초록 ▼

(1) LMO 도입유전자의 2*10 copies까지 검출가능한 LMO 분석용 DNA chip 제작
(2) 단백질 칩을 이용한 미량의 LMO target 단백질 검출 가능성을 확인
(3) LM-벼의 내재유전자로 SPS와 RBE4의 발굴
(4) SPS와 RBE4를 사용하여 슈퍼벼의 정성 및 정량 PCR 방법을 개발
(5) LM 콩 Roundup Ready의 정량을 위해 SYBR Green I을 사용한 real-time PCR 방법을 개발
(6) 가공효과가 LMO 도입유전자 단백질에 미치는 영향을 분석
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(1) LMO 도입유전자의 2*10 copies까지 검출가능한 LMO 분석용 DNA chip 제작
(2) 단백질 칩을 이용한 미량의 LMO target 단백질 검출 가능성을 확인
(3) LM-벼의 내재유전자로 SPS와 RBE4의 발굴
(4) SPS와 RBE4를 사용하여 슈퍼벼의 정성 및 정량 PCR 방법을 개발
(5) LM 콩 Roundup Ready의 정량을 위해 SYBR Green I을 사용한 real-time PCR 방법을 개발
(6) 가공효과가 LMO 도입유전자 단백질에 미치는 영향을 분석
(7) TPSP 단백질에 대한 항체를 제작 및 indirect ELISA 및 western blot으로 분석 가능성을 확인
(8) 2년간에 걸칠 가공식품의LMO 혼입 모니터링으로 일부 LMO 혼입 검출
(9) 농산물 원료 분석을 위한 흐름도의 완성 및 기기 및 인력을 확보
(10) 도입유전자의 위치분석을 위한 inverse PCR을 슈퍼벼에 성공적으로 적용하였고, GenomeWalker와T-linker PCR도도입
(11) 도입유전자의 copy 수 분석을 위한 Southern blotting 과정을 완성
(12) 도입유전자의 LM 작물내 발현의 분석을 위한 northern blotting, RT-PCR, 단백질 정량 방법 등을 적용하여 슈퍼벼와 LM-수박공대에서 도입유전자 발현 분석
(13) Bip-L promoter을 이용하여 SM gene 제거용 벡터를 제작하고 이를 이용한 애기장대와 담배에서 SM gene 제거에 성공
(14) 개발된 유전자분석능력을 슈퍼벼의 도입유전자의 위치, copy 수, 발현 등의 특성 분석에 현장적용

Abstract ▼

Methods for molecular genetics analyses of LMOs were introduced and developed. These include techniques for the determination of chromosomal location and copy number of the inserted transgenes and for the analysis of expression of the transgene. The techniques were applied to analyze the trehalose-6

Methods for molecular genetics analyses of LMOs were introduced and developed. These include techniques for the determination of chromosomal location and copy number of the inserted transgenes and for the analysis of expression of the transgene. The techniques were applied to analyze the trehalose-6-phosphate synthase/phosphatase (TPSP) fusion (TPSP)-transformed rice, which was developed in Korea and exhibits super tolerance to various environmental stresses.
Quantitative and qualitative detection methods for the monitoring of the imported LMOs were developed. These include the development of DNA/protein chip for the detection of LMOs, qualitative PCR, real-time DNA quantitative PCR with TaqMan probes and SyBR Green I, enzyme-linked immunosorbent assay. Related to the detection methods, an effort was made to obtain endogenous reference gene for qualitative and real-time quantivative PCR detection of rice. The developed detection methods were applied in order to monitor the LMOs in the markets. We also developed up-to-date techniques for the elimination of selection markers that have substantial problems which are not scientifically proved yet. The techniques were applied to eliminate the SM gene in the LM Arabidopsis and tobacco.

목차 Contents

• 제 1 장 연구개발과제의 개요...17
• 제 1 절 연구개발의 목적...17
• 제 2 절 연구개발의 필요성...17
• 1. 기술적 측면...17
• 2. 경제$\cdot$산업적 측면...18
• 3. 사회$\cdot$문화적 측면...19
• 제 3 절 연구개발의 범위...19
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...21
• 제 1 절 연구사례의 조사...21
• 1. 외국의 경우...21
• 2. 국내의 경우...22
• 제 2절 조사연구개발사례에 대한 평가...23
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...25
• 제 1 절 LMO 탐지를 위한 유전자 분석기술 및 기법개발...25
• 1. LMO 분석용 DNA chip 시제품 개발...25
• 2. Protein chip에 의한 LMO 검출법 개발...38
• 3. Real time PCR을 이용한 정량분석 기술 개발...49
• 4. SYBR Green I을 사용한 Round-up Ready 콩 정량 분석 기술 개발...68
• 5. LMO 정량분석을 위한 standard로써 genomic DNA와 plasmid DNA의 비교 분석...81
• 6. 콩 및 옥수수를 포함하는 다양한 가공식품의 정성 및 정량 검출기법 분석...84
• 제 2 절 농산물 원료분석시험의 표준화...97
• 1. PCR 시험에 의한 분석제반 여건 분석...97
• 2. 표준 시험조건 확립 표준화 및 대량시료 분석능력 확보 등...100
• 제 3 절 LMO 작물의 유전자도입에 따른 분자적 특성 분석...102
• 1. 도입유전자의 도입위치 분석...102
• 2. 도입유전자의 copy 수 분석시험...103
• 3. 도입유전자/단백질 발현도 측정 및 신규 ORF의 생성 여부...103
• 4. 단백질 발현도의 정량적 측정...106
• 제 4 절 식물형질전환용 환경친화적인 생리적 선발 가능 vector 개발...121
• 1. 전단계 연구결과의 요약...121
• 2. SM gene 제거용 벡터의 제작...122
• 3. 애기장대에서 SM gene 제거...127
• 4. 담배에서의 SM gene 제거...130
• 5. 담배에서의 Co-transformation method에 의한 SM gene 제거...133
• 제 5 절 국내개발 LM-벼(환경스트레스내성 슈퍼 벼)의 유전자분석 평가 지원...139
• 1. 평가 흐름도에 따른 도입유전자 특성 분석 평가 현황...139
• 2. 기초평가...139
• 2. 도입유전자의 식물체내 동태 평가...149
• 제 6 절 LMO 유전자분석 기술의 표준화...155
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...157
• 1. 목표달성도 요약...157
• 2. 연구개발의 최종목표...157
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...162
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...163
• 제 7 장 참고문헌...164
• 첨부 1. Standard operating procedures...166