초록

1차년도(2004년)
병원성 세균/바이러스로부터 항원 유전자의 조작
어류 병원성 세균의 형질전환 기술 최적화
2차년도(2005년)
재조합 백신 개발 및 기능 평가
경구투여 효과 및 현장 적용 가능성 1차 평가
3차년도(2006년)
다기능/다목적 재조합 표면 발현 경구백신 개발
최종 최적 백신 개발 및 방어 기능의 헌장 적용성 평가

Abstract ▼

Year (2004)
Molecular cloning and characterization of candidate antigenic genes
Optimization of transformation of pathogenic bacterium concerned
Year (2005)
Development and evaluation of recombinant vaccine
Development of oral delivery method of recombinant vaccines
Year (2006)

Year (2004)
Molecular cloning and characterization of candidate antigenic genes
Optimization of transformation of pathogenic bacterium concerned
Year (2005)
Development and evaluation of recombinant vaccine
Development of oral delivery method of recombinant vaccines
Year (2006)
Surface-targeted multi-functional vaccines
Evaluation of efficacy and function of oral vaccine for fish farms

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 요약문...3
• SUMMARY...4
• CONTENTS...5
• 목차...8
• 제1장 연구개발과제의 개요...11
• 제1절 연구개발의 필요성...11
• 제2절 연구개발의 목표...13
• 제2장 국내외 기술개발 현황 및 과학기술정보...14
• 제3장 연구개발 수행내용 및 결과...16
• 제1절 연구 범위...16
• 제1항 병원성 세균 및 바이러스 유전자의 분리 및 분석...16
• 제2항 병원성 목적 세균 E. tarda의 형질전환 조작...16
• 제3항 재조합 E. tarda ghost 유도 기술 개발...16
• 제4항 항원 탑재를 위한 표면발현 시스템 구축...16
• 제5항 외래항원의 ghost 박테리아 표면 발현 기술 개발...16
• 제6항 개발 백신의 어체 방어 능력 평가...17
• 제7항 재조합 다기능 백신의 유효능 및 안전정 최적화...17
• 제8항 재조합 다기능 백신의 대량 발현, pilot scale 평가 및 현장 적용성 평가...17
• 제2절 연구 재료 및 방법...18
• 제1항 병원성 세균 및 바이러스 유전자의 분리 및 분석...18
• 제2항 병원성 목적 세균 E. tarda의 형질전환 조작...22
• 제3항 재조합 E. tarda ghost 유도 기술 개발...25
• 제4항 항원 탑재를 위한 표면발현 시스템 구축...32
• 제5항 외래항원의 ghost 박테리아 표면 발현 기술 개발...36
• 제6항 개발 백신의 어체 방어 능력 평가...40
• 제7항 재조합 다기능 백신의 유효능 개선 및 안전성 최적화...47
• 제8항 재조합 다기능 백신의 대량 발현, 방어능 재평가 및 현장 적용성 평가...94
• 제3절 연구 결과...99
• 제1항 병원성 세균 및 바이러스 유전자의 분리 및 분석...99
• 가. Edwardsiella tarda 유전자 분리 및 분석...99
• 나. Marine Birna Virus(MABV) 유전자의 분리 및 분석...102
• 제2항 병원성 목적 세균 E. tarda의 형질전환 조작...106
• 가. 형질전환 조건 평가...106
• 나. 형질전환 벡터 backbone 평가 및 기타 조건의 최적화...108
• 다. 형질전환 지속 안전성 평가...109
• 제3항 재조합 E. tarda ghost 유도 기술 개발...110
• 가. Ghost 유도용 벡터 구축...110
• 나. 대장균에서의 ghost 발현 작동 여부 평가...111
• 다. E. tarda에서의 ghost 발현 작동 여부 평가...112
• 라. 용해 유전자(lysis gene) 및 발현 조절 부위의 최적화...112
• 마. 대장균 및 E. tarda에서의 lysis 재조합 유전자 발현 특징 평가...116
• 바. Ghost 효율 및 생존력 평가...119
• 제4항항원 탑재를 위한 표면발현 시스템 구축...120
• 가. InaK 단백질 표면 발현 신호를 이용한 발현 벡터...120
• 나. OMP 단백질 구조를 이용한 표면 발현 벡터...122
• 다. E 단백질 작동 기작을 이용한 표면 발현 벡터...138
• 제5항 외래 단백질의 ghost 박테리아 표면 발현 기술 개발...140
• 가. 대장균 ghost 박테리아에서 외래 단백질의 표면 발현...140
• 나. E. tarda ghost 박테리아에서 외래 단백질의 표면 발현...143
• 제6항 개발 백신의 어체 방어 능력 평가...144
• 가. 어체 면역 유도능력 및 방어능력 평가...144
• 나. 경구 백신 처리 및 방어 기능 평가...147
• 제7항 재조합 다기능 백신의 유효능 개선 및 안전성 최적화...153
• 가.항시 고발현 유용 프로모터로의 개선 및 최적화...153
• 나. Nuclease A를 이용한 플라스미드 및 염색체 DNA 제거 기술 개발...163
• 다. 다기능 재조합 백신 발현 벡터의 최적화 구성...166
• 제8항 재조합 다기능 백신의 대량 발현, 방어능 재평가 및 현장 적용성 평가...182
• 가. 재조합 백신의 대량 발현 최적화...182
• 나. Pilot scale 및 현장에서의 경구 백신 평가...190
• 제4장 연구개발 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...195
• 제1절 연구개발 목표 달성도...195
• 제2절 관련 분야 기여도...196
• 제5장 연구개발 결과의 활용계획...197
• 1. 개발된 기술을 이용, 시제품 제작을 위한 제품화 연구 추진...197
• 2. 희망 양식장들을 대상으로 한 백신 효과 확대 검증 연구 추진...197
• 3. 보다 유효할 것으로 판단되는 연관 질병원들에 대한 다기능 백신 확대 개발 연구 추진...197
• 4. 참여 기업 등 희망 기업과의 실용화 추진...197
• 5. 신규 발굴된 고활성 발현 계의 기타 재조합 단백질 발현 계로의 추가 확대 개발...197
• 6. 학술 논문, 지적재산권 및 참여 기업 기술 지도/이전 추진...197
• 제6장 참고문헌...202
• 부록 (Appendix) - E. tarda 항원 후보 유전자들의 염기서열 -...204
• 부록 (Appedix) - E. tarda 로부터 분리된 프로모터 활성 DNA 염기서열 목록 -...216