보고서 정보
주관연구기관 |
충북보건과학대학교 산학협력단 |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2013-11 |
과제시작연도 |
2013 |
주관부처 |
식품의약품안전평가원 National Institute of Food and Drug Safety Evaluation |
등록번호 |
TRKO201400011626 |
과제고유번호 |
1475007206 |
사업명 |
의약품 등 안전관리 |
DB 구축일자 |
2014-07-26
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키워드 |
유전자치료제.재조합 아데노바이러스.안전성 평가시험.gene therapy.recombinant adenovirus.biosafety testing.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201400011626 |
초록
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본 과제의 최종 목표는 유전자치료제 개발 시 가장 많이 사용되는 재조합 아데노바이러스(rAd)의 생산세포주(MCB, WCB) 및 마스터 세포주로부터 최종제품까지의 안전성 평가지표를 제시하고 품질평가 시험법을 확립하는 것임. 안전성 평가를 위한 시험항목은 ICH, FDA, EP 등 국제기준에 따라 선정하였고, 시험방법개발, 시험법 밸리데이션 및 SOP 구축까지 완료하였음. 또한 확립된 시험법은 글로벌급 다국적 CRO방법 및 수준과 비교하여 본 과제팀 연구결과의 우수성을 확인하였음.
1차년도 연구개발 내용은 rAd 벡터 제조용 사
본 과제의 최종 목표는 유전자치료제 개발 시 가장 많이 사용되는 재조합 아데노바이러스(rAd)의 생산세포주(MCB, WCB) 및 마스터 세포주로부터 최종제품까지의 안전성 평가지표를 제시하고 품질평가 시험법을 확립하는 것임. 안전성 평가를 위한 시험항목은 ICH, FDA, EP 등 국제기준에 따라 선정하였고, 시험방법개발, 시험법 밸리데이션 및 SOP 구축까지 완료하였음. 또한 확립된 시험법은 글로벌급 다국적 CRO방법 및 수준과 비교하여 본 과제팀 연구결과의 우수성을 확인하였음.
1차년도 연구개발 내용은 rAd 벡터 제조용 사람유래 마스터 생산세포주의 안전성 평가 시험법을 확립하고자,① EP, FDA 및 ICH 등 외국 공정서 자료를 비교분석하여 생산세포주의 안전성평가지표항목의 선정기준으로 하였고, ② 사람 유래 virus (HIV1, HIV2, HTLV1, 2 provirus, HAV, HBV, HCV 등) 오염의 qRT-PCR 검출법 확립, 검증 및 SOP 확립, ③ 세포 유래 virus (Simian Spumavirus, Retrovirus, Proviral SIV 등) 오염의 qRT-PCR 검출법 확립, 검증 및 SOP 확립, ④ 일반적인 외래성 바이러스 오염 검출을 위한 in vitro 시험법 확립, 검증 및 SOP 확립을 완료함.
1차년도 연구방법과 결과는, ① Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR)을 통한 외래성바이러스의 검출시험방법을 통해 100~1,000 분자수를 검출할 수 있었고, ② Detection of Reverse Transcriptase Activity by FPERT Assay (Retrovirus 검출) 검출방법으로는 AMV-RT의 103 pU까지 검출하는 민감도를 확립하였고, ③ Detection of Adventitious Virus Contaminants by In Vitro Assays 시험방법은 국제기준에 적합한 방법으로 개발완료 하였음.
2차년도 연구개발 내용은 rAd 바이러스 벡터의 제조 공정 중 마스터 세포주로 부터 최종 제품까지의 안전성 평가 시험법을 확립하고자, ① 외국 CROs 의 안전성평가 시험 관련 자료를 비교분석하여 rAd 벡터 제조공정 중 바이러스 안전성 평가 지표항목을 설정하였고, ② 생산공정 물질유래 bovine virus, porcine virus 및 AAV 오염 분석을 위한 시험법 개발, 검증 및 SOP 확립, ③ 제조공정에 기인한 오염물질(잔류 DNA 및 단백질 등) 검출 시험법 개발, 검증 및 SOP 확립, ④ Replication competent adenovirus(RCA) 검출 시험법 개발, 검증 및 SOP 확립을 완료함.
