초록 ▼

신규 표면 발현계를 확립하고 병원체 항원 발현기술을 확립하였다. 표면 발현계로 그람음성 및 양성세균에 모두 사용할 수 있도록 Bacillus subtilis에서 r-PGA synthetase를 구성하는 pgsBCA motif를 개발하였다. 이를 이용하여 B형 감염바이러스 S유전자, 로타바이러스의 VP6, PED, TGE 바이러스의 N protein 유전자를 발현하여 표면 발현을 확인하였다. 또한 동물실험을 통해 경구 및 비강 등 점막 투여 후 장내 항체 형성능을 확인하였다. 항원 표면발현 유익세균의 경구투여를 통해 질병예방을 위한

신규 표면 발현계를 확립하고 병원체 항원 발현기술을 확립하였다. 표면 발현계로 그람음성 및 양성세균에 모두 사용할 수 있도록 Bacillus subtilis에서 r-PGA synthetase를 구성하는 pgsBCA motif를 개발하였다. 이를 이용하여 B형 감염바이러스 S유전자, 로타바이러스의 VP6, PED, TGE 바이러스의 N protein 유전자를 발현하여 표면 발현을 확인하였다. 또한 동물실험을 통해 경구 및 비강 등 점막 투여 후 장내 항체 형성능을 확인하였다. 항원 표면발현 유익세균의 경구투여를 통해 질병예방을 위한 기본 결과를 도출하였다. 바이러스 유사입자 제조를 위해서는 AIDS의 원인체인 HIV-1의 gag, env 단백질 유전자를 SFV replicon에 단일 백터로 삽입하여 진핵세포에서 발현하고 immature와 mature 한 HIV 유사입자를 제조하였다. 또한 동물실험을 통해 항체 형성 및 CTL 유도 결과를 도출하였다. 이는 새로운 AIDS 백신을 후보물질로 사용될 수 있다. 항원이 다량발현 및 HCV 구조 단백 유전자를 발현하고 발현 단백질의 특성분석을 통해 core, E1, E2의 단백질현 및 processing 여부를 확인하였으며, RNA와의 assembly를 통해 HCV유사 입자 제조를 확인하였다. 이 또한 새로운 백신 형태로 면역원성을 유도한다. SFV replicon을 이용하여 다양한 항원의 동일 세포 내에서 동시 발현체계를 구축하였다.

Abstract ▼

We established a new surface display system for the antigen presentation. For the surface display in both Gram negative and positive bacteria, r-PGA synthetase from Bacilus subtilis was cloned and pgs BCA motif was identified. The HBsAg, VP6 of rotavirus and N protein genes of TGEV and PEDV were clo

We established a new surface display system for the antigen presentation. For the surface display in both Gram negative and positive bacteria, r-PGA synthetase from Bacilus subtilis was cloned and pgs BCA motif was identified. The HBsAg, VP6 of rotavirus and N protein genes of TGEV and PEDV were cloned into the pgsBCA motif as the fusion gene and their expressions on the surface of E. coli, Salmonella sp, and Lactobacillus casei were identified and confirmed. After intranasal and per oral inoculations of live bacteria containing these antigens on the surface, the immunogenicity of the surface-anchored antigen was examined and identified by ELISA and FACS analysis. We established a basic mucosal (oral) vaccine system using the new surface-display system. For the virus-like particle production, the gag and env genes of HIV-1 were cloned into SFV replicon vector. The immature and mature virion according to the presence of proteinase were produced in the culture supernatant and characterized by the electronmicroscopy and western blot analysis. This VLP could be a new vaccine candidate against AIDS in future. We have also produced a lot of HCV structural proteins in Saccharomyces cerevisiae. The secreted protein in the cytosol using chicken lysozyme signal peptide were harvested and characterized by western blot analysis, For in vitro assembly as the HCV-like particle, RNA was added and the produced VLPs were examined by electron microscopy. This is also a new vaccine candidate against hepatitis C virus infection. We also produced the new SFV replicon for the multiple protein expression in the same single cell.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 보고서 초록...3
• 요약문...4
• SUMMARY...9
• CONTENTS...10
• 제1장 연구개발과제의 개요...11
• 제1절 연구개발의 개요...11
• 제2절 연구개발의 최종 목표...12
• 제3절 연구개발의 필요성...13
• 1. 연구개발의 경제${\cdot}$사회${\cdot}$기술적 중요성...13
• 제2장 국내외 기술개발 현황...16
• 제1절 국외의 기술 동향 및 수준...16
• 1. 표면발현기술이용...16
• 2. 점막면역계...16
• 3. 점막항원 전달계...16
• 제2절 국내의 기술 동향 및 수준...17
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...18
• 제1절 신규 세포표면 발현계 확립 및 항원 발현기술개발...18
• 1, 빙핵활성단백질(INP)을 이용한 세포표면 발현 시스템의 최적화...18
• 2. 신규 표면발현 motif의 발견 및 표면 발현 백터 제조...28
• 제2절 다가항원 발현 및 전달 체계 개발...38
• 1. 알파바이러스를 이용한 3종 이상의 다가항원 발현 체계 구축...38
• 제3절 원형 바이러스 유사입자 발현 체계 구축...43
• 1. 알파 바이러스계 발현체계를 이용한 HIV 바이러스 유사입자 발현...43
• 2. Yeast에서의 바이러스 항원 발현 및 유사입자 제조...58
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...67
• 제1절 계획대비 목표 달성도...67
• 1. 1차년도...67
• 2. 2차년도...67
• 제5장 연구개발결과의 활용계획...69
• 1. 신규표면 발현 벡터의 경구백신 활용성...69
• 2. 다가항원 및 단백질 발현체계의 활용성...69
• 3. 원형 바이러스 유사입자 발현...70
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...71
• 제7장 참고문헌...72