초록 ▼

1. 설사성패류독소 분석법 확립을 위하여 마우스 복강 투여법, LC-MS법, ELISA법, 형광 HPLC법을 대표적인 5종의 표준품 독소(okadaic acid(OA), dinophysisstoxin-1(DTX1), pectenotoxin-2 (PTX2), pectenotoxin -6(PTX6), yessotoxin(YTX)와 이들을 무독 패류의 가식부에 첨가하여 분석방법, 회수율, 감도등을 검토하였으며, 새로운 방법으로 마우스 검사법의 개량과 LC-MS/MS법을 검토하였다.
2. 3월부터 9월까지 매월 살아있는 굴, 진주담치

1. 설사성패류독소 분석법 확립을 위하여 마우스 복강 투여법, LC-MS법, ELISA법, 형광 HPLC법을 대표적인 5종의 표준품 독소(okadaic acid(OA), dinophysisstoxin-1(DTX1), pectenotoxin-2 (PTX2), pectenotoxin -6(PTX6), yessotoxin(YTX)와 이들을 무독 패류의 가식부에 첨가하여 분석방법, 회수율, 감도등을 검토하였으며, 새로운 방법으로 마우스 검사법의 개량과 LC-MS/MS법을 검토하였다.
2. 3월부터 9월까지 매월 살아있는 굴, 진주담치, 반지락, 개조개, 가리비(또는 피조개) 등을 통영에서 구입하여(총 6종 35점) 이들 방법을 적용하여 독성을 조사하였다.
3. 마우스 검사법은 지용성 마우스 치사 성분 확인이 가능하지만 시간이 길고, 독소별 정량이 불가, 저감도(검출 한계 0.05 MU/g)이고, YTX는 회수율이 낮았다. hexane으로 탈지한 개량법은 중성지방 제거에 효과가 있었다. 3월 굴과 진주담치에서 0.05 $Mu/g{\sim0}.1$ MU/g의 독성이 검출되었으나, 개량법으로 굴에서는 독성이 없었으며, 다른 방법에서 독소가 검출되지 않아 설사성패류독소가 아닌 것으로 확인되었다.
4. 개별 성분 정량이 가능한 ELISA 법과 형광 HPLC법은 중장선에서 특정성분(OA, DTX1, YTX)만 분석 가능하며, 가식부에서 감도와 회수율이 낮았다. LC-MS나 LC-MS/MS법은 전처리가 간단하고, 모든 독성분의 동시 분석이 가능하고, 감도가 좋으며(검출한계 5ng/g) 분석 시간도 20분 이내로 패류독소 모니터링에 가장 적합한 분석법으로 판단되었다.
5. LC-MS/MS법으로 6월 진주담치에서 일반적인 기준치$(0.2{\mu}g/g)$ 이하인 극미량의 DTX1$(0.05{\mu}g/g)$, 8월 모든 패류에서는 OA가 검출되어$(0.01-0.02{\mu}g/g)$ 위생상 안전하였다.
6. 기억상실성패류독의 분석법 비교를 위하여 마우스 검사법, HPLC법, ELISA법, LC/MS법을 비교 검토한 결과, 마우스 검사법은 감도가 낮고 특이성이 없어 사용이 곤란하였다. ELISA법은 사용이 간단하나, 시료의 전처리에 시간이 많이 걸리고 숙달된 테크닉을 요하는 단점이 있었다. HPLC법은 전처리와 분석이 간단하고, 방해물질이 없으며, 회수율 90% 이상, 검출한계 0.1 ppm으로 일반적인 monitoring에 가장 적합한 방법으로 판단되었다. 의심스런 피크의 확인에는 LC-MS로 동정하는 것도 가능하였다.
7. 패류 중 기억상실성패류독 모니터링을 위하여 3월부터 10월까지 매월 1회씩 5개 도시(서울, 부산, 대구, 대전 광주)에서 유통 중인 국내산과 수입산 패류, 동해안과 서해안의 양식장에서 각각 패류 시료를 채취하여 HPLC법으로 분석하고, LC-MS로 동정하였다. 총 29종 409점(국내산 22종 198점, 수입산 21종 144점, 동해안 양식장 12종 33점, 서해안 양식장 10종 34점)을 HPLC로 분석한 결과, 4개의 패류(7월)에서 기억상실성패류독이 검출(검출율 0.98%)되었으며, LC-MS에 의하여 동정하였다. ASP의 함량은 서울 동죽(수입산)이 4.13ppm, 서울 비단조개(수입산)이 3.02ppm, 대전 동죽(국내산)이 1.99ppm, 대구 동죽(국내산)이 1.94ppm으로 미국이나 일본의 규제치인 20pp이하로 식품위생학적으로 안전하였다.

