초록 ▼

(1) 연구 목적
● 염증반응에서의 NF-kB signaing pathway의 역할 규명
● iNOS 및 COX-2 발현 억제 물질(B-carboline alkaloids, ergolide 등)의 NF-kB의 signalin pathway 억제 기전 연구 및 새로운 항염증제 개발
(2) 연구 방법
● Nuclear Location, Reporter gene assay를 통해 NF-kB 활성연구
● NIK transfection을 통해 NIK 활성 연구
● Western blot을 통해 다른신호전달체계

(1) 연구 목적
● 염증반응에서의 NF-kB signaing pathway의 역할 규명
● iNOS 및 COX-2 발현 억제 물질(B-carboline alkaloids, ergolide 등)의 NF-kB의 signalin pathway 억제 기전 연구 및 새로운 항염증제 개발
(2) 연구 방법
● Nuclear Location, Reporter gene assay를 통해 NF-kB 활성연구
● NIK transfection을 통해 NIK 활성 연구
● Western blot을 통해 다른신호전달체계연구
(3) 연구 결과
전사 조절 인자인 NF-kB는 cytokine, iNOS, COX-2, and adhesion molecule 등과 같은 면역 반응 관여하는 물질의 중요한 조절 인자로 알려져 왔고, 이러한 NF-kB 조절함으로써 여러 염증질환을 조절할수 있다는 가능성을 보고 하였다. 본실험에서는 이전 보고에서 iNOS 및 COX-2의 발현 억제에 효과를 보인 b-carboline alkaloid에 대한 NF-kB 신호전달체계의 조절 기능에 대하여 연구를 하였다.]
b-carboline alkaloid 는 LPS에 의해 유도된 NF-kB DNA 결합 능력을 농도 의존적으로 감소시킴을 EMSA 방법을 이용하여 확인하였으며, 이러한 NF-kB DNA 결합 능력이 NF-kB의 핵내로의 이 행을 억제함으로 일어남음 형광현미경출 이용하여 확인하였다. 또한 b-carboline alkaloid는 sesquiterpene lactone과는 다르게 NF-kB에 직접적으로 반응하여 억제하는 것이 아니라 NF-kB의 upsignaling pathway의 억제에 기인함을 EMSA와 형광현미경을 통하여 확인하였으며, IkB 분해 및 인산화를 억제하여 NF-kB의 활성을 억제시켰다. b-carboline alkaloid는 또한 iNOS 및 NF-kB promoter 활성을 농도 의존 적으로 억제시켰으며, IKK 활성또한 억제시켰다. 그러나 IKK 활성에 중요한 역할을 하는 IKK 인산화에는 영향을 주지 않았으며, 또한 MAPK family 인 Erk, p38에 대해서도 전혀 영향을 주지 못하였다. 이상의 결과로 미루어보아, b-carboline alkaloid는 IKK complex 활성에 영향을 주어 NF-kB 신호전달 체계를 억제하는 것으로 보여지며, 기존에 알려진 IKK upstream Kinas 의 억제를 통한 IKK phosphorylation 의 억제에 의한 것이 아닌 IKK complex내의 알려지지 않은 단백질의 활성조절이 IKK 활성 조절에 깊이 관여된다고 사료된다.

Abstract ▼

(1) Object of this study
ㆍ To identify the tole of NF-kB signaing pathway in inflammatory response
ㆍ To identify iNOS and COX -2 inhibitor′s effects on NF-kB signaling and to develope novel anti-inflammatory agent
(2) Methodsㆍ NF-kB activity using Nuclear Location, Reporter gene assay
ㆍ

(1) Object of this study
ㆍ To identify the tole of NF-kB signaing pathway in inflammatory response
ㆍ To identify iNOS and COX -2 inhibitor′s effects on NF-kB signaling and to develope novel anti-inflammatory agent
(2) Methodsㆍ NF-kB activity using Nuclear Location, Reporter gene assay
ㆍ Other signaling pathway using Western blotting
(3) Results
NF-kB transcription factors play an evolutionarily conserved and critical role in the triggering and coordination of both innate and adaptive immune responses. So, modulation of NF-kB activity and action should represent effective therapeutic strategies for inflammatory diseases such as arthritis, asthma, or autoimmunity that result from hyperactivation of otherwise beneficial immune responses. Therefore, there is intense interest in understanding the regulation of this transcription factor in the context of various diseases. Therefore, in present study, I investigated b-carbolind alkaloid, C-l isolated from M. azedarach for its poteintial therapeutic value by determining its effect NF-kB signaling pathways
NF-kB DNA binding activity was analysed by EMSA using an oligonucleotide containing the kB motif corresponding to the distal kB site present in the murine iNOS promoter. NF-kB activation exhibited a peak 1h after LPS challenge. The NF-kB activity was inhibited 65％ at 1h in the presence of 10 mM b-carboline alkaloid. In additon, NF-kB nuclear translocations were blocked by b-carboline alkaloid. Apart from sesquiterpene lactones, b-carboline alkaloid did not directly interfere with NF-kB activation. Treatment with b-carboline alkaloid decreased the iNOS and NF-kB promoter activities in a dose dependent manner. In addition, IkB degradation and phsophorylation were reduced by this compound and IKK activity was attenuated by b-carboline alkaloid in a dose dependent manner. However, IKK phosphorylation and MAPK family phosphorylation was not inhibited by b-carboline alkaloid. These results indacate that b-carboline alkaloid primaiy NF-kB DNA binding activity via the suppression of NF-kB nuclear tranlocations and that the inhibition of IkB degradation and phosphorylatoin may be associated with the inhibition of IKK activity. Since the inhibitory mechanism of NF-kB signaling pathway by b-carboline alkaloid was attenuatedIKK activity without IKK phosphorylation, there might be a possibility that some other regulatory proteins in IKK complex might exsit. Finally, further studies are in need to elucidate the mechanism of inhibitory effect IKK activity by b-carboline alkaloid in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...6
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...6
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...10
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...21
• 4. 사업화 목표 달성도 및 계획(개발과제만 해당)...22
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과...23
• 6. 연구개발결과의 파급효과...38
• 7. 첨부서류...38