2차년도 연구방법과 결과는, ① In vitro assay for the presence of bovine or porcine viruses 검출방법은 FDA 9CFR113, ICH5A, CHMP 등 기준에 따라 적합하게 개발되었고, ② Detection for the presence of Adeno-associated viruses in Adenovirus stock 시험법은 1,000 분자수를 검출할 수 있는 민감도로 개발하였고, ③ Detection and quantification of residual 293 DNA or residual 293 protein in biological samples 오염분석법은 5 pg DNA/dose 혹은 25 ng/mL host protein을 검출하는 민감도로 개발되었고, ④ RCA 오염분석방법은 1 NIU/3 x 1010 vp 까지 검출할 수 있는 시험법으로 개발 완료함, ⑤ 개발된 시험법은 시험법 밸리데이션을 통한 검증 후 SOP로 확립되었음.
1, 2차년도에 개발한 시험법은 글로벌급 다국적 CRO의 방법과 비교하였고, 민감도 및 적합성을 비교분석하여 개발된 방법의 우수성을 확인하였음.
본 과제의 중요한 기대효과는 그동안 유전자치료제의 임상시험용 의약품은 거의 전부 해외에서 제조하여 품질평가시험도 모두 해외 CROs에게 위탁하였는데, 본 과제를 통한 시험법 확립으로 국내에서도 글로벌 수준의 품질평가시험의 수행이 가능하고 이러한 결과는 임상시험 비용절감, 수입대체효과 및 신약개발 활성화를 통한 세계신약시장 진입을 촉진하는 막대한 효과가 있음.
Abstract
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The project aims were to develop biosafety testing protocols of human-derived and cell line-derived adventitious virus in rAd production cell lines and rAd vectors and to determine degree of impurities such as DNA and proteins derived from host cell lines and RCA in rAd vectors, which were followed
The project aims were to develop biosafety testing protocols of human-derived and cell line-derived adventitious virus in rAd production cell lines and rAd vectors and to determine degree of impurities such as DNA and proteins derived from host cell lines and RCA in rAd vectors, which were followed by analytical method validation processes and finally to establish SOP corresponding to each biosafety testing protocol. Based on ICH, FDA and EP guidelines, all biosafety testing items were determined and all results of testing protocols and SOPs were compared and evaluated with those of several Global CROs.
The first year of this study was to develop biosafety testing protocols followed by analytical method validation and to establish SOP corresponding to each testing protocol. We studied EP, FDA and ICH to determine biosafety testing items for rAd production cell line and developed assay protocols to quantify human-derived (HIV1, HIV2, HTLV1, 2 provirus, HAV, HBV and HCV) and cell lines-derived (Simian Spumavirus, Retrovirus and Proviral SIV) viral contamination by a quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR) or an FPERT. We were able to detect 100~1,000 genome copies of viral contaminants. We also established in vitro adventitious virus assay protocols and SOP.
The second year of this study was to determine biosafety testing items according to those of global CROs, After we selected testing items, we developed in vitro assay protocols to detect bovine-derived and porcine-derived virus according to FDA 9CFR113, ICH5A and CHMP. We established the assay protocol to detect RCA in rAd vectors by a sensitivity of 1 NIU/3 x 1010 vp. We also developed qPCR method to evaluate AAV contaminants by a sensitivity of 1,000 genome copies and impurities of residual host DNA by a sensitivity of 5 pg DNA/dose. We then established ELISA protocols to measure impurities of host proteins in rAd vectors by a sensitivity of 25 ng/mL. All testing protocols were validated to generate SOPs using an analytical method validation process.
All biosafety testing protocols and SOPs were equally appropriate and as sensitive as those of global CROs..
The biosafety testing protocols and SOPs established by the Biopharmaceutical R&D Center at Chungbuk Health & Science University can be employed by Korean local CROs to replace services from foreign global CROs, which activates developments of gene therapeutic medicines for global new drug market.
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 용역연구개발과제 최종보고서 ... 2
- 제 출 문 ... 3
- 목차 ... 4
- Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
- 국문요약문 ... 6
- Summary ... 8
- Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
- 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
- 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 40
- 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 48
- 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 170
- 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 172
- 제6장 총괄참고문헌 ... 172
- 제7장 총괄첨부서류 ... 174
- 끝페이지 ... 201
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