Abstract ▼

1. For the establishment of determination method of diarrhetic shellfish poisons(DSP), Mouse bioassay(MBA), HPLC, LC-MS and ELISA method were studied with standard DSP(Okadaic acid, OA, Dinophysistoxin-1, DTX1, Pectenotoxin-2.PTX2, Pectenotoxin-6, PTX6, Yessotoxin,YTX) added to non-toxic shellfishes

1. For the establishment of determination method of diarrhetic shellfish poisons(DSP), Mouse bioassay(MBA), HPLC, LC-MS and ELISA method were studied with standard DSP(Okadaic acid, OA, Dinophysistoxin-1, DTX1, Pectenotoxin-2.PTX2, Pectenotoxin-6, PTX6, Yessotoxin,YTX) added to non-toxic shellfishes. And also, tried improve of MBA and LC-MS/MS method.
2. 6 species of shellfishes(Oyster, Mussel, Scallop, Ark shell, Short necked clam and Purplish washington clam) were purchased from Tongyeong Fisheries market every month(March - September, total 35), and tested for DSP as above mentioned methods.
3. MBA can to confirm all ether soluble toxins having mouse toxicity, but can`t determine individual toxin, low sensitive(detection limit: 0.05 MU/g), bad recovery in YTX. Improved MBA which had defatted with hexane, can be able to reduce residue, showed good results. Mussel, collected at March, showed toxic to mice, but detected no toxins in other methods means not DSP.
4. Although, ELISA, HPLC method, having specificity, but, can determinate only OA, DTX1 or YTX in hepatopancreas, and, inadaptable to edible part due to having interfering materials. LC-MS(LC-MS/MS) is most probable method which can be able to determine all toxins, simultaneously within 20 min. and showed good recovery(90%<) and sensitivity(detection limit 5 ng/g) with simple pretreatment. trace amount of DTX1$(0.05{\mu}g/g)$ in Mussel(June) and OA $(0.01-0.02{mu}g/g)$ in all shellfishes(August) were detected by LC-MS/MS.
5. For the comparison of determination method of Amnesic shellfish poisons(ASP), Mouse bioassay (MBA), HPLC, ELISA and LC/MS method were studied with standard ASP, and confirmed ASP detected from shellfish with LC-MS. MBA can`t be used as determinating method of ASP due to low sensitivity and specificity. ELISA kit was simple but, was taken long time for pre-treating of sample and needed to skillful technique. HPLC is the most probable method to determinate ASP due to simple pre-treatment, high sensitivity (detection limit, I ppm), good recovery (90%<). LC-MS is very useful to confirm ASP.
6. For the monitoring of ASP in shellfishes, domestic and imported shellfishes were purchased at the market in 5 cities (Seoul, Busan, Daejeon, Gwangju, Daegu) and culturing farms (East, West Sea), every month (March-October) and determinated with HPLC and confirmed with LC-MS. Total 29 species 409 samples (Domestic 22 sp. 198 samples, Imported 23 sp. 144 samples, Farm in East Sea 12 sp. 33 samples, Farm in West Sea 10 sp. 34 samples) were analysed by HPLC and detected ASP in only 4 samples (detection ratio, 0.98%) in July. Contents of ASP (confirmed by LC-MS) were trace compared to quarantine level (20 ppm) of America and Japan, and safe as follows. Imported Surf clam (Seoul), 4.13 ppm; imported Pink butterfly shell (Seoul), 3.02 ppm; Domestic Surf clam(Daejeon), 1.99 ppm; Domestic Surf clam(Daegu), 1.94ppm.

목차 Contents

• II. 총괄연구개발과제 연구결과...7
• 제 1 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...9
• 제 2 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...23
• 제 3 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...36
• 3.1 설사성패류독 분석법 확립...36
• 3.2 기억상실성 패류독 분석법 비교 및 실태조사...55
• 제 4 장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...73
• 4.1 설사성패류독 분석법 확립...73
• 4.2 기억상실성 패류독 분석법 비교 및 실태조사...81
• 제 5 장 총괄연구개발과제의 연구 성과...87
• 제 6 장 기타중요변경사항...88
• 제 7 장 참고문헌...89
• 제 8 장 첨부서류...90
• III. 제 1 세부연구개발과제 연구 결과...91
• 제 1 장 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...93
• 제 2 장 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...103
• 제 3 장 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...113
• 제 4 장 제 1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...145
• 제 5 장 제 1 세부연구개발과제의 연구 성과...152
• 제 6 장 기타중요변경사항...153
• 제 7 장 참고문헌...154
• 제 8 장 첨부서류...155
• IV. 제 2 세부연구개발과제 연구 결과...157
• 제 1 장 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...159
• 제 2 장 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...165
• 제 3 장 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...173
• 제 4 장 제 2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...197
• 제 5 장 제 2 세부연구개발과제의 연구 성과...205
• 제 6 장 기타중요변경사항...206
• 제 7 장 참고문헌...207
• 제 8 장 첨부서류...208
• 총괄 연구 과제 요약...209
• 제 1 세부연구과제 요약...211
• 제 2 세부연구과제 요약...213