초록 ▼

본 과제는 아데노바이러스 벡터 대량배양시 발생되는 야생형 바이러스 (Replication competent adenovirus)의 출현을 억제시키기 위해서 재조합 DNA기술을 이용함으로서 재조합 아데노바이러스 생산세포주를 개발함과 동시에 효율적인 세포의 대량배양기술과 아데모바이러스의 정제기술 개발을 하는 것이다. 이를 위해 재조합 유전자의 발현을 유도하는 최소한 영역인 E1 factor를 지니고 있는 생산세포주를 분리배양하여 재조합 아데노바이러스의 생산력을 측정하고 야생형바이러스의 생성억제능력 메카니즘을 실험을 통해 확인하는 것이다

본 과제는 아데노바이러스 벡터 대량배양시 발생되는 야생형 바이러스 (Replication competent adenovirus)의 출현을 억제시키기 위해서 재조합 DNA기술을 이용함으로서 재조합 아데노바이러스 생산세포주를 개발함과 동시에 효율적인 세포의 대량배양기술과 아데모바이러스의 정제기술 개발을 하는 것이다. 이를 위해 재조합 유전자의 발현을 유도하는 최소한 영역인 E1 factor를 지니고 있는 생산세포주를 분리배양하여 재조합 아데노바이러스의 생산력을 측정하고 야생형바이러스의 생성억제능력 메카니즘을 실험을 통해 확인하는 것이다. 또한 바이러스 벡터는 배양된 세포를 통해서 생산할 수 있으므로 우선적으로 해결해야 할 과제가 세포의 대량배양법 개발이다. 부착성 세포의 대량배양시에는 단위면적당 세포부착 표면적을 증가시킬 수 잇는 미립담체(microcarriers)를 이용함으로서 생산규모의 확장성을 용이하게 하고 배양조건을 조절하는 장점이 있다. 상기한 비와 같이 대량배양으로 생산된 벡토를 초원심불리 및 크로마토그래피법을 적용한 정제법을 개발하여 벡터의 생산공정을 완성하는 것이다.

Abstract ▼

In gene therapy, adenovirus bector is extensively used as gene-delivery vehicles and further large-scale process of this vector will be increasingly important. This report examined microcarrier cell culture systems with respect to the production of a adenovirus vector. Cytodex 3 solid microcarriers

In gene therapy, adenovirus bector is extensively used as gene-delivery vehicles and further large-scale process of this vector will be increasingly important. This report examined microcarrier cell culture systems with respect to the production of a adenovirus vector. Cytodex 3 solid microcarriers and Cultisphers S/G were found to be able to provide good cell growth and high-titer vector production in suspension culture system. and also this report relates to adenovirus E1-complementing cell line which significantly reduce the presence of replication competent Ad(RCA). Currently, the preferred host for the production of earlty-1(E1)-deleted recombinant adenoviruses is 293HEK cell line, which was generated by transformation of human kidney cells by sheared adenovirus serotype 5 DNA. To develop alternative hosts for the production of recombinant adenovirus, we generated adenovirus-transformed Hela cell line using a plasmid harboring eatly 1(E1) gene only.

목차 Contents

• 제1장 연구개발과제의 개요...10
• 제1절 연구개발의 경제.사회.기술적 중요성...10
• 제2절 연구개발 목적 및 필요성...13
• 제2장 국내외 기술개발 현황...17
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...20
• 제1절 연구추진전략 및 방법...20
• 제2절 연구내용 및 결과...22
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...35
• 제1절 기술적 측면...35
• 제2절 경제.산업적 측면...35
• 제5장 연구개발결과의 활용계획...37
• 제1절 경제적인 측면...37
• 제2절 사회.기술적인 측면...38