초록 ▼

본 사업은 총 4개의 세부 실험으로 이루어져 있으며 다음과 같은 목적을 가지고 있다. 첫 번째는 A pleuropneumoniae에 자연감염 된 돼지의 폐장조직에서 iNOS와 COX-2의 발현을 알아보고 나아가서 흉막폐렴의 기전을 알아보고자 하며, 두 번째로는 A. pleuropneumoniae를 돼지에 실험 감염한 후에 돼지의 폐장에서 iNOS와 COX-2를 발현하는 세포와 그 활성정도를 확인하고자 하였으며, 세 번째로는 폐포대식세포를 이용하여 A. pleuropneumoniae에 감염되었을 경우에 iNOS와 COX-2의 발현이

본 사업은 총 4개의 세부 실험으로 이루어져 있으며 다음과 같은 목적을 가지고 있다. 첫 번째는 A pleuropneumoniae에 자연감염 된 돼지의 폐장조직에서 iNOS와 COX-2의 발현을 알아보고 나아가서 흉막폐렴의 기전을 알아보고자 하며, 두 번째로는 A. pleuropneumoniae를 돼지에 실험 감염한 후에 돼지의 폐장에서 iNOS와 COX-2를 발현하는 세포와 그 활성정도를 확인하고자 하였으며, 세 번째로는 폐포대식세포를 이용하여 A. pleuropneumoniae에 감염되었을 경우에 iNOS와 COX-2의 발현이 어느 정도 유도되는지를 실험실내에서 화인 해 보고자 하였으며, 대식세포에서 NO와 PG의 합성을 증가시키는 것으로 알려진 cytokine 등에 의해서 iNOS와 COX-2의 발현이 어느 정도 조절되는지 확인해 보고자 하였다. 그리고 iNOS를 억제하였을 경우 PC의 생산이 어느 정도 조절되는지 확인해 보고 COX-2의 억제가 NO의 생산에 어떤 영향을 미치는지를 돼지의 폐포 대식세포를 이용하여 알아보고자 하였다. 마지막으로는 A. pleuropneumoniae를 돼지에 실험감염하고 iNOS와 COX-2의 억제제를 조합하여 접종한 후에 생성되는 NO와 PG의 양을 측정하여 iNOS의 선택적 억제제가 NO 및 PG에 미치는 영향을 분석하고 COX-2의 선택적 억제제가 NO 및 PG에 미치는 영향을 알아보고자 하였다.세균배양을 통하여 흉막폐렴으로 확진된 15두의 돼지 폐장조직에서 조직내 교잡법과 면역염색법을 수행하여 COX-2 mRHA와 pretein을 검출하였으며, 이 조직을 연속절편하여 COX-2와 A. pleuropneumoniae에 대한 조직내 교잡법을 수행한 결과 서로 유사한 세포에서 양성 반응을 확인하였다. 본 실험의 수행결과, COX-2가 기관지와 세기관지 상피세포, 폐포대식서1포, 호중구, 그리고 type I pneumocyte에서 발현하며 이는 A. pleuropneumoniae와 관련되어 있다는 것을 확인할 수 있었다. 또한 COX-2에서 생산된 prostanoid가 급성과 만성 돼지 흉막폐렴에서 중요한 병인으로 작용함을 알 수 있었다.흉막폐렴에 자연감염 된 돼지 폐장조직의 폐포강 내와 그 주변조직에 존재하는 호중구에서 강한 nitrotyrosine 양성반응을 확인할 수 있었다. 이 조직을 연속절편하여 iNOS에 대한 면역염색을 수행한 결과 서로 유사한 부위에서 두 인자가 검출되어 세포-세포사이에 밀접한 상관관계가 있음을 알 수 있었다.

Abstract ▼

This project has 4 studios to evaluate the accurate pathogenesis of A. pleuropneumontae. The first, detect the expression of iNOS and COX-2 and study pathogenesis in naturally infected with A. pleuropneumoniae. The second, detect and measure the expression of iNOS, COX-2, NO and $PGE_2$ i

This project has 4 studios to evaluate the accurate pathogenesis of A. pleuropneumontae. The first, detect the expression of iNOS and COX-2 and study pathogenesis in naturally infected with A. pleuropneumoniae. The second, detect and measure the expression of iNOS, COX-2, NO and $PGE_2$ in experimentally infected with A. pleuropneumoniae with several methods. the third, detect and measure the expression of iNOS, COX-2, NO and $PGE_2$ in vitro, in alveolar macrophages in response to A. plzeuropneumoniae with cytokines or iNOS and COX-2 inhibitors. The fourth, detect and measure the expression of iNOS, COX-2, NO and $PGE_2$ in experimentally infected with A. pleuropneumoniae and evaluate the effect of iNOS and COX-2 specific inhibiter inoculation by measuring NO and $PGE_2$.All 15 pigs infected with A. pleuropneumoniae, confirmed by bacterial isolation, had distinct positive signals for COX-2 in bronchial, bronchiolar epithelial cells, alveolar macrophages, neutrophils, and type I pneumocytes by in-situ hybridization and immunohistochemistry. The results suggest that a prostanoid product of COX-2 is an important component of the inflammatory response to acute and chronic A. pleuropneumoniae infection. Intense immunostaining for nitrotyrosine residue was seen within the lung lesions from A. pleuropneumoniae-infected pigs. Staining was especially strong in neutrophils and macrophages in the periphery of the lesions and within the alveolar spaces. There was close cell-to-cell correlation when serial sections were examined by immunohistochemistry for iNOS and nitrotyrosine in each of 20 lung samples. iNOS expression in pleuropneumonic area is associated with protein nitrosation and suggests that iNOS is functionally active during infections caused by A. pleurepneumoniae. Intense immunolabelling for $NF-{\kappa}B$ and iNOS was seen within the lung lesions. Examination of serial sections from the 20 infected lung samples demonstrated a close association between $NF-{\kappa}$B and iNOS. This suggests that $NF-{\kappa}B$ plays a key role in triggering the activation of iNOS in porcine pleuropneumonia.

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...8
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...8
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...16
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...51
• 4. 총괄연구개발과제의 참고문헌...61
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과...68
• 6. 첨부서류...75