보고서 정보
주관연구기관 |
경상대학교 산학협력단 |
연구책임자 |
정덕화
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2009-04 |
과제시작연도 |
2008 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
연구관리전문기관 |
식품의약품안전청 |
등록번호 |
TRKO201000000426 |
과제고유번호 |
1475004085 |
사업명 |
의약품등안전관리 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
생약.곰팡이독소.오크라톡신.제랄레논.Medical herbs.mycotoxin.ochratoxin.zearalenone.
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초록
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본 과제에는 기기분석을 이용하여 생약 속 ochratoxin A(OTA) 및 zearalenon(ZEA)에 대한 분석법을 확립하였으며, 확립된 분석법에 대하여 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 검출한계 및 정량한계 등 밸리데이션을 실시하였다. 그 결과 OTA와 ZEA은 각각 6.5분과 3.7분경에 표준물질과 음성시료에 각 표준물질을 임의로 오염시킨 시료에서 모두 동일한 시간대에 peak를 보여 다른 방해물질 없이 특이적으로 분리되는 것을 확인할 수 있었다. OTA와 ZEA의 직선성은 상관계수($R^2$)가 각각
본 과제에는 기기분석을 이용하여 생약 속 ochratoxin A(OTA) 및 zearalenon(ZEA)에 대한 분석법을 확립하였으며, 확립된 분석법에 대하여 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 검출한계 및 정량한계 등 밸리데이션을 실시하였다. 그 결과 OTA와 ZEA은 각각 6.5분과 3.7분경에 표준물질과 음성시료에 각 표준물질을 임의로 오염시킨 시료에서 모두 동일한 시간대에 peak를 보여 다른 방해물질 없이 특이적으로 분리되는 것을 확인할 수 있었다. OTA와 ZEA의 직선성은 상관계수($R^2$)가 각각 0.9949와 0.9995로 나타나 분석에 효과적인 것으로 확인되었으며, 분석범위는 OTA의 경우 괄루인을 비롯한 두충, 복분자, 숙지황, 신이 등 생약에서 0.3~2000 ng/g, ZEA은 5~2000 ng/g으로 나타났다. 또한 정확성 및 정밀성을 측정하기 위해 OTA는 2, 5, 10 ng/g 농도로, ZEA은 100, 200, 500 ng/g 농도로 각 시료에 오염시켜 분석한 결과, 정확성은 괄루인의 경우 각각 105.1~108.5%와 83.7~95.5%, 두충은 105.8~116.4%와 81.9~99.7%, 복분자는 82.0~109.3%와 79.1~82.3%, 숙지황은 78.7~104.6%와 81.3~106%, 그리고 신이는 100.8~108.5%와 76.6~93.1%로 나타났으며, 정밀성은 괄루인이 각각 0.7~3.0%와 0.6~4.4%, 두충은 0.9~1.9%와 0.4~2.6%, 복분자는 1.2~2.3%와 1.0~2.7%, 숙지황은 0.4~1.4%와 0.8~2.9%, 그리고 신이는 0.5~1.8%와 1.3~4.3%로 확인되었다. 또한, 적용된 모든 시료에 대하여 OTA와 ZEA의 검출한계는 각각 0.3 ng/g과 5 ng/g, 정량한계는 0.5 ng/g과 8 ng/g으로 확인되어 확립된 분석법은 OTA와 ZEA을 분석하기에 적합한 것으로 확인되었다. 다른 한편으로 확립된 분석법을 기초로 기질별 생약에 대하여 탕제방법(상압과 고압)과 수침의 사용유무 등에 따라 탕액으로 OTA와 ZEA의 이행률을 실시하였다. 그 결과 대부분 생약에서 상압으로 조제한 탕액이 고압상태로 조제한 탕액보다 곰팡이독소(OTA와 ZEA)의 이행률이 상대적으로 높았으며, 1시간 동안 수침(담금)과정을 거친 탕액이 비수침을 적용한 탕액보다 비교적 높은 이행률을 보였다. HPLC 분석결과에서 OTA와 ZEA에 대한 양성시료의 재확인을 위해 LC/MS/MS 분석조건을 확인하였다. 본 연구를 통해서 확립된 OTA와 ZEA에 대한 분석법 확립 연구로만 그치지 말고 모니터링 연구사업 등 종합적인 연구수행을 지속적이고 체계적으로 실시하여 체계적인 국가 관리가 필요할 것으로 생각된다.
Abstract
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This project conducted to establish analysis method of mycotoxins(ochratoxin A and zearalenone in herbal medicine) by HPLC and to measure ones transfer ratios from unprocessed medical herbs to the medical herb extract. First, the detection procedures of HPLC for the two mycotoxins in five selected m
This project conducted to establish analysis method of mycotoxins(ochratoxin A and zearalenone in herbal medicine) by HPLC and to measure ones transfer ratios from unprocessed medical herbs to the medical herb extract. First, the detection procedures of HPLC for the two mycotoxins in five selected medical herbs named Rubi Fructus, Trichosanthis Semen, Magnoliae Flos, Rehmaniae Radix Preparata and Eucommiae Cortex were validated. Blended medical herb samples were extracted with 70% MeOH containing 1% Na2HCO3 for OTA analysis and 80% MeOH for ZEA analysis, respectively. The extracts were diluted with PBS containing 2% Tween and applied to immunoaffinity column before HPLC analysis. Lineahties (R2) of the methods were 0.9949 for OTA and 0.9995 for ZEA. From the medical herbs spiked at 2, 5 and 10 ng/g for OTA and 100, 200 and 500 ng/g for ZEA in triplicate, average recoveries (accuracy) for OTA were from 78.7 to 116.4% with the standard deviations of 0.5 to 4.8, and average recoveries for ZEA ranged from 76.6 to 106.0% with standard deviations of 1.6 to 6.1. Relative standard deviations (Precision) were from 0.4 to 3.0 for OTA and from 0.4 to 4.4 for ZEA. Detection limits were 0.3 ng/g for OTA and 5 ng/g for ZEA, and quantitative limits were 0.5 ng/g for OTA and 8 ng/g for ZEA. Analytical detection ranges of HPLC were 0.3 to 2000 ng/g and 5 to 2000 ng/g for OTA and ZEA, respectively. The validated detection methods for the two mycotoxins showed to be accurate and precise, so the could be useful for monitoring the natural occurrence of these mycotoxins in medical herbs.
In addition we checked a transfer ratio of mycotoxin from raw medical herbs to the herbal medicine extracts. The medical extracts were prepared by boiling and autoclave with raw medical herbs with or without saturation for 1 h. Transfer ratio of mycotoxin by boiling was higher than that by autoclave, and transfer ratio of mycotoxin by saturation was higher than that without saturation. In addition, optimal analysis condition of LC/MS/MS was established to confirm positive samples detected by HPLC for OTA and ZEA.
목차 Contents
- 표 지...1
- 용역연구개발과제 최종보고서...2
- 제 출 문...3
- 목 차...4
- I . 총괄연구개 발과제 요약문...6
- 1. 국문요약문...6
- 2. Summary...8
- II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...10
- 제 1 장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ...10
- 제 2 장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ...24
- 제 3 장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ...33
- 제 4 장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...76
- 제 5 장 총괄주요연구 변경사항 ...78
- 제 6 장 총괄참고문헌 ...78
- 제 7 장 총괄첨부서류 ...83
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