종종 오염된 물질에 의한 부작용이 보고되는 등의 문제점이 있어 백신에 오염되어 있을지도 모르는 유해 바이러스의 검출법 표준화가 시급하다. 본연구에서는 수두, 소아마비, 풍진, 홍역 등의 백신을 생산하는 MRC-5와 Vero 세포주에 오염될 가능성이 있는 adenovirus를 검출하는 방법을 조사하였다. Adenovirus는 호흡기 질환 및 장염의 원인체이며 일부 동물에서 종양을 유발하는 것으로 알려져 있다. 민감도가 높은 adenovirus 오염 검출 법을 확립하기 위하여 CsCl density gradient 방법으로 정제한 adenovirus와 이로부터 추출한 바이러스 DNA를 사용해 Western blot analysis, PCR-ELISA 방법을 비교하였다. Western blot은 3.2ng의 adenovirus를, PCR 방법은 20 pg의 adenovirus와 027 pg의 agadenovirus DNA를 PCR-ELISA 방법은 2.7 fg의 adenovirus DNA를 검출할 수 있어 PCR-ELISA방법이 가장 높은 민감도를 보였다. 50여종의 adenovirus 혈청형을 모두 검출 할 수 있는 것으로 보고 된 시발체(universal primer)를 사용하여 adenovirus type 1, 5, 40(41)과 MRC-5, Vero, Sf9, CHO, Chang 세포주를 대상으로 PCR을 수행한 결과 사용된 시발체의 특이도가 높음을 확인하였다. 백신 생산과정에서 사용되는 세포 배양배지와 국내에서 접종되고 있는 백신을 대상으로 PCR과 PCR-ElISA를 시행한 결과 adenovirus는 검출되지 않았으나 동일 시료에 정제된 바이러스나 바이러스 DNA를 첨가하여 PCR과 PCR-ELISA를 수행하였을 때는 adenovirus가 검출되었다. 이상의 연구에서 개발된 방법은 여러 종류의 백신을 생산하는 세포주와 생산과정에서 오염될 가능성이 있는 adenovirus를 높은 특이도와 민감도로 검출할 수 있는 표준 시험법으로 사용할 수 있음을 의미한다.

Abstract ▼

Although vaccines have been widely used as an effective way of preventing infectious disease in worldwide, they caused serious side effects quite often due to the contamination of biologically hazardous materials. Therefore, it is urgent to establish standard method to detect potentially contaminate

Although vaccines have been widely used as an effective way of preventing infectious disease in worldwide, they caused serious side effects quite often due to the contamination of biologically hazardous materials. Therefore, it is urgent to establish standard method to detect potentially contaminated viral materials from the vaccines clinically used ill Korea. Effective way of detecting adenovirus from MRC-5 and Vero cell lines that have been used for the production of chicken pox, polio, measles, mumps, and rubella vaccines has been investigated Adenovirus has been considered as an agent for causing respiratory disease and gastroenteritis, and also reported to induce tumor in certain animals. In order to develope sensitive diagnostic methods to detect contaminated adenovirus, comparative studies among Western blot analysis, PCR, and PCR-ELISA were performed by using CsCl density gradient purified adenovirus and DNA extracted from the purified virus. PCR-ELISA was the most sensitive method by detecting 2.7 fg of adenovirus DNA followed by PCR detecting 20 pg of adenovirus and 270 fg of adenovirus DNA and Western blot analysis could detect 3.2 ng of adenovirus. PCR study, performed to determine adenovirus specificity of the universal primer pair : that could amplify most of the adenovirus serotype, by using adenovirus type 1, 5, 40(41), and MRC-5, Vero, Sf9, CHO, Chang cell lines as template DNA, indicated that the primer was specific to adenovirus. Adenovirus DNA was not detected in the materials used for the cell culture and chicken pox, polio, measles, mumps, and rubella vaccines presently used in clinic, while the viral DNA was detected in equivalent samples spiked with purified adenovirus or adenoviral DNA These results suggested that PCR-ELISA method developed by this study could be applied for detection of adenovirus and adenoviral DNA contaminated in vaccines and vaccine production materials.

목차 Contents

• 용역연구개발사업최종보고서...1
• 표지...2
• 제출문...3
• 연구사업 최종보고서 요약문...4
• Project Summary ...5
• 목차...6
• 제1장 서론...7
• 제2장 국내.외 기술개발 현황...11
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...12
• 제1절 Adenovirus 배양 및 정제...12
• 제2절 Western blot analysis...13
• 제3절 Polymerase chain reaction (PCR) 조건 확립...14
• 제4절 Polymerase chain reaction enzyme linked immunosorbentassay (PCR-ELISA)...17
• 제5절 백신 생산 물질 및 백신에의 적용...20
• 제4장 연구 개발 목표 달성도 및 대외 기여도...30
• 제5장 연구 개발 결과의 활용 성과 및 계획...31
• 제6장 기타 중요 변경 사항...31
• 제7장 참고 문헌...32
• 총괄 연구과제 요약...33