초록 ▼

◆ 연구 목적
1. 임상적으로 심근증으로 발전할 수 있는 심근염에 효과적인 치료법은 아직 없고,
2. 심근염 치료에 ,효과적인 cytokine 유전자 치료법은 거의 없으며,
3. 심근 경색 후 경색 부위의 세포 치료법은 아직 동물 실험 단계로 심장 기능 보존 또는 기능회복에 가장 효과적인 세포주는 아직 보고되지 않았다.
4. 심근질환의 동물 모델에서 cytokine 유전자 요법 개발
1) 심근염 동물모델에서 가장 효과적인 유전자 전달 요법을 확립하고,
2) 심근염 치료에 효과적인 cytokine 유전

◆ 연구 목적
1. 임상적으로 심근증으로 발전할 수 있는 심근염에 효과적인 치료법은 아직 없고,
2. 심근염 치료에 ,효과적인 cytokine 유전자 치료법은 거의 없으며,
3. 심근 경색 후 경색 부위의 세포 치료법은 아직 동물 실험 단계로 심장 기능 보존 또는 기능회복에 가장 효과적인 세포주는 아직 보고되지 않았다.
4. 심근질환의 동물 모델에서 cytokine 유전자 요법 개발
1) 심근염 동물모델에서 가장 효과적인 유전자 전달 요법을 확립하고,
2) 심근염 치료에 효과적인 cytokine 유전자를 발견하여, 그 효과를 증명하고
5. 심근 경색 부위의 기능 회복을 위한 세포이식 요법
1) 임상에서 사용 가능한 심근 경색 부위로의 세포 이식 기술을 확립하여
2) 심근 경색 모델에서 그 효과를 증명하여 임상에 적용할 수 있는 기술 확립
◆ 연구 방법
1. 심근염에서 유전자 요법
1) skeletal muscle electroporation 과 intracardiac injection 효과 비교
2) 대상 유전자 (sTNFR, viral interleukin-10,cardiotrophin-1)의 선정
3) 심근염 동물 모델에서 유전자 요법의 효과 확인
2. 심근경색 부위의 세포 이식 요법
1) cryoinjury 심근 경색 동물 모델 개발 / 이식 대상 세포주의 1차 배양 및 유전자 조작
2) 유전자 조작 skeletal myoblast 이식 후 세포생존 관찰
3) 심근 경색 부위의 세포이식 효과 관찰
4) 치료 유전자 sTNFR의 in vitro 효과 관찰

Abstract ▼

Background: 1) Tumor necrosis factor-a (TNF-a) is one of the major cytokines that modulate the immune response in viral myocarditis, but its role has not been well evaluated. We antagonized TNF-a using the expressed soluble p75 TNF receptor linked to the Fe portion of the human IgG1 gene (sTNFR:Fc)

Background: 1) Tumor necrosis factor-a (TNF-a) is one of the major cytokines that modulate the immune response in viral myocarditis, but its role has not been well evaluated. We antagonized TNF-a using the expressed soluble p75 TNF receptor linked to the Fe portion of the human IgG1 gene (sTNFR:Fc) by in vivo electroporation, and we evaluated its effects on experimental coxsackieviral myocarditis. 2) Cell therapy for treatment myocardial infarct model. we development rat myocardial infarct model, this model can be used cell therapy test and establish clinical therapeutic methods.
Methods and Results: 1) A plasmid DNA encoding sTNFRFc (15g/mouse) was injected into the gastrocnemius muscles of Balb/C male mice (n = 25, sTNFR:Fc mice) followed by electroporation. Control mice were injected with empty vector. After electroporation. the mice were infected with coxsackievirus 83. Serum levels of sTNFRFc increased from day 1 and peaked at day 4. The virus titers in the hearts of sTNFRFc mice were higher than those of controls during the first week. However, after day 12, the survival rates of sTNFRFc mice were significantly higher than those of controls (36% versus 0% at day 27, P < 0.01). Histopathological examination showed that the inflammation and myocardial necrosis were significantly decreased in sTNFR:Fc mice at day 12. 2) Cell therapy results of the skeletal myoblast not so good, because cell collection methods was not clear and characters of the collected cell type are much variable. Therefore, cell was injected in the myocardial infarct rat heart. the cell survival rates are very low(1-3%), heart function is not improved.
Conclusions: 1) Electroporation of skeletal muscle after plasmid DNA injection is an effective method of transferring this cytokine gene in vivo. 2) The expressed sTNFRFc can modulate the inflammatory process during the sub-acute phase of viral myocarditis, suggesting that endogenous TNF-a may playa differential role according to the stage of the disease. 3) Cell survival experiment of WEHI-VAR13, sTNFR was perfectly block of not only human but also mice TNF-a. The expressed sTNFR have a therapeutic effect

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...7
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...7
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...16
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...30
• 4. 사업화 목표 달성도 및 계획(개발과제만 해당)...31
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과...32
• 6. 연구개발결과의 파급효과...39
• 7. 첨부서류...40
• Ⅲ. 제 1 세부연구개발과제 연구결과...45
• 1. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...46
• 2. 제 1 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...50
• 3. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...52
• 4. 제 1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...62
• 5. 제 1 세부연구개발과제의 연구성과...64
• 6. 참고문헌...68
• Ⅲ. 제 2 세부연구개발과제 연구결과...70
• 1. 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...71
• 2. 제 2 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...72
• 3. 제 2 세부연구개발파제의 최종 연구개발결과...77
• 4. 제 2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...81
• 5. 제 2 세부연구개발과제의 연구성과...82
• 6. 참고문헌...86