초록 ▼

본 용역과제를 통하여 주요 식중독 세균의 보다 더 신속, 정확한 동정을 위하여 미생물시험법 개선에 필요한 기초자료를 확보하고자 다음과 같은 2개 분야에 대하여 연구를 수행하였음
1. PCR기술을 이용한 미생물 시험법 연구
○ 'PCR기술을 이용한 미생물시험법연구'와 관련하여 PCR기술을 이용하여 Bacillus cereus 등이 속해있는 B. cereus group을 non-B. cereus group으로부터 구별할 수 있는 시험법을 확립하고자 본 연구 과제를 수행하였음.
○ B. cereus를 비롯한 B. cere

본 용역과제를 통하여 주요 식중독 세균의 보다 더 신속, 정확한 동정을 위하여 미생물시험법 개선에 필요한 기초자료를 확보하고자 다음과 같은 2개 분야에 대하여 연구를 수행하였음
1. PCR기술을 이용한 미생물 시험법 연구
○ 'PCR기술을 이용한 미생물시험법연구'와 관련하여 PCR기술을 이용하여 Bacillus cereus 등이 속해있는 B. cereus group을 non-B. cereus group으로부터 구별할 수 있는 시험법을 확립하고자 본 연구 과제를 수행하였음.
○ B. cereus를 비롯한 B. cereus group에 속하는 균주들을 PCR을 이용하여 신속히 검출하고자 할 때 그 대상유전자로는 주로 virulence factor들과 non-virulence factor들의 유전자들이 이용되어져 왔음. 그러므로 그와 같은 factor들의 유전자들을 대상으로 하여 현재까지 개발된 PCR반응조건 등을 문헌상으로 검토한 후에 실험을 통하여 가장특이성이 있는 primer들을 사용하여 최적화된 PCR반응 조건을 확립하고자 하였음
○ 21종의 B. cereus group 표준균주들, 13종의 non-B. cereus group 표준균주들과 50종의 B. cereus 분리균주들을 대상으로 PCR을 수행하여 test한 18종의 primer set들중 최종적으로 groEL primer set가 B. cereus group을 확인할 수 있는 specific primer set로서 가장 적합한 것으로 선정되었음
○ Test한 50종의 B. cereus 분리균주들중 KFDA 229와 KFDA 250 분리균주가 emetic toxin 생성균주로 확인되었음
○ B. cereus group에 특이적인 groEL gene과 nheA gene의 primer set과 B. cereus emetic toxin 생성균주에 특이적인 ces primer set를 사용한 multiplex PCR반응방법을 확립하였음
○ 위와 같이 확립된 PCR반응방법들이 한국 식품공전의 기존 정량방법과 병행하여 사용될 수 있을 것으로 사료됨
2. 주요식중독균의 분리배지 타당성 연구
병원성 미생물의 검출을 위해 각국에서 사용하는 Standard Method가 있으며 우리나라에는 KFDA에서 제공하고 있음 선진국은 새롭고 다양하게 개발되고 있는 선택배지를 공인법으로 신속하게 등재하여 사용자의 선택의 폭을 넓혀주고 있음. 이번 연구의 목적은 현행 식품공전 상 식중독 미생물시험법 개정을 위해 현재 공전법과 시중에 유통되고 있는 다양한 식중독균 분리 배지의 타당성 조사에 있음
○ Broth Condition에서 5가지 식중독 세균 (Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus그리고 Staphylococcus aureus)의 다양한 분리 선택배지의 분리능에는 유의차가 없었음
○ Food Condition에서 위의 5가지 식 중독세균의 다양한 분리 선택배지의 분리능에는 약간의 통계적 유의차가 존재하였으나, 그 차가 미미하여 다양한 배지를 포괄해야하는 식품공전법에의 등재를 제안함
○ 미생물시험법을 좀 자세하고 실험자 입장에서 이해하기 쉽도록 flow chart 방식으로 제작하였으며, 각 미생물마다 분리배지 상의 집락형태, 확정시험의 예상되는 결과를 그림으로 나타내었음
그러므로 본 용역과제를 통하여 얻은 위의 연구결과들은 다음과 같이 활용될 수 있을 것으로 사료됨
○ "식품공전"의 식품미생물 시험법 개정의 근거 자료로 활용될 수 있음
○ 미생물검사의 정확성 및 신뢰도 향상을 위한 식품미생물 시험법 표준화에 필요한 기초 자료로 활용될 수 있음
○ 수입식품을 포함한 국내 유통중인 식품류에 대한 안전성 확보를 위한 대국민 홍보자료로 활용될 수 있음
○ 식품공전 개정(초안)을 언론 등에 홍보하여 개정(안)에 대한 식품산업체의 의견을 수렴할 예정임

Abstract ▼

This research service project was conducted for the two major fields below to give a definite report on the fundamental data, necessary to improve microbiological analytical manuals for more fast and accurate differentiation and identification of food-borne pathogenic bacteria.
1. Research on Mic

This research service project was conducted for the two major fields below to give a definite report on the fundamental data, necessary to improve microbiological analytical manuals for more fast and accurate differentiation and identification of food-borne pathogenic bacteria.
1. Research on Microbiological Analytical Manuals using PCR technology
○ For 'research on microbiological analytical manuals using PCR technology', this research project was conducted to establish microbiological analytical manuals to differentiate B. cereus group including B. cereus from non-B. cereus group using PCR technology.
○ The genes of virulence factors and non-virulence factors were mainly considered as target genes, when the bacteria belonging to B. cereus group including B. cereus are to be detected fast using PCR technology. Therefore, after collecting and evaluating the PCR reaction conditions targeting on the genes of those factors published up until now on various research papers, the optimized PCR reaction conditions were researched and established using the most specific PCR primers through experiments.
○'Primer set groEL' among the evaluated 18 primer sets was determined to be the most specific primer set to differentiate B. cereus group including B. cereus after PCR reactions were carried out on 21 B. cereus group reference strains, 13 non-B. cereus group reference strains and 50 B. cereus isolated strains.
○ Isolated strains KFDA 229 and KFDA 250 were identified as emetic toxin-producing strains among the 50 B. cereus isolated strains.
○ Multiplex PCR reaction conditions were established using primer sets for groEL gene and nheA gene specific to B. cereus group and 'primer set ces' specific to emetic toxin-producing E. cereus strains.
○ The established PCR reaction conditions described above were considered to be used side by side with the current quantitative methods of Korea food code.
2, Research on Validity of Differentiation Media of Major Food-borne Pathogenic Bacteria
Their own standard methods are used in each country for detection of pathogenic microorganisms and KFDA provides our own for our country. Developed countries provide users with various options by registering various newly developed differentiation or selective media as official media fast enough. The purpose of this research is to evaluate validity of various differentiation media of food-borne pathogens, registered on food code and commercially distributed on our market, for eventual revisions of analytical manuals for food-borne pathogens on current food code.
○ There is no significant difference on differentiation abilities of various identification/selection media for five food-borne pathogenic bacteria (Salmonella spp., Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, and Staphylococcus aureus) under 'broth condition'.
○ There is a few significant differences on the abilities of the media for the same five food-borne pathogenic bacteria under 'food condition'. But the differences were insignificant, so that registrations of various media on food code can be proposed.
○ Flow charts of microbiological analytical manuals were produced to describe more details and to help experimenters to understand the manual more easily, and colony morphologies and expected definitive test results for each bacteria were also depicted on the charts.
Therefore, the above research results generated by this research service project are considered to be applied as described below.
○ They can be used as supportive data to revise microbiological analytical manuals of "food code".
○ They can be used as fundamental data necessary for standardizing the manual to improve accuracy and reliability of microbiological detections.
○ They can be used as publicity data for the general public to secure safety of foods including imported foods distributed in our domestic market.
○ Public opinions will be collected from our food Industry after making revision (first draft) of food code public through mass media.

목차 Contents

• 제 출 문...1
• 목 차...2
• I. 연구개발결과 요약문...3
• 식품공전 식품미생물 시험법 개선...3
• Improvement of Microbiological Analytical Manuals of Food Code...4
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...5
• 제 1 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...5
• 제 2 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...11
• 제 3 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...13
• 제 4 장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...17
• 제 5 장 총괄연구개발과제의 연구성과...20
• 제 6 장 기타 중요변경사항...22
• 제 7 장 참고문헌...23
• 제 8 장 첨부서류...25
• III. 제 1 세부연구개발과제 연구결과 (세부과제별로 작성)...26
• 제 1 장 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...27
• 제 2 장 제 1 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...32
• 제 3 장 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...33
• 제 4 장 제 1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...49
• 제 5 장 제 1 세부연구개발과제의 연구성과...53
• 제 6 장 기타 중요변경사항...55
• 제 7 장 참고문헌...56
• 제 8 장 첨부서류...59
• III. 제 2 세부연구개발과제 연구결과 (세부과제별로 작성)...60
• 제 1 장 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...61
• 제 2 장 제 2 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...64
• 제 3 장 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...68
• 제 4 장 제 2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...94
• 제 5 장 제 2 세부연구개발과제의 연구성과...95
• 제 6 장 기타 중요변경사항...97
• 제 7 장 참고문헌...98
• 제 8 장 첨부서류...100