초록 ▼

국내 분리 장내바이러스의 전제 유전자의 분석하여 신속한 진단법을 확립하고, Chimeric enterovirus의 제조를 통하여 심근염 유발 바이러스인 CBV3의 병인론을 규명하고, 단백질 분해 효소와 RNA의존성RNA중합효소의 클로닝과 발현을 통해 치료방향 제시와 예방기술을 확립하고자 하였다.

국내에서 유행하는 장내바이러스를 지속적으로 확보하고, 유행을 주도하는 주요 분리주의 경우 전체 게놈 분석을 실시하였다. 특히 본 연구에서는 확장성 심근염을 유발한다고 알려져 있는 coxsackievirus B3(CVB3)의 심장

국내 분리 장내바이러스의 전제 유전자의 분석하여 신속한 진단법을 확립하고, Chimeric enterovirus의 제조를 통하여 심근염 유발 바이러스인 CBV3의 병인론을 규명하고, 단백질 분해 효소와 RNA의존성RNA중합효소의 클로닝과 발현을 통해 치료방향 제시와 예방기술을 확립하고자 하였다.

국내에서 유행하는 장내바이러스를 지속적으로 확보하고, 유행을 주도하는 주요 분리주의 경우 전체 게놈 분석을 실시하였다. 특히 본 연구에서는 확장성 심근염을 유발한다고 알려져 있는 coxsackievirus B3(CVB3)의 심장독력 병인론 규명을 위하여 감염성 cDNA을 확보한 후, 심장독력의 변화를 분석함으로써 병원성 결정인자의 유전학적 특성에 대한 명백한 증거를 확보하였다. 또한 일반적으로 장내바이러스의 RNA 복제 및 단백질 해독 효율을 결정하고, IRES의 2차원적 구조 분석 및 inter-strain chimeric 바이러스 제작을 통하여 IRES 구조가 바이러스의 증식에 미치는 영향을 분석하였다.
또한 장내바이러스 진단의 경우 신속한, 정확한 진단을 위하여 RT-PCR법이 극히 일부에서 제한적으로 사용되고 있으나 위음성 결과를 배제할 수 있는 standard RNA를 제작하여 RT-PCR법을 광범위하게 사용할 수 있게 하였다.
장내바이러스가 가지는 다양한 단백질 분해효소가 숙주세포의 침입 후 바이러스 단백질 assembly 과정에 어떠한 활성을 가지며 작용하는지에 대한 연구는 아직 확립되어있지 않다. 또한 바이러스 RNA 게놈의 복제과정에 관여하는 RNA 의존성 RNA 중합효소의 특성을 분석하고, 여러 발현 시스템 이용하여 재조합 단백질을 생산한다. 단백질 분해효소와 RNA 의존성 RNA 중합효소의 활성을 저해하는 방법을 이용하여 바이러스 증식 억제 물질 탐색이 가능하게 하였다.

국내에서 유행하는 장내바이러스의 연구는 아직까지 매우 기초적인 수준이라 할수 있다. 이번 연구를 통하여 국내에서 유행하는 장내바이러스들의 유전자 분석 및 이들 데이터베이스를 구축 하였고, 또한 이 자료를 바탕으로 바이러스의 병원성을 일으키는 인자에 대하여 추정하였다. 그리고 감염성 cDNA 제조와 Chimeric 바이러스를 이용하여 병원성을 일으키는 인자에 대하여 확인하였다.
국내 유행 장내바이러스의 신속한 진단방법을 실용화 시킬 수 있도록 Standard RNA를 제조하였으며, 장내바이러스의 공통항원이라고 생각되는 유전자 부위를 클로닝 하여 일차적으로 항원성을 확인 하였고, 원핵세포 및 진핵세포에서 발현시킨 동일한 단백질의 항원성을 비교하는 것이 필수적이므로 진핵생물 발현 체계를 통하여 post-translational modification이 이루어진 항원의 항원성을 분석하였다.
또한 단백질 분해효소와 RNA 의존성 RNA 중합효소를 클로닝과 발현을 통하여 예방물질 탐색과 바이러스 질환의 치료에 중요한 기초 자료를 제공하였다.

Abstract ▼

1. Establishment of rapid diagnosis by genetic analysis of Korean isolates
2. Investigating virulence factor of CVB3 which cause viral myocarditis by construction of chimeric virus and infection to mouse model.
3. Suggesting therapeutic tools by cloning and expressing of proteolytic enzyme and

1. Establishment of rapid diagnosis by genetic analysis of Korean isolates
2. Investigating virulence factor of CVB3 which cause viral myocarditis by construction of chimeric virus and infection to mouse model.
3. Suggesting therapeutic tools by cloning and expressing of proteolytic enzyme and RNA dependent NA polymerase(RdRp) for establishing antioviral drug screening system

We gathered continuously and achieved analysis of Korean epidemic enterovirus. In this study, especially for finding out the virulence factor of coxackievirus B3(CVB3) which's known for cause of viral-myocarditis, we've obtained infectious cDNA and analyzed the varieties of cardiac toxic factors. By this, finally we found out the conclusive evidence of viruluence factors' hereditary features. In addition, we've confirmed influence of IRES' structure to viral growth by deciding RNA-genome replication / genomic translation efficiency, analysis of IRES' 2-dimensional structure and making inter-strain chimeric virus. Now, for rapid diagnosis of enterovirus, RT-PCR method's used restrictedly but it can misread the positive to pulse-negative. So we made standard RNA for accurate and extensive diagnosis.
We still can't know mechanism about various acting of enterovirus' proteolytic enzyme during processing of protein assemble We've also analyzed characters of RdRp which takes part in genomic replication and produced recombinant protein by several expression system. It's possible to explore the inhibitor of viral growth by interrupt way of proteolytic enzyme and RdRp acting.

The researching of Korean endemic enterovirus is still basic level. In this study, we've achieved genetic analysis and established the database of the Korean endemic enterovirus. By this data, we could make the infectious cDNA and presume the viral virulence factors of enteroviruses by Chimeric virus.
We made "the Standard RNA" for rapid diagnosis of Korean enterovirus and identified the antigenicity by cloning of genomic region which's thought of common epitope. Finally because it's necessary to compare the same proteins' antigenicities which're expressed on eukaryotic and prokaryotic cells, we analyzed antigenicity of antigen which achieved the post-translational modification. Conclusively, by proteolytic enzyme and cloning / expression RdRp, we've offered the important informations of preventing and treatment of this disease.

목차 Contents

• 연구계획 요약문...3
• 1. 국문요약문 ...3
• 연구결과 요약문...4
• 1. 국문요약문 ...4
• 2. 영문요약문 ...5
• 연구내용 및 결과...6
• Ⅰ. 국내 분리 장내바이러스의 전체 게놈 확보 ...6
• Ⅱ. 장내바이러스성 질환의 진단법 확립 ...12
• Ⅲ 심근염 유발 바이러스(CVB3)의 병인론 규명 ...22
• Ⅳ 바이러스의 5‘NCR의 구조 분석을 통한 단백질 합성 효율 분석 ...36
• Ⅴ. 장내바이러스 단백질 분해효소와 RNA 복제 효소의 클로닝 및 기능 탐색 ...42
• 연구실적 ...59