초록 ▼

◆ 연구목적
우리나라에서 전혀 보고가 없었던 Spotted fever group 리케치아즐 분리ㆍ동정하고 분포 및 전파경로와 균종과 매개진드기와의 관계를 밝히고자 한다. 또한 국내 분리 균주의 균종을 결정하며 국내 균주들에 찾는 새로운 진단법을 개발하고자 한다
◆ 연구방법 및 결과
우리나라에서는 그동안 현재 리케치아 질환 중, 쭈쭈가무시병, 발진열 발진티푸스만 보고되고 있었다. 그러나 본 실험실에 의하여 1990년부터 1994년 사이에 수집한 5.803개의 급성 열성질환 환자의 혈청으로 Orientia tsutsug

◆ 연구목적
우리나라에서 전혀 보고가 없었던 Spotted fever group 리케치아즐 분리ㆍ동정하고 분포 및 전파경로와 균종과 매개진드기와의 관계를 밝히고자 한다. 또한 국내 분리 균주의 균종을 결정하며 국내 균주들에 찾는 새로운 진단법을 개발하고자 한다
◆ 연구방법 및 결과
우리나라에서는 그동안 현재 리케치아 질환 중, 쭈쭈가무시병, 발진열 발진티푸스만 보고되고 있었다. 그러나 본 실험실에 의하여 1990년부터 1994년 사이에 수집한 5.803개의 급성 열성질환 환자의 혈청으로 Orientia tsutsugamushi 외의 8가지 Rickettsia과에 속하는 균들의 항체보유율 조사 결과 균종에 따라 11.1% (R. typhi)에서 6.3% (R. japonica)의 높은 항체 양성율을 보였고, spotted fever group에 속하는 리케치아들이 중국 일본, 러시아 등 아시아 전역에서도 보고되고 있어 국내 발생보고가 없었던 여러 리켓치아 질환이 우리나라에도 존재할 가능성이 높았다. 따라서 본 연구의 목표대로 진드기에서 Chromosomal DNA를 분리하여 16S rRNA, gltA 유전자를 이용하여 그동안 우리나라에서 보고되지 않았던 쭈쭈가무시병, 발진열, 발진티푸스 이외의 리케치아, 즉 spotted fever group의 리케치아가 우리나라에도 존재함을 증명하였다.
리케치아 진단은 혈청학적 진단이 가장 많이 쓰인다. 그거나 다른 박테리아와의 교차 반응으로 위양성 반응이 많고, spotted fever group의 리케치아 균종을 구분할 수 없는 단점이 있다. 따라서, 16S rRNA 염기서열을 이용하는 방법을 많이 사용하지만, 이 방법은 염기서열이 너무 유사해, 균종 구분은 되지만 같은 균종내 구분에는 적합하지 않아 citrate synthase (gltA)와 rOmpA (ompA) coding gene의 염기서열을 이용하는 방법들을 많이 사용하고 있다 하지만 ompA gene의 염기서열을 이용하는 방법은 동정에 아주 유용하나, R. akari, R. australis, R. helvetica, R. bellii, R. canada, R. typhi, R. prowazekii의 동정에는 사용할 수 없다 따라서 이 7가지 균종은 gitA gene의 염기서열을 이용하는 방범을 따로 사용해야 하는 번거로움이 있었다.
본 연각에서는 groEL 유진자가 기존에 많이 사용하고 있는 16S rRNA. gitA, ompA 유전자를 이용한 진단법들의 단점을 보완하는 Rickettsia의 새로운 동정지표로써 유용함을 보여주었고 groEL 유전자 염기서열을 분석하여 국내균주 특성을 파악하여 groEL 유전자가 Rickettsia의 새로운 동정지표로써 유용함을 다시 한번 증명하였다. 또한 groEL 유전자 특성을 알아보기 위해 16S rRNA 유전자 scquence similarity와 비교해 보았는데, groEL 유전자가 16S rRNA 유전자에 비하여 다양성이 큼을 알 수 있었다. 이러한 특성을 이용하여 목표대로 species-specific PCR, multiplex PCR, PCR-RFLP법. nested PCR법 등의 진단법을 성공적으로 개발하였다.

Abstract ▼

Our objective was to develop new differentiation method that completes the 16S rRNA, gltA, and ompA gene sequence analysis, which are generally used in the differentiation of rickettsiase, Also our objective was to prove the existence of the spotted fever group (SFG) rickettsiae in Korea.
The tri

Our objective was to develop new differentiation method that completes the 16S rRNA, gltA, and ompA gene sequence analysis, which are generally used in the differentiation of rickettsiase, Also our objective was to prove the existence of the spotted fever group (SFG) rickettsiae in Korea.
The tribe rickettsieae, obligate intracellular bacteria, IS considered to consist of three groups. These are the typhus group (TG), which are R. typhi and R. prowazekii; the spotted fever group (SFG), which includes about 20 different species; the scrub typhus group (STG), which includes R. tsutsugamushi to be transferred into the new genus Orientia. Scrub typhus is one of the most prevalent febrile illnesses in Korea. It accounts for up 30% of all febrile episodes m Korea. R. typhi and R. prowazekii have also been isolated in Korea though there has not been recent documentation. However. no SFG Rickettsiosis had been considered to exist in Korea. Recently, new SFG rickettsiae have been isolated in all parts of the world. Since the isolation of R. japonica in Japan, SFG rickettsiae has been found outside of Japan, such as China, Thailand, and Russia. It is suggested that SFG rickettsiae exist in Korea through serological survey of febrile patients.
PCR assay of gltA gene was applied to detect SFG Rickettsia DNA from 100 ticks. 7 Haemaphysalis longicornis ticks were found positive in PCR amplification. The nucleotide sequence of 16S rRNA gene was determined from 5 ticks and compared to those of other Rickettsia strains. In the phylogenetic tree constructed using the UPGMA method. the 16S rRNA gene of 4 ticks (tick no. 36, 74, 76, and 77) formed a cluster with R. japonica YM and onr of 1 tick (tick no. 48) formed a cluster with R. rickettsii R These results suggest that the spotted fever group (SFG) rickettsiae exists in Korea.
The nucleotide sequences (534-546 bp) of the groEL gene, which encode the 60-kDa heat shock protein GroEL, from 16 Rickettsieae strains were detennined and compared. The phylogenetic tree by UPGMA method was constructed to investigate the relationships among Rickettsieae strains. Rickettsieae strains could be distinguished from Ehrlichia strains. Five SFG strains and four TG strains formed a cluster and separated from STG and Ehrlichia strains, respectively, Also, Six STG strains formed a cluster separated from Genus Rickettsia (SFG and TG) and Ehrlichia strains.
These results suggest that groEL DNA is useful for identification and characterization of Rickettsieae. In addition, we developed the rapid species identification method using the PCH-HFLP analysis, the species-specific PCR multiplex PCR, and nested PCR based on groEL gene sequences.

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...7
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...7
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...9
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...19
• 4. 사업화 목표 달성도 및 계획(개발과제만 해당)...20
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과...21
• 6. 연구개발결과의 파급효과...36
• 7. 첨부서류...36
• III. 제 O 세부연구개발과제 연구결과(세부과제별로 작성)...37
• 1. 제 O 세부연구개발과제 최종 연구개발 목표...37
• 2. 제 O 세부연구개발과제 연구대상 및 방법...37
• 3. 제 O 세부연구개발과제 최종 연구개발결과...37
• 4. 제 O 세부연구개발과제 연구결과 고찰 및 결론...37
• 5. 제 O 세부연구개발과제 연구성과...37
• 6. 참고문헌